Mikra_1-10 (2)



Микробиология — наука, изучающая строение, жизнедеятельность и экологию микроорганизмов — мельчайших форм жизни растительного или животного происхождения, не видимых невооруженным глазом. Микробиология изучает всех представителей микромира (бактерии, грибы, простейшие, вирусы). По своей сути микробиология является биологической фундаментальной наукой. Для изучения микроорганизмов она использует методы других наук, прежде всего физики, биологии, биоорганической химии, молекулярной биологии, генетики, цитологии, иммунологии. Как и всякая наука, микробиология подразделяется на общую и частную. Общая микробиология изучает закономерности строения и жизнедеятельности микроорганизмов на всех уровнях — молекулярном, клеточном, популяционном; генетику и взаимоотношения их с окружающей средой. Предметом изучения частной микробиологии являются отдельные представители микромира в зависимости от проявления и влияния их на окружающую среду, живую природу, в том числе человека. К частным разделам микробиологии относятся: медицинская, ветеринарная, сельскохозяйственная, техническая (раздел биотехнологии), морская, космическая микробиология.
 Объект изучения микробиологии - бактерии, а также определенные группы дрожжеподобных и мицелиальных грибов, микроскопические водоросли, простейшие. Народнохозяйственное значение состоит в использовании микроорганизмов для: борьбы с вредителями, болезнями человека, животных и растений; повышения плодородия почв, силосования кормов, получения гормонов, витаминов, полисахаридов, антибиотиков, белка, белково-витаминных добавок, аминокислот, ферментов, вакцин, моноклональных антител и др. 
Медицинская микробиология - рассматривает свойства патогенных и условно -
патогенных микробов , их роль в развитие инфекционного процесса и иммунного
ответа , разрабатывает методы лабораторной диагностики и специфической
профилактики и терапии инфекционных заболеваний .

Основные этапы развития микробиологии и имунологии.
Историю развития микробиологии можно разделить на пять этапов: эвристический, морфологический, физиологический, иммунологический и молекулярно-генетический.
АНТОНИЙ ЛЕВЕНГУК (1632 — 1723), купец по профессии, который стал крупнейшим натуралистом своего времени. Овладев искусством шлифования стекол, он изготовил линзы, которые давали большие увеличения. С их помощью Левенгук обнаружил мельчайших «живых зверьков» animalculaevivae в дождевой воде, зубном налете, загнившем мясе и других предметах. Свои наблюдения он обобщил в книге «Тайны природы, открытые Антонием Левенгуком». (1695 г.)
Он создал микроскоп и первые рисунки бактерий из зубного налета (1676 г.)
Пастер сделал ряд выдающихся открытий. За короткий период с 1857 по 1885 г. он доказал, что брожение (молочнокислое, спиртовое, уксуснокислое) не является химическим процессом, а его вызывают микроорганизмы; опроверг теорию самозарождения; открыл явление анаэробиоза, т.е. возможность жизни микроорганизмов в отсутствие кислорода; заложил основы дезинфекции, асептики и антисептики; открыл способ предохранения от инфекционных болезней с помощью вакцинации.
Многие открытия Л. Пастера принесли человечеству огромную практическую пользу. Путем прогревания (пастеризации) были побеждены болезни пива и вина, молочнокислых продуктов, вызываемые микроорганизмами; для предупреждения гнойных осложнений ран введена антисептика; на основе принципов Л. Пастера разработаны многие вакцины для борьбы с инфекционными болезнями.
Однако значение трудов Л. Пастера выходит далеко за рамки только этих практических достижений. Л. Пастер вывел микробиологию и иммунологию на принципиально новые позиции, показал роль микроорганизмов в жизни людей, экономике, промышленности, инфекционной патологии, заложил принципы, по которым развиваются микробиология и иммунология и в наше время.
Л. Пастер был, кроме того, выдающимся учителем и организатором науки.
Работы Л. Пастера по вакцинации открыли новый этап в развитии микробиологии, по праву получивший название иммунологического.
Принцип аттенуации (ослабления) микроорганизмов с помощью пассажей через восприимчивое животное или при выдерживании микроорганизмов в неблагоприятных условиях (температура, высушивание) позволил Л. Пастеру получить вакцины против бешенства, сибирской язвы, куриной холеры; этот принцип до настоящего времени используется при приготовлении вакцин. Следовательно, Л. Пастер является основоположником научной иммунологии, хотя и до него был известен метод предупреждения оспы путем заражения людей коровьей оспой, разработанный английским врачом Э. Дженнером. Однако этот метод не был распространен на профилактику других болезней.
Роберт Кох. Физиологический период в развитии микробиологии связан также с именем немецкого ученого Роберта Коха, которому принадлежит разработка методов получения чистых культур бактерий, окраски бактерий при микроскопии, микрофотографии. Известна также сформулированная Р. Кохом триада Коха, которой до сих пор пользуются при установлении возбудителя болезни.

После работ Л. Пастера появилось множество исследований, в которых пытались объяснить причины и механизмы формирования иммунитета после вакцинации. Выдающуюся роль в этом сыграли работы И. И. Мечникова и П. Эрлиха.
Исследования И. И. Мечникова (1845—1916) показали, что большую роль в формировании иммунитета играют особые клетки — макро- и микрофаги. Эти клетки поглощают и переваривают чужеродные частицы, в том числе бактерии. Исследования И. И. Мечникова по фагоцитозу убедительно доказали, что, помимо гуморального, существует клеточный иммунитет. И. И. Мечников, ближайший помощник и последователь Л. Пастера, заслуженно считается одним из основоположников иммунологии. Его работы положили начало изучению иммунокомпетентных клеток как морфологической основы иммунной системы, ее единства и биологической сущности.
Д.И.Ивановский (1864— 1920) открыл вирусы — представителей царства vira. Один из основоположников вирусологии. Впервые открыл проходящий через бактериологические фильтры возбудитель табачной мозаики, названный впоследствии вирусом. Труды по фитопатологии и физиологии растений.
Гамалея - выдающийся микробиолог. Вместе с И. И. Мечниковым в 1886 году организовал в Одессе первую в России бактериологическую станцию. Автор многих работ по микробиологии и иммунологии (по профилактике холеры, чумы, оспы, паразитарных тифов, бешенства). Открыл бактериолизины, возбудители холеры птиц. Обосновал значение дезинсекции для ликвидации сыпного и возвратного тифов. В 1888 году ученый издал книгу "О прививках против сибирской язвы".
Здровский (1890-1976 года), российский микробиолог, иммунолог и эпидемиолог, академик АМН. Исследования по проблемам тропических болезней, бруцеллеза и др. Под руководством Здродовского разработаны методы вакцинации против столбняка, дифтерии и др. инфекций. Автор книги "Учение о риккетсиях и риккетсиозах"
Смородинцев, российский вирусолог и иммунолог. Труды по этиологии и профилактике гриппа, энцефалитов и др. вирусных инфекций. Совместно с М. П. Чумаковым разработал и внедрил вакцину против полиомиелита.
Ермольева, российский микробиолог. Получила первые отечественные образцы антибиотиков - пенициллина, стрептомицина и др.; интерферона.
Жданов, российский вирусолог. Труды по вирусным инфекциям, молекулярной биологии и классификации вирусов, эволюции инфекционных болезней.Чумаков принял участие в научной экспедиции в Хабаровский край организованной Львом Александровичем Зильбером. Совместно с другими участниками экспедиции Чумаков исследовал природу вновь открытого инфекционного неврологического заболевания названного клещевым энцефалитом, и впервые выделил вызывающий его вирус.

Бактериальная клетка состоит из клеточной стенки, цитоплазматической мембраны, цитоплазмы с включениями и ядра, называемого нуклеоидом. Имеются дополнительные структуры: капсула, микрокапсула, слизь, жгутики, пили. Некоторые бактерии в неблагоприятных условиях способны образовывать споры.
Клеточная стенка. В клеточной стенке грамположительных бактерий содержится небольшое количество полисахаридов, липидов, белков. Основным компонентом толстой клеточной стенки этих бактерий является многослойныйпептидогликан (муреин, мукопептид), составляющий 40-90 % массы клеточной стенки. С пептидогликаном клеточной стенки грамположительных бактерий ковалентно связаны тейхоевые кислоты (от греч. teichos— стенка).
В состав клеточной стенки грамотрицательных бактерий входит наружная мембрана, связанная посредством липопротеина с подлежащим слоем пептидогликана. На ультратонких срезах бактерий наружная мембрана имеет вид волнообразной трехслойной структуры, сходной с внутренней мембраной, которую называют цитоплазматической. Основным компонентом этих мембран является бимолекулярный (двойной) слой липидов. Внутренний слой наружной мембраны представлен фосфолипидами, а в наружном слое расположен липополисахарид.
Функции клеточной стенки:1. Обусловливает форму клетки.2. Защищает клетку от механических повреждений извне и выдерживает значительное внутреннее давление.3. Обладает свойством полупроницаемости, поэтому через нее избирательно проникают из среды питательные вещества.4. Несет на своей поверхности рецепторы для бактериофагов и различных химических веществ.
Метод выявления клеточной стенки - электронная микроскопия, плазмолиз.
L-формы бактерий, их медицинское значениеL-формы - это бактерии, полностью или частично лишенные клеточной стенки (протопласт +/- остаток клеточной стенки), поэтому имеют своеобразную морфологию в виде крупных и мелких сферических клеток. Способны к размножению.
Цитоплазматическая мембрана располагается под клеточной стенкой (между ними - периплазматическое пространство). По строению является сложным липидобелковым комплексом, таким же, как у клеток эукариот (универсальная мембрана).
Функции цитоплазматической мембраны:1. Является основным осмотическим и онкотическим барьером.2. Участвует в энергетическом метаболизме и в активном транспорте питательных веществ в клетку, так как является местом локализации пермеаз и ферментов окислительногофосфорилирования.3. Участвует в процессах дыхания и деления.4. Участвует в синтезе компонентов клеточной клетки (пептидогликана).5. Участвует в выделении из клетки токсинов и ферментов.
Цитоплазматическая мембрана выявляется только при электронной микроскопии.
Капсула. Клеточная стенка многих бактерий сверху окружена слоем слизистого материала — капсулой. Толщина капсулы может во много раз превосходить диаметр самой клетки, а иногда она настолько тонкая, что ее можно увидеть лишь через электронный микроскоп, — микрокапсула.
Капсула не является обязательной частью клетки, она образуется в зависимости от условий, в которые попадают бактерии. Она служит защитным покровом клетки и участвует в водном обмене, предохраняя клетку от высыхания.
По химическому составу капсулы чаще всего представляют собой полисахариды. Иногда они состоят изгликопротеидов (сложные комплексы сахаров и белков) и полипептидов (род Bacillus), в редких случаях — из клетчатки (род Acetobacter).
Слизистые вещества, выделяемые в субстрат некоторыми бактериями, обусловливают, например, слизисто-тягучую консистенцию испорченного молока и пива.
Между плазматической мембраной и клеточной стенкой имеется связь в виде десмозов — мостиков. Цитоплазматическая мембрана часто дает инвагинации — впячивания внутрь клетки. Эти впячивания образуют в цитоплазме особые мембранные структуры, названные мезосомами. Некоторые виды мезосом представляют собой тельца, отделенные от цитоплазмы собственной мембраной. Внутри таких мембранных мешочков упакованы многочисленные пузырьки и канальцы. Эти структуры выполняют у бактерий самые различные функции. Одни из этих структур — аналоги митохондрий. Другие выполняют функции зндоплазматической сети или аппарата Гольджи. Путем инвагинации цитоплазматической мембраны образуется также фотосинтезирующий аппарат бактерий. После впячивания цитоплазмы мембрана продолжает расти и образует стопки (табл. 30), которые по аналогии с гранулами хлоропластов растений называют стопками тилакоидов. В этих мембранах, часто заполняющих собой большую часть цитоплазмы бактериальной клетки, локализуются пигменты (бактериохлорофилл, каротиноиды) и ферменты (цитохромы), осуществляющие процесс фотосинтеза.
,
В цитоплазме бактерий содержатся рибосомы— белок-синтезирующие частицы диаметром 200А. В клетке их насчитывается больше тысячи. Состоят рибосомы из РНК и белка. У бактерий многие рибосомы расположены в цитоплазме свободно, некоторые из них могут быть связаны с мембранами.
Рибосомы являются центрами синтеза белка в клетке. При этом они часто соединяются между собой, образуя агрегаты, называемые полирибосомами или полисомами.
Ядерный аппарат. В центральной части клетки локализовано ядерное вещество — дезоксирибонуклеиновая кислот а (ДНК).
,
У бактерий нет такого ядра, как у высших организмов (эукариотов), а есть его аналог — «ядерный эквивалент» — нуклеоид, который является эволюционно более примитивной формой организации ядерного вещества. Микроорганизмы, не имеющие настоящего ядра, а обладающие его аналогом, относятся к прокариотам. Все бактерии — прокариоты. В клетках большинства бактерий основное количество ДНК сконцентрировано в одном или нескольких местах. В клетках эукариотов ДНК находится в определенной структуре — ядре. Ядро окружено оболочкой— мембраной.
У бактерий ДНК упакована менее плотно, в отличие от истинных ядер; нуклеоид не обладает мембраной, ядрышком и набором хромосом. Бактериальная ДНК не связана с основными белками — гистонами — ив нуклеоиде расположена в виде пучка фибрилл.
Жгутики. На поверхности некоторых бактерий имеются придаточные структуры; наиболее широко распространенными из них являются жгутики — органы движения бактерий.
Жгутик закрепляется под цитоплазматической мембраной с помощью двух пар дисков. У бактерий может быть один, два или много жгутиков. Расположение их различно: на одном конце клетки, на двух, по всей поверхности и т. д. Жгутики бактерий имеют диаметр 0,01—0,03 мкм, длина их может во много раз превосходить длину клетки. Бактериальные жгутики Состоят из белка — флагеллина — и представляют собой скрученные винтообразные нити.
На поверхности некоторых бактериальных клеток имеются тонкие ворсинки — фимбрии.

Это важный и обязательный структурный элемент большинства про кариотных клеток, который располагается под капсулой или слизистым чехлом или непосредственно контактирует с окружающей средой. На долю клеточной стенки приходится от 5 до 50 % сухого вещества клетки. Это прочная, упругая структура, служащая механическим барьером между протопластом и внешней средой, придающая клеткам определенную, при сущую им форму и поддерживающая высокое осмотическое давление в клетке.Концентрация солей в клетке, как правило, намного выше, чем в окружающей среде, и поэтому между ними существует большое различие в осмотическом давлении. Клеточная стенка механически защищает клетку от проникновения в нее избытка воды, то есть сдерживает высокое осмотическое давление в клетке. Она участвует в процессе деления клетки и транспорте метаболитов.Клеточная стенка прокариот резко отличается от таковой у эукариот как по строению, так и по химическому составу. Она содержит специфические полимерные комплексы, которые остутствуют в других структурах клетки. Химический состав и строение клеточной стенки постоянны для определенного вида и являются важным признаком при идентификации.В зависимости от строения клеточной стенки прокариоты, относя щиеся к бактериям, делятся на две большие группы. В 1884 г. датский ученый Х. Грам предложил метод окраски (впоследствии этот метод стали на зывать «окраска по Граму»), в результате которого бактерии делятся на грамположительные (синефиолетовый) и грамотрицательные (красный цвет).Если фиксированные бактерии окрасить сначала кристаллическим фиолетовым, а затем йодом, то образуется окрашенный комплекс (генциа новый фиолетовый в комплексе с йодом). В зависимости от строения кле точной стенки при последующей обработке спиртом этот комплекс либо удерживается, либо вымывается. Если бактерии остаются с сине фиолетовой окраской, то это свидетельствует о том, что обработка окра шенного по Граму мазка бактерий спиртом вызывает сужение пор в пептидогликане и тем самым задерживает краску в клеточной стенке. То есть бактерии окрашиваются грамположительно.Наоборот, грамотрицательные бактерии после воздействия спиртом утрачивают краситель, обесцвечиваются и при обработке фуксином окра шиваются в красный цвет вследствие меньшего содержания пептидоглика на (1-10 % массы клеточной стенки). В состав клеточной стенки бактерий входят семь различных групп химических веществ Клеточные стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий резко различаются по химическому составу и по ультраструктуре.У грамположительных бактерий клеточная стенка толще (от 20 до 80 нм), чем у грамотрицательных, и пептидогликан (синонимы муреин, мукопептид) составляет основную массу ее вещества (от 40 до 90 %). Под электронным микроскопом она выглядит как гомогенный электронно плотный слой.Пептидогликан представлен параллельно расположенными молекуламигликана, состоящего из остатков Nацетилглюкозамина и N ацетилмурамовой кислоты, соединенных гликозидной связью (цв. вклейка, рис. III).Гликановые молекулы связаны поперечной пептидной связью. От сюда название этого полимера пептидогликан. Основу пептидной связи составляют тетрапептиды, состоящие из чередующихся L и D аминокислот, например LаланинDглутаминовая кислота мезодиаминопимелиновая кислота D-аланин. В пептидогликанеграмположительных бактерий вместо мезодиаминопимелиновой кислоты часто содержится L-диаминопимелиновая кислота или лизин. Элементы гликана (ацетилглюкозамин и ацетилмурамовая кислота) и аминокислоты тетрапептида (мезо диаминопимелиновая и D-глутаминовая кислоты, D-аланин) являются от личительной особенностью бактерии, поскольку отсутствуют у животных и человека.Пептидогликанковалентносвязан с тейхоевыми кислотами (от греч. teichos стенка). Это уникальный класс химических соединений, пред ставляющих собой полимеры, построенные на основе рибита (пятиатомно го спирта), остатки которого соединены между собой фосфодиэфирными связями. Поскольку это длинные линейные молекулы, они пронизывают весь слой пептидогликана, достигая поверхности клеточной стенки, и являются основными антигенами грамположительных бактерий. Остающиеся свободные гидроксилы фосфорной кислоты придают тейхоевой кислоте свойства полианиона, таким образом, они определяют поверхностный за ряд клетки. Сахарные компоненты тейхоевых кислот входят в состав ре цепторов для некоторых бактериофагов и определяют возможность ад сорбции фага на клеточной поверхности.В клеточной стенке грамположительных бактерий содержится не большое количество полисахаридов, липидов и белков.Входящие в состав клеточной стенки полисахариды, липиды могут ковалентно связываться с ее макромолекулами в отличие от белков, которые формируют на ее внешней поверхности отдельный слой.Таким образом, основными компонентами клеточной стенки грамположительных бактерий являются три типа макромолекул: пептидогликаны, тейхоевые кислоты и полисахариды, которые, ковалентно связываясь, образуют сложную структуру с весьма упорядоченной пространственной организацией.
Препараты этой группы проявляют наиболее избирательное действие, так как все они так или иначе влияют на синтез пептидогликана клеточной стенки бактерий, отсутствующего в клеточных мембранах эукариотических клеток. Наибольшеераспросранение получили B-лактамные антибиотики бацитрацины, ванкомицин и циклосерин. Лактамные антибиотики. Лактамы. В-лактамные антибиотики. К b-лактамным антибиотикам относят пенициллины, цефалоспорины, монобактамыкарбапенемы. Все b-лактамные антибиотики обладают сходной структурой (содержатв-лактамное кольцо) и механизмами aнтимикробного действия. Они тормозят синтез пептидогликана, селективно угнетая активность ферментов, участвующих в терминальной перекрёстной сшивке линейных молекул гликопептидов. Основным ферментом среди них является транспептидаза, опосредующая соединение аланина и глицина на терминальных участках пептидной цепи. Молекул пенициллинов структурно гомологичны D-аланил-D-аланину, что даёт им возможность блокировать активные центры фермента и ингибировать синтез пептидогликанов. Мишенями для действия антибиотиков служат также ингибиторы аутолитических ферментов, ответственных за удаление деградирующих компонентов клеточной стенки и разъединение дочерних клеток. Активация ферментов приводит к быстрому лизису бактерий в результате нарушения целостности их клеточной стенки. Различие в чувствительности грамположительных и грамотрицательных бактерий к в-лактамам зависит от структурных отличий их клеточных стенок (количество пептидогликана, наличие липидов, природа перекрестных сшивок, активность аутолитических ферментов). Все В-лактамные антибиотики оказывают бактерицидное действие. - Читать далее "Пенициллины. Антибиотики пенициллинового ряда. Свойства пенициллинов. Типы пенициллинов. Виды пенициллинов. Клавулановая кислота. Сульбактам."

Метод Грама — метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом.
По Граму бактерии окрашивают анилиновыми красителями генциановым или метиловым фиолетовым и др., затем краситель фиксируют раствором иода. При последующем промывании окрашенного препарата спиртом те виды бактерий, которые оказываются прочно окрашенными в синий цвет, называют грамположительными бактериями (обозначаются Грам (+)), — в отличие от грамотрицательных (Грам (−)), которые при промывке обесцвечиваются.
После промывания растворителем при окрашивании по Граму добавляется контрастный красный краситель, который окрашивает всех грамотрицательных бактерий в красный или розовый цвет. Это происходит из-за наличия внешней мембраны, препятствующей проникновению красителя внутрь клетки. Тест классифицирует бактерии, разделяя их на две группы относительно строения их клеточной стенки
Грамположительны кокковые (кроме представителей рода Neisseria) и спороносные формы бактерий, а также дрожжей, они окрашиваются в иссиня-чёрный (тёмно-синий) цвет.
Грамотрицательны многие неспороносные бактерии, они окрашиваются в красный цвет, ядра клеток приобретают ярко-красный цвет, цитоплазма — розовый или малиновый.
ТехникаОкраска по Граму относится к сложному способу окраски, когда на мазок воздействуют двумя красителями, из которых один является основны́м, а другой — дополнительным. Кроме красящих веществ при сложных способах окраски применяют обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и др.
Для окраски по Граму чаще используют анилиновые красители трифенилметановой группы: генциановый, метиловый фиолетовый или кристаллвиолет. Грамположительные Грам (+) микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и иодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином Грам (+) микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.
Грамотрицательные Грам (−) микроорганизмы образуют с основными красителями и иодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, а затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.
Подготовка материала для окраски
Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности хорошо обезжиренного предметного стекла. Приготовленный мазок высушивают на воздухе и после полного высыхания фиксируют. Гистологические срезы готовят по рутинной методике, фиксируя кусочки тканей в формалине и заливая в парафин.
Фиксация
При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.
Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение химических средств, вызывающих коагуляцию белков цитоплазмы.
Физический способ фиксации
Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за рёбра мазком кверху и плавным движением проводят 2—3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с.
Надёжность фиксации проверяют следующим приёмом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога (70—80 °C).
Химический способ фиксации
Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова (смесь этилового спирта 96 % и наркозного эфира в соотношении 1:1), жидкость Карнуа (этилового спирта 96 % — 60 %, хлороформа 30 %, ледяной уксусной кислоты 10 %), спирт-формол (40 % формалин 5 мл, этиловый спирт 96° — 95 мл). Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10—15 минут и затем высушивают на воздухе. Применяется также фиксация в парах 40 % формалина в течение нескольких секунд.
Процесс окрашивания мазков
На фиксированный мазок наливают один из осно́вных красителей на 2—3 минуты. Во избежание осадков окрашивают через фильтровальную бумагу.
Сливают краску, аккуратно удаляют фильтровальную бумагу. Мазок заливают раствором Люголя или иодистым раствором по Граму (водный раствор иодида калия и кристаллического иода в соотношении 2:1) на 1—2 минуты до почернения препарата.
Раствор сливают, мазок прополаскивают 96° этиловым спиртом или ацетоном, наливая и сливая его, пока мазок не обесцветится и стекающая жидкость не станет чистой (приблизительно 20—40—60 секунд).
Тщательно промывают стекла в проточной или дистиллированной воде 1—2 мин.
Для выявления грамотрицательной группы бактерий препараты дополнительно окрашивают фуксином или сафранином (2—5 мин).
Промывают в проточной воде и высушивают фильтровальной бумагой.
Результат: грамположительные бактерии сине-черные, фибрин фиолетовый, ядра красные.

Метод используется для окраски спор и кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза). Кислотоустойчивость связана с наличием в клеточной стенке мяколовых кислот. Метод Циль-Нильсена основан на использовании концентрированных красителей прогревания.Метод назван именами немецких медиков — микробиолога Франца Циля (1857—1926) и патологоанатома Фридриха Нельсена (1854—1898), которые разработали его в 1882—1883 гг.
Методика окраски:
1. На фиксированный мазок накладывают белую фильтровальную бумагу и наливают карболовый фуксин Циля. Препарат 2-3 раза подогревают в в пламени до появления паров. Карболовый фуксин-основная краска; прогревание-протрава.
2. Препарат промывают водой, бумагу сбрасывают.  
3. Препарат обесцвечивают в 5% растворе серной кислоты. Серная кислота-обесцвечивающий фактор.
4. Промывают водой  
5. Докрашивают синькой Леффлера 3-5 минут Синька Леффлера — дополнительная краска
6. Промывают водой, высушивают, смотрят под иммерсией Кислотоустойчивые бактерии и споры рубиново- красного цвета, а остальная микрофлора — синего цвета

Жгутики определяют подвижность бактериальной клетки. Они представляют собой тонкие нити, отходящие от ЦПМ бактерии. Толщина жгутиков 12-20 нм, длина 3-15мкм.Они состоят из 3 частей: спиралевидной нити, крюка и базального тельца, содержащего стержень со специальными дисками ( у грам(+) – 1 пара дисков, у грам(-) – 2 пары). Дисками жгутики прикреплены к ЦПМ и клеточной стенке.при этом создается эффект электромотора со стрежнем-мотором, вращающий жгутик. Жгутики состоят из белка – флагеллина, является Н-антигеном. Субъединицы флагеллина закручены в виде спирали. Число жгутиков у бактерий различны, отходящих по периметру бактерий (перетрихи) у кишечной палочки, протея и др. Лофотрихи имеют пучок жгутиков га одном из концов клетки. Амфитрихи имеют по одному жгутику или пучку жгутиков на противоположных концах клетки.
Пили(фимбрии, ворсинки) – нитевидные образования, более тонкие и короткие( 3-10 нм х0,3-10 мкм), чем жгутики. Пили отходят от поверхности клетки и состоят из белка пилина, обладающего антигенной активностью. Различают несколько типов пилей. Пили 1-ого тика – ригидные гибкие нити с адгезивными концами. Пили 1-ого типа многочисленны – несколько сотен в клетку. Они ответственные за адгезию, т.е. за прикрепление бактерий к поражаемой клетке, а также за питание, водно-солевой обмен. Половые (F-пили), или конъюгационные пили, образуются так называемыми мужскими клетками-донорами, содержащими трансмиссивные плазмиды (F-, R-, Col-плазмиды). Отличительной особенностью половых пилей является взаимодействие особыми мужскими сферическими бактериофагами, которые интенсивно адсорбируются на половых пилях. Половых пилей обычно 1-3 на клетку. Пили 4-ого типа участвуют в адгезии, ко-агрегации, формировании биологической пленки. Они обладают антигенными свойствами, являются рецепторами для бактериофагов и, как показано, участвуют в движении клетки. Располагаются по полюсам клетки. Одни из самых тонких пилей (толщина 1-2 нм), называемые «кудряшками», способны сваливаться, агрегируя клетки.

Капсула бактерии — слизистая структура толщиной более 0,2 мкм, прочно связанная с клеточной стенкой бактерий и имеющая чётко очерченные внешние границы. Капсула различима в мазках-отпечатках из патологического материала. В чистых культурах бактерий капсула образуется реже. Она выявляется при специальных методах окраски по Бурри-Гинсу, создающих негативное контрастирование веществ капсулы: тушь создаёт тёмный фон вокруг капсулы.
Капсула состоит из полисахаридов (экзополисахаридов), иногда из полипептидов; например, у сибиреязвенной бациллы она состоит из полимеров D-глутаминовой кислоты. Капсула гидрофильна, включает большое (до 98 %) количество воды.
Микрокапсула
Многие бактерии образуют микрокапсулу — слизистое образование толщиной менее 0,2 мкм, выявляемое лишь при электронной микроскопии.
Функции капсулы
Капсула предохраняет бактерии от повреждений, высыхания. Она препятствует фагоцитозу бактерий. Капсула антигенна: антитела против капсулы вызывают её увеличение (реакция набухания капсулы) Капсула создаёт дополнительный осмотический барьер и является источником резервных веществ.
Окраска капсул
Окраска по Романовскому-Гимзе. Фиксированный мазок кладут в чашку Петри мазком вниз на подставки из стеклянной соломки или спичек и наливают рабочий раствор краски Романовского-Гимза (15—20 капель на 10 мл воды). Через 15—20 мин препарат промывают водой и высушивают на воздухе. Бактерии окрашиваются в тёмно-синий цвет, капсулы — в розовый.
Окраска по Михину. На фиксированный мазок наливают метиленовую синь Леффлера (30 мл насыщенного спиртового раствора метиленовой сини растворяют в 100 мл воды, добавляют 1 мл 1 % раствора NaOH и выдерживают в термостате месяц) при лёгком нагревании выдерживают 3—5 мин, быстро промывают водой и высушивают. Бактерии окрашиваются в синий цвет, капсулы — в розовый.
Окраска по Бурри-Гинсу
Реакция набухания по Нейфельду

Споры – своебразная форма покоящихся фирмикутных бактерий, т. е. бактерий с грамположительным типом строения клеточной стенки. Споры образуются при неблагоприятных условиях существования бактерий (высушивание, дефицит питательных веществ и др. Внутри бактериальной клетки образуется одна спора (эндоспора). Образование спор способствует сохранению вида и не является способом размножения, как у грибов. Спорообразующие бактерии рода Bacillus имеют споры, не превышающие диаметр клетки. Бактерии, у которых размер споры превышает диаметр клетки, называются клостридиями, например, бактерии рода Clostridium (лат.Clostridium – веретено). Споры кислотоустойчивы, поэтому окрашиваются по методу Ауески или по методу Циля-Нильсена в красный, а вегетативная клетка в синий цвет.
Многие палочковидные бактерии способны образовывать в определенных условиях споры. Такие бактерии, в отличие от всех остальных, называются бациллами.
Форма спор может быть овальной, шаровидной; расположение в клетке – терминальное, т. е. на конце палочки (у возбудителя столбняка), субтерминальное – ближе к концу палочки (у возбудителей ботулизма, газовой гангрены) и центральное (у сибиреязвенной бациллы).
Размеры спор, как правило, меньше размеров вегетативных клеток. В некоторых случаях, однако, диаметр споры может превышать диаметр вегетативной клетки, вследствие чего форма самой клетки при спорообразовании изменяется. Когда спора образуется в центре клетки, то эта клетка по форме напоминает веретено (клостридиум); в случае образования споры в конце клетки она приобретает форму барабанной палочки (плектридиум).
Спора долго сохраняется из-за наличия многослойной оболочки, дипиколината кальция, низкого содержания воды и вялых процессов метаболизмов. В благоприятных условиях споры прорастают, проходя три последовательные стадии: активация, инициация, прорастание.
Спорообразование как свойство бактерий (бацилл) с точки зрения переработки и хранения пищевых продуктов является крайне нежелательным, так как затрудняет и усложняет борьбу с этими микроорганизмами. Чтобы уничтожить споры, например, в консервах, их приходится стерилизовать, т. е. подвергать нагреванию до температуры 120°С, а такой нагрев отрицательно сказывается на качестве консервированных продуктов. Стерилизация молока существенно изменяет его первоначальные свойства, приводит к потере витаминов. А если молоко не нагревать до такой высокой температуры, то его невозможно будет долго сохранить. Так, пастеризованное молоко, которое нагревается только до температуры 80-90°С с целью сохранения питательных веществ, портится при комнатной температуре очень быстро, потому что в процессе пастеризации уничтожаются лишь вегетативные формы микробов, а споры не погибают. В нагретом до комнатной температуры молоке они прорастают и быстро размножаются, вызывая порчу этого продукта.
Свойством образовывать споры обладают многие бациллы, вызывающие опасные заразные болезни, а также отравления. К их числу относятся, например, бациллы сибирской язвы и бациллы ботулизма.
Окраска по методу Ожешко для выявления спор
На высушенный нефиксированный препарат (мазок готовится толстым и на краю стекла) наливают несколько капель 0,5%-ного раствора соляной кислоты и подогревают 1 – 2 мин. над пламенем горелки до закипания, после чего остатки кислоты сливают.
Остывший препарат промывают водой, подсушивают на воздухе и фиксируют на пламени горелки.
Окрашивают карболовым фуксином Циля (фуксин наливают на фильтровальную бумажку) с подогреванием до появления паров.
Обесцвечивают 5%-ным раствором серной кислоты в течение нескольких секунд.
Промывают водой.
Докрашивают синькой Леффлера или 1%-ным водным раствором малахитовой зелени в течение 3 – 5 мин.
Споры, окрашенные фуксином, имеют рубиново-красный цвет, вегетативные тела микробных клеток при докрашивании синькой Леффлера – синий цвет, при применении малахитовой зелени – зеленый цвет.

Особенности биологии вирусов
Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в цитоплазме или ядре клетки. Они — автономные генетические структуры. Отличаются особым — разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке отдельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется вирионом.
Морфологию и структуру вирусов изучают с помощью электронного микроскопа, так как их размеры малы и сравнимы с толщиной оболочки бактерий.
Форма вирионов может быть различной: палочковидной (вирус табачной мозаики), пулевидной (вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиелита, ВИЧ), в виде сперматозоида (многие бактериофаги). Различают просто устроенные и сложно устроенные вирусы.
Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кислоты и белковой оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся морфологических субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид взаимодействуют друг с другом, образуя нуклеокапсид.
Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены ли-попротеиновой оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболочка является производной структурой от мембран вирус-инфицированной клетки. На оболочке вируса расположены гликопротеиновые шипы, или шипики(пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов находится матриксный М-белок.
Тип симметрии. Капсидили нуклеокапсидмогут иметь спиральный, икосаэдрический (кубический) или сложный тип симметрии. Икосаэдрическийтип симметрии обусловлен образованием изометрически полого тела из капсида, содержащего вирусную нуклеиновую кислоту (например, у вирусов гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спиральныйтип симметрии обусловлен винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у вируса гриппа).
Включения — скопление вирионов или отдельных их компонентов в цитоплазме или ядре клеток, выявляемые под микроскопом при специальном окрашивании. Вирус натуральной оспы образует цитоплазмати-ческие включения — тельца Гварниери; вирусы герпеса и аденовирусы — внутриядерные включения.
Размеры вирусов определяют с помощью электронной микроскопии, методом ультрафильтрации через фильтры с известным диаметром пор, методом ультрацентрифугирования. Одним из самых мелких вирусов является вирус полиомиелита (около 20 нм), наиболее крупным — натуральной оспы (около 350 нм).
Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК. Поэтому различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно гаплоидны, т.е. имеют один набор генов. Геном вирусов представлен различными видами нуклеиновых кислот: двунитчатыми, однонитчатыми, линейными, кольцевыми, фрагментированными. Среди РНК-содержащих вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК) геномом. Плюс-нить РНК этих вирусов выполняет наследственную функцию и функцию информационной РНК (иРНК). Имеются также РНК-содержащие вирусы с отрицательным (минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих вирусов выполняет только наследственную функцию.
Вирусы поражают позвоночных и беспозвоночных животных, а также растения и бактерии. Являясь основными возбудителями инфекционных заболеваний человека, вирусы также участвуют в процессах канцерогенеза, могут передаваться различными путями, в том числе через плаценту (вирус краснухи, цитомегаловирус и др.), поражая плод человека. Они могут приводить к постинфекционным осложнениям — развитию миокардитов, панкреатитов, иммунодефицитов и др.
Кроме обычных вирусов, известны и так называемые неканонические вирусы — прионы — белковые инфекционные частицы, являющиеся агентами белковой природы, имеющие вид фибрилл размером 10—20x100—200 нм. Прионы, по-видимому, являются одновременно индукторами и продуктами автономного гена человека или животного и вызывают у них энцефалопатии в условиях медленной вирусной инфекции (болезни Крейтц-фельдта—Якоба, куру и др.).
Другими необычными агентами, близкими к вирусам, являются вироиды — небольшие молекулы кольцевой, суперспи-рализованной РНК, не содержащие белка, вызывающие заболевания у растений.
Структура и химический состав вирусов и бактериофагов
Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в цитоплазме или ядре клетки. Они — автономные генетические структуры. Отличаются особым — разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке отдельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется вирионом.
Морфологию и структуру вирусов изучают с помощью электронного микроскопа, так как их размеры малы и сравнимы с толщиной оболочки бактерий.
Форма вирионов может быть различной: палочковидной (вирус табачной мозаики), пулевидной (вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиелита, ВИЧ), в виде сперматозоида (многие бактериофаги). Различают просто устроенные и сложно устроенные вирусы.
Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кислоты и белковой оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся морфологических субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид взаимодействуют друг с другом, образуя нуклеокапсид.
Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены ли-попротеиновой оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболочка является производной структурой от мембран вирус-инфицированной клетки. На оболочке вируса расположены гликопротеиновые шипы, или шипики(пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов находится матриксный М-белок.
Капсид и суперкапсид защищают вирионы от влияния окружающей среды, обусловливают избирательное взаимодействие (адсорбцию) с клетками, определяют антигенные и иммуногенные свойства вирионов. Внутренние структуры вирусов называются сердцевиной.
Тип симметрии. Капсидили нуклеокапсидмогут иметь спиральный, икосаэдрический (кубический) или сложный тип симметрии. Икосаэдрическийтип симметрии обусловлен образованием изометрически полого тела из капсида, содержащего вирусную нуклеиновую кислоту (например, у вирусов гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спиральныйтип симметрии обусловлен винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у вируса гриппа).
Включения — скопление вирионов или отдельных их компонентов в цитоплазме или ядре клеток, выявляемые под микроскопом при специальном окрашивании. Вирус натуральной оспы образует цитоплазмати-ческие включения — тельца Гварниери; вирусы герпеса и аденовирусы — внутриядерные включения.
Размеры вирусов определяют с помощью электронной микроскопии, методом ультрафильтрации через фильтры с известным диаметром пор, методом ультрацентрифугирования. Одним из самых мелких вирусов является вирус полиомиелита (около 20 нм), наиболее крупным — натуральной оспы (около 350 нм).
Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК. Поэтому различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно гаплоидны, т.е. имеют один набор генов. Геном вирусов представлен различными видами нуклеиновых кислот: двунитчатыми, однонитчатыми, линейными, кольцевыми, фрагментированными. Среди РНК-содержащих вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК) геномом. Плюс-нить РНК этих вирусов выполняет наследственную функцию и функцию информационной РНК (иРНК). Имеются также РНК-содержащие вирусы с отрицательным (минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих вирусов выполняет только наследственную функцию.
Геном вирусов способен включаться в состав генетического аппарата клетки в виде провируса, проявляя себя генетическим паразитом клетки. Нуклеиновые кислоты некоторых вирусов (вирусы герпеса и др.) могут находиться в цитоплазме инфицированных клеток, напоминая плазмиды.
11. Патогенные простейшие (возбудители амебиаза, токсоплазмоза, малярии). Морфологические особенности возбудителей и вызываемые ими заболевания.
Амебиаз - инфекционная болезнь, вызываемая Entamoeba histolytica, сопровождающаяся язвенным поражением толстой кишки; возможно образование абсцессов в различных органах; протекает хронически.
Возбудитель существует в двух стадиях развития: вегетативной и цистной. Вегетативная стадия имеет несколько форм (тканевая, большая вегетативная, просветная и предцистная). Циста (покоящаяся стадия) имеет овальную форму; образуется из вегетативных форм в кишечнике. Просветная форма малоподвижна, обитает в просвете толстой кишки как безвредный комменсал, но в определенных условиях становится патогенной и превращается в тканевую форму. Тканевая форма обладает подвижностью за счет формирования псевдоподий. Она может обнаруживаться в свежевыделенных фекалиях человека, проникает в стенку толстой кишки, вызывает язвенные процессы, способна фагоцитировать эритроциты.
Токсоплазмоз - зоонозная инфекция с фекально-оральным механизмом передачи возбудителя. Характеризуется полиморфной клинической картиной (поражением нервной системы, увеличением печени и селезенки, поражением скелетных мышц и миокарда) и хроническим течением. 
Возбудитель токсоплазмоза - Toxoplasma gondii - простейшее из класса Sporozoea, облигатный внутриклеточный паразит, морфологически напоминающий вытянутую дольку апельсина, длиной 4-7 мкм. Деление внутри пораженных клеток приводит к образованию псевдоцист (скопление токсоплазм), а после полового размножения (в организме кошачьих) возникают истинные цисты - ооцисты, окруженные плотной оболочкой.
Малярия - острая или хроническая эндемическая трансмиссивная болезнь, характеризующаяся приступами лихорадки, увеличением печени и селезенки, гемолитической анемией, рецидивирующим течением.
Заболевание у людей вызывают 4 вида малярийных плазмодиев:
1. Plasmodium vivax - возбудитель трехдневной формы малярии;
2. Plasmodium ovale - вызывает трехдневный овале-малярии;
3. Plasmodium malariae - возбудитель четырехдневной формы малярии;
4. Plasmodium falciparum - вызывает тропическую малярию.
В процессе своей жизнедеятельности плазмодии проходят сложный цикл развития со сменой хозяина. Он состоит из двух фаз: половой (спорогонии), которая проходит в теле самки комара, и бесполой (шизогонии), что происходит в организме человека. Сначала плазмодии проникают в клетки печени (тканевая шизогония), позже - в эритроциты (эритроцитарная шизогония).
Тело малярийного паразита состоит из цитоплазмы и ядра. Некоторые стадии паразитов содержат пигмент, который окраски не воспринимает, а имеет свой естественный цвет: темно-бурый, золотисто-желтый, коричневый, почти черный (разный у разных видов паразитов).
12. Вирусы бактерий (бактериофаги)
Бактериофагами (или просто фагами) называются вирусы, поражающие прокариотическую клетку.
Стадии взаимодействия бактериофага с бактериальной клеткой
А. Адсорбция. Произойдет при условии соответствия рецепторов клетки и рецепторов бактериофага. На бактериях без клеточной стенки (протопласты) фаги не адсорбируются.
Б. Проникновение осуществляется инъекцией нуклеиновой кислоты фага через канал отростка.
В. Репликация фаговой НК и синтез фагоспецифических ферментов транскрипции и репликации идентичен вирусам.
Г.Выход зрелых фагов из клетки происходит путем «взрыва» при последующем лизисе бактерий, возможно также проникновением через ЦПМ бактерий без повреждения стенки.
Вирулентные фаги вызывают гибель (лизис) бактериальной клетки. 
Умеренные фаги при взаимодействии с клеткой хозяина встраивают свою НК в бактериальный геном. Профаг – неинфекционная форма, состояние ассоциации фаговой НК с геномом хозяина.
Лизогения — совместное существование бактерий и бактериофагов, при котором бактериофаг является составной частью нормально развивающейся бактериальной клетки. При лизогении нуклеиновая кислота бактериофага включается в состав хромосомы бактерии и воспроизводится вместе с ней. Образуются белки, придающие бактерии-хозяину ряд новых свойств, например меняют ее вирулентность, чувствительность к антибиотикам или другим бактериофагам.
Бактериофаги в медицинской практике применяются для диагностики, лечения и профилактике инфекционных заболеваний.
13.Вирусы бактерий-(бактериофаги)
Фаги представляют собой мельчайшие частички, или корпускулы, состоящие из головки и хвоста (отростка), по форме напоминающие сперматозоид. У некоторых фагов отросток очень короткий или совсем отсутствует. Размеры фагов варьируют от 20 до 200 нм. Как и вирусы, фаги имеют наружную белковую оболочку и заключенную в головке нуклеиновую кислоту. У большинства фагов это двунитчатая ДНК. Однако обнаружены фаги, имеющие однонитчатую ДНК и даже РНК. Размеры молекулы ДНК во много раз превышают величину самого фага.
Фаги обладают специфичностью, которая заключается в их способности размножаться и вызывать лизис только бактерий определенного вида или типа. Различают моновалентные фаги, которые лизируют культуру бактерий определенного вида, и типовые фаги, лизирующие отдельные штаммы или варианты внутри одного и того же вида. Существуют и полифаги, которые могут вызывать лизис клеток родственных видов бактерий. Свойства специфичности фагов используют при лабораторной диагностике инфекционных заболеваний.
Устойчивость фага к внешним воздействиям достаточно велика. Он устойчив к обычно используемым концентрациям дезинфицирующих веществ: 1—2% раствору фенола, 0,5% раствору сулемы, 1,5% раствору лизола. Отмечено даже привыкание фага к азотной и серной кислотам. Он выдерживает нагревание до 70—75°С. Тем не менее образование фага задерживают цитраты и оксалаты, рентгеновские и ультрафиолетовые лучи. Угнетающе действуют на фаг стрептомицин и полисахариды— гликоген и крахмал. В организме фаг сохраняется 10—13 дней.
14. Морфология плесневых и дрожжеподобных грибов
Гифальные (плесневые) грибы образуют ветвящиеся тонкие нити (гифы), сплетающиеся в грибницу, или мицелий (плесень). Толщина гиф колеблется от 2 до 100 мкм. Гифы, врастающие в питательный субстрат, называются вегетативными гифами (отвечают за питание гриба), а растущие над поверхностью субстрата – воздушными или репродуктивными гифами (отвечают за бесполое размножение). Гифы низших грибов не имеют перегородок. Они представлены многоядерными клетками. Гифы высших грибов разделены перегородками, или септами.
Дрожжевые грибы (дрожжи), в основном имеют вид отдельных овальных клеток. По типу полового размножения они распределены среди высших грибов – аскомицетов и базидиомицет. При бесполом размножении дрожжи образуют почки или делятся, что приводит к одноклеточному росту. Могут образовывать псевдогифы и ложный мицелий (псевдомицелий) в виде цепочек удлиненных клеток.
Грибы, аналогичные дрожжам, но не имеющие полового способа размножения, называют дрожжеподобными. Они размножаются только бесполым способом — почкованием или делением.
 Заболевания, вызываемые дрожжеподобными и дрожжевыми грибами: кандидоз, бластомикозы;
Заболевания, вызываемые плесневыми грибами: аспергиллез, пенициллез, мукормикоз.
15. Понятия об асептике и антисептике
Асептика - комплекс мероприятий, направленных на предупреждение попадания микроорганизмов на какой-либо объект (операционное поле, бактериологический бокс, стерильный раствор и т.д.) Асептика предусматривает стерилизацию инструментов и материалов, специальную обработку рук медицинских работников, соблюдение особых санитарно-гигиенических правил и приемов работы.
Антисептика — система мер, направленных на уничтожение микроорганизмов в ране, патологическом очаге, в органах и тканях, а также в организме в целом. В качестве антисептиков используются различные химические соединения, оказывающие антимикробное действие: 70% этиловый спирт, 5% спиртовой раствор йода, 0,5—2% раствор хлорамина, 0,1% раствор КМп04, 0,5—1% раствор формалина, 1—2% спиртовые растворы метиленового синего или бриллиантового зеленого, различные детергенты.
Антисептические средства (антисептики) — вещества, уничтожающие микроорганизмы или задерживающие их размножение или развитие. Антисептические средства  весьма различны по своей природе. Различают следующие их группы.
Галоиды: антиформин, йод, пантоцид, хлорамин Б.
Окислители: перманганат калия, перекись водорода.
Кислоты: бензойная, борная, салициловая.
Щелочи: бикарминт.
Соединения тяжелых металлов: препараты ртути, серебра, алюминия, свинца, висмута (ксероформ), меди, цинка.
Спирты (этиловый и др.).
Альдегиды: гексаметилентетрамин, кальцекс, лизоформ, формальдегид.
Фенолы: бензонафтол, лизол, резорцин, трикрезол, фенилсалицилат, фенол.
Дегти, смолы, продукты переработки нефти, минеральные масла, синтетические бальзамы, препараты серы (альбихтол, винилин, деготь, ихтиол, нефть нафталанская рафинированная, полимерол, сульсен, цигерол).
Красители: бриллиантовый зеленый, метиленовый синий, флавакридин, этакридин.
Производные нитрофурана: фурацилин.
Производные 8-оксихолина: хинозол.
Поверхностно-активные вещества, или детергенты: диоцид.
В качестве антисептических средств используют также антибиотики для наружного применения (грамицидин) и фитонциды.
Для характеристики противомикробной активности антисептических средств пользуются феноловым коэффициентом, который показывает, какова сила противомикробного действия данного средства по сравнению с фенолом.
16. Действие физических факторов. Физические методы стерилизации
К числу основных физических факторов, воздействующих на микроорганизмы относят температуру, высушивание, различные виды излучения и др.
Для каждого вида микроорганизмов определена оптимальная температура развития. При низких температурах клетка переходит в состояние анабиоза, в котором она может существовать длительное время. Низкие температуры приостанавливают гнилостные и бродильные процессы. Высокая температура губительно действует на микробы. В основе бактерицидного действия высоких температур лежит разрушение ферментов за счет денатурации белков и нарушения осмотического барьера.
Ультрафиолетовое излучение является бактерицидно активным, то есть способным губительно действовать на микроорганизмы. Механизм действия ультрафиолетового излучения заключается в его способности частично или полностью подавлять репликацию ДНК и повреждать рибонуклеиновые кислоты (особенно мРНК).
Высушивание у вегетативных форм бактерий в большинстве случаев вызывает гибель клетки, так как для нормальной жизнедеятельности ее необходима вода. Наиболее устойчивы к высушиванию споры бактерий.
Прямые солнечные лучи убивают большинство микробов в течение нескольких часов. Патогенные бактерии более чувствительны к действию света, чем сапрофиты.
Физические методы стерилизации:
1.    Прокаливание. Подвергаются металлические предметы (петли, иглы, скальпель, ножницы, шпатель).
2.    Стерилизация путем кипячения. Кипячением стерилизуют иглы, шприцы, пинцеты, ножницы, скальпели и другие инструменты
3.    Стерилизация сухим жаром. Стерилизация осуществляется при помощи сухого нагретого воздуха в печи Пастера (стеклянная и фарфоровая посуда, металлические инструменты, термостойкие порошки, минеральные и растительные масла, жиры, воски и т.д.)
4.    Стерилизация текучим паром. Стерилизацию проводят в аппарате Коха. Таким способом стерилизуют среды с углеводами, молоко, среды с желатиной, то есть субстраты, которые не выдерживают нагревания более 1000С, длительного действия пара или сухого жара.
5.    Тиндализация –в водяной бане .Метод используется для стерилизации материалов, разрушающихся при температуре выше 58…600С – веществ, содержащих белки (сыворотка крови, витамины).
6.    Пастеризация – используется для стерилизации вина, пива, соков.
7.    Стерилизация паром под давлением (автоклавирование). Это самый эффективный метод стерилизации. В автоклаве стерилизуют питательные среды, выдерживающие температуру выше 1000С, стеклянную посуду, завернутую в бумагу, перевязочный материал, халаты (в биксах). Кроме того, обеззараживают микробные культуры, отработанные питательные среды, посуду.
8.    Стерилизация фильтрованием. Осуществляется пропускание материала через бактериологические фильтры. Фильтрация связана с механической задержкой бактерий мелкопористыми фильтрами и с адсорбционной способностью материала из которого изготовлен фильтр. Фильтрации обычно подвергают жидкости не выдерживающие нагревания.
9.  Стерилизация ультрафиолетовым излучением. В лаборатории источником ультрафиолетового излучения обычно служат бактерицидные лампы, используемые для обеззараживания воздуха.
17. Действие химических факторов. Дезинфекция
Химические вещества могут тормозить, полностью подавлять рост микроорганизмов или вызывать гибель микробной клетки. Эти способности химических веществ учитывают при подборе вещества для проведения дезинфекции.
Противомикробные вещества по химическому строению и механизму бактерицидного действия подразделяют на следующие группы: окислители, галогены, соединения металлов, кислоты и щелочи, спирты, краски, производные фенола и альдегиды.
Окислители. К этой группе принадлежит перекись водорода, перманганат калия. Эти соединения, выделяя активный атомарный кислород, вызывают цепную реакцию свободно-радикального перекисного окисления липидов, что ведет к деструкции мембран и белков микроорганизмов.
Галогены. Представителями этой группы веществ являются хлор, йод и их производные: хлорная известь, хлорамин Б, раствор йода спиртовой, йодинол, йодоформ и др. Их бактерицидное действие связано со способностью активных галогенов замещать водородные атомы в молекулах белков, денатурируя их, а также, выделяя атомарный кислород, соединения галогенов оказывают активное окисляющее действие.
Соединения тяжелых металлов. К этой группе относят соли свинца, меди, цинка, серебра, ртути. Антимикробное действие соединений тяжелых металлов обусловлено ослаблением активности ферментов, а также образованием с белками альбуминатов.
Кислоты и щелочи. В основе бактерицидного действия кислот и щелочей лежат дегидратация микроорганизмов, изменение рН питательной среды, гидролиз коллоидных систем и образование кислотных и щелочных альбуминатов.
Спирты. Антимикробная активность спиртов обусловлена их способностью отнимать воду и свертывать белок. Наиболее широкое применение в качестве бактерицидного средства нашел этиловый спирт (С2Н5ОН). Бактерицидная активность этилового спирта зависит от его концентрации. Способностью инактивировать микробную клетку обладает 20% этиловый спирт, но наиболее эффективно использование 70% растворов. Более высокие концентрации в белковой среде образуют плотные белковые сгустки, внутри которых могут сохраняться живые бактерии.
Фенолы (фенол, крезол и их производные). Эффективность действия препаратов этой группы обусловлена их способностью легко проникать через клеточную мембрану внутрь клетки, денатурировать белки цитоплазмы и подавлять функции некоторых ферментов, что сопровождается нарушением метаболизма и приводит к гибели микробной клетки.
Альдегиды (формальдегид, глутаровый альдегид). Вещества этой группы способны вызывать дегидратацию поверхностных слоев клетки, легко проникать внутрь клетки и вступать в связь с аминогруппами белков, денатурируя их.
Дезинфекция — уничтожение патогенных микробов в окружающей человека среде. Методы и способы дезинфекции. различны, но они преследуют цели уничтожения не всех микроорганизмов, а только патогенных. Уничтожение возбудителей инфекционных заболеваний в переносчиках называют дезинсекцией, а в организме грызунов — источников инфекции — дератизацией.
18. Консерванты, их применение
Для предохранения лекарственных препаратов от микробной порчи используют консерванты. Консерванты – вещества, подавляющие размножение микроорганизмов. Консерванты чаще всего используют для сохранения стерильности препаратов, предназначенных для многократного использования, а также для препаратов, не подлежащих стерилизации. Консерванты используют, как правило, для глазных капель, инъекционных растворов, эмульсий, мазей, сиропов.
Консерванты для лекарственных средств должны соответствовать следующим требованиям:
- обладать широким спектром микробного действия
- химически не взаимодействовать с лекарственными веществами и компонентами лекарственных препаратов
-поддерживать стерильность лекарства в течение всего времени его применения
По химической природе они подразделяются на следующие группы:
-неорганические соединения: соли тяжелых металлов, серебра, ртути.
-металлорганические соединения: мертиолат, фенилртутные соли, метафан
-органические соединения: этиловый спирт, парабены, бензойная и сорбиновая кислоты, фенолы
19. Химические и физико-химические методы стерилизации
Химическую стерилизацию используют при обработке крупногабаритных изделий, приборов, а также аппаратов и термолабильных  изделий.
Для газовой («холодной») стерилизации обычно используют герметичные контейнеры, которые заполняют парами летучих веществ: формальдегида, смесью паров формальдегида  и  этилового спирта, окисью этилена, смесью окиси этилена и бромистого метила.
Для химической стерилизации растворами применяют отечественные (первомур - смесь пергидроля и муравьиной кислоты, перекись водорода, бианол, анолит и др.),  импортные препараты (гигасепт, глутаровый альдегид, дюльбак и др.).
Физико – химические методы стерилизации предусматривают совместное использование физических и химических методов стерилизации.
20. Питательные среды, их классификация. Требования, предъявляемые к ним.
Питательной средой называют среды, содержащие различные соединения сложного или простого состава, которые применяются для размножения бактерий или других микроорганизмов в лабораторных или промышленных условиях.
По консистенции питательные среды могут быть жидкими, полужидкими, плотными. Плотные среды готовят путем добавления к жидкой среде 1,5—2% агара, полужидкие — 0,3— 0,7 % агара. Агар представляет собой продукт переработки особого вида морских водорослей, он плавится при температуре 80—86°С, затвердевает при температуре около 40°С и в застывшем состоянии придает среде плотность. В некоторых случаях для получения плотных питательных сред используют желатин (10—15%). Ряд естественных питательных сред (свернутая сыворотка крови, свернутый яичный белок) сами по себе являются плотными.
По целевому назначению среды подразделяют на основные, элективные и дифференциально-диагностические.
К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих бактерий. Это триптические гидролизаты мясных, рыбных продуктов, крови животных или казеина, из которых готовят жидкую среду — питательный бульон и плотную — питательный агар. Такие среды служат основой для приготовления сложных питательных сред — сахарных, кровяных и др., удовлетворяющих пищевые потребности патогенных бактерий.
Элективные питательные среды предназначены для избирательного выделения и накопления микроорганизмов определенного вида (или определенной группы) из материалов, содержащих разнообразную постороннюю микрофлору. При создании элективных питательных сред исходят из биологических особенностей, которые отличают данные микроорганизмы от большинства других. Например, избирательный рост стафилококков наблюдается при повышенной концентрации хлорида натрия, холерного вибриона — в щелочной среде и т. д.
Дифференциально-диагностические питательные среды применяются для разграничения отдельных видов (или групп) микроорганизмов. Принцип построения этих сред основан на том, что разные виды бактерий различаются между собой по биохимической активности вследствие неодинакового набора ферментов.
Особую группу составляют синтетические и полусинтетические питательные среды. В состав синтетических сред входят химически чистые вещества: аминокислоты, минеральные соли, углеводы, витамины. В полусинтетические среды дополнительно включают пептон, дрожжевой экстракт и другие питательные вещества. Эти среды чаще всего применяют в научно-исследовательской работе и в микробиологической промышленности при получении антибиотиков, вакцин и других препаратов.
Требования, предъявляемые к питательным средам.
Любая питательная среда должна отвечать следующим требованиям: содержать все необходимые для размножения микроорганизмов вещества в легкоусвояемой форме; иметь оптимальные влажность, вязкость, рН, быть изотоничной и по возможности прозрачной.
№21. Рост и размножение бактерий. Фазы роста бактериальной культуры.
Жизнедеятельность бактерий характеризуется ростом — формированием структурно-функциональных компонентов клетки и увеличением самой бактериальной клетки, а также размножением — самовоспроизведением, приводящим к увеличению количества бактериальных клеток в популяции.Бактерии размножаются путем бинарного деления пополам, реже путем почкования.
Прокариоты обычно размножаются бесполым путем — бинарным делением. В начале деления клетка удлиняется, затем делится нуклеоид. Воспроизведение нуклеоида, содержащего всю генетическую информацию, необходимую для жизнедеятельности микроорганизма,— наиболее важный из всех процессов, которые происходят при росте клетки.
Нуклеоид представлен суперспирализованной и весьма плотно уложенной молекулой ДНК, которая является самореплицирующейся структурой и известна под названием репликона. К репликонам относятся также плазмиды — генетические структуры, способные к самостоятельной репликации. Репликация ДНК осуществляется ферментами ДНК-полимеразами. Этот процесс начинается в определенной точке ДНК и происходит одновременно в двух противоположных направлениях. Закапчивается репликация также в определенном месте ДНК - В результате репликации число молекул ДНК в клетке удваивается. Вновь синтезированные молекулы ДНК постепенно расходятся в образующиеся дочерние клетки. Все это позволяет дочерней клетке иметь совершенно тождественную материнской клетке по последовательности нуклеотидов молекулу ДНК - Считают, что репликация ДИК, занимает почти 80% времени, в течение которого осуществляется деление бактериальной клетки.
После завершения репликации ДНК начинается сложный комплекс процессов, которые ведут к образованию межклеточной перегородки. Вначале с обеих сторон клетки происходит врастание двух слоев цитоплазматической мембраны, а затем между ними синтезируется пептидогликан и образуется перегородка, состоящая из двух слоев цитоплазматической мембраны и пептидогликана.
Во время репликации ДНК и образования делящей перегородки клетка микроорганизма непрерывно растет. В этот период происходят синтез пептидогликана клеточной стенки, цитоплазматической мембраны, образование новых рибосом и других органелл и соединений, которые входят в состав цитоплазмы. На последней стадии деления дочерние клетки отделяются друг от друга. Процесс деления у некоторых бактерий идет не до конца, в результате образуются цепочки клеток.
При делении палочковидных бактерий клетки вначале растут в длину (диаметр клетки не меняется). Когда длина бактерии удваивается, палочка несколько сужается в середине и затем распадается на две клетки. Чаще всего клетка делится на две равные части (изоморфное деление), однако встречается и неравномерное (гетероморфное) деление, когда дочерняя клетка больше материнской.
Спирохеты, риккетсии, некоторые дрожжи и грибы, простейшие и другие организмы размножаются поперечным делением клеток.
Миксобактерии делятся перетяжкой. Сначала клетка в месте деления слегка суживается, далее клеточная стенка, постепенно впячиваясь с обеих сторон внутрь клетки, все больше и больше сужает ее и, наконец, делит на две. Дочерняя клетка, одетая уже собственной цитоплазматической мембраной, еще временно сохраняет общую клеточную стенку.
У бактерий иногда наблюдается «половой» процесс, или конъюгация
У других бактерий кроме размножения наблюдается половой процесс, но в самой примитивной форме. Половой процесс бактерий отличается от полового процесса эукариот тем, что у бактерий не образуются гаметы и не происходит слияния клеток. Однако главнейшее событие полового процесса, а именно обмен генетическим материалом, происходит и в этом случае. Этот называется генетической рекомбинацией. Часть ДНК (очень редко вся ДНК) клетки-донора переносится в клетку-реципиент, ДНК которой генетически отличается от ДНК донора. При этом перенесённая ДНК замещает часть ДНК реципиента. В процессе замещения ДНК участвуют ферменты, расщепляющие и вновь соединяющие цепи ДНК. При этом образуется ДНК, которая содержит гены обеих родительских клеток. Такую ДНК называют рекомбинантной. У потомства или рекомбинантов, наблюдается заметное разнообразие признаков, вызванное смещением генов. Такое разнообразие признаков очень важно для эволюции и является главным преимуществом полового процесса.
Актиномицеты, как и грибы, могут размножаться спорами. Актиномицеты, являясь ветвящимися бактериями, размножаются путем фрагментации нитевидных клеток. Грамположительные бактерии делятся путем врастания синтезирующихся перегородок деления внутрь клетки, а грамотрицательные — путем перетяжки, в результате образования гантелевидных фигур, из которых образуются две одинаковые клетки.Делению клеток предшествует репликация бактериальной хромосомы по полуконсервативному типу (двуспиральная цепь ДНК раскрывается и каждая нить достраивается комплементарной нитью), приводящая к удвоению молекул ДНК бактериального ядра — нуклеоида. Репликация ДНК происходит в три этапа: инициация, элонгация, или рост цепи, и терминация. Размножение бактерий в жидкой питательной среде. Бактерии, засеянные в определенный, не изменяющийся объем питательной среды, размножаясь, потребляют питательные элементы, что приводит в дальнейшем к истощению питательной среды и прекращению роста бактерий. Культивирование бактерий в такой системе называют периодическим культивированием, а культуру — периодической. Если же условия культивирования поддерживаются путем непрерывной подачи свежей питательной среды и оттока такого же объема культуральной жидкости, то такое культивирование называется непрерывным, а культура — непрерывной.При выращивании бактерий на жидкой питательной среде наблюдается придонный, диффузный или поверхностный (в виде пленки) рост культуры. .
1) Рост бактерий с равномерным помутнением среды.
2. Придонный рост бактерий, характеризующийся образованием осадка на дне пробирки с жидкой питательной средой.
3. Пристеночный рост бактерий, выражающийся в образовании рыхлых хлопьев, прикрепленных к внутренней поверхности стенок сосуда.
4. Поверхностный рост бактерий, характеризующийся появлением на поверхности жидкой питательной среды пленки. Рост на полужидкой питательной среде характеризуется помутнением всей толщи среды или образованием сосульки цилиндрической или конической формы.
Рост периодической культуры бактерий, выращиваемых на жидкой питательной среде, подразделяют на несколько фаз, или периодов:1. лаг-фаза;2. фаза логарифмического роста;3. фаза стационарного роста, или максимальной концентрации бактерий; 4. фаза гибели бактерий.Эти фазы можно изобразить графически в виде отрезков кривой размножения бактерий, отражающей зависимость логарифма числа живых клеток от времени их культивирования.Лаг-фаза — период между посевом бактерий и началом размножения. Продолжительность лаг-фазы в среднем 4—5 ч. Бактерии при этом увеличиваются в размерах и готовятся к делению; нарастает количество нуклеиновых кислот, белка и других компонентов. Фаза логарифмического (экспоненциального) роста является периодом интенсивного деления бактерий. Продолжительность ее около 5— 6 ч. При оптимальных условиях роста бактерии могут делиться каждые 20—40 мин. Во время этой фазы бактерии наиболее ранимы, что объясняется высокой чувствительностью компонентов метаболизма интенсивно растущей клетки к ингибиторам синтеза белка, нуклеиновых кислот и др. Затем наступает фаза стационарного роста, при которой количество жизнеспособных клеток остается без изменений, составляя максимальный уровень (М-концентрация). Ее продолжительность выражается в часах и колеблется в зависимости от вида бактерий, их особенностей и культивирования. Завершает процесс роста бактерий фаза гибели, характеризующаяся отмиранием бактерий в условиях истощения источников питательной среды и накопления в ней продуктов метаболизма бактерий. Продолжительность ее колеблется от 10 ч до нескольких недель. Интенсивность роста и размножения бактерий зависит от многих факторов, в том числе оптимального состава питательной среды, окислительно-восстановительного потенциала, рН, температуры и др.
Размножение бактерий на плотной питательной среде.
Рост микробов на плотной питательной среде. Для изучения свойств колоний микробы культивируют на плотных питательных средах в чашках Петри. При этом посев материала проводят таким образом, чтобы получить изолированные колонии. Для характеристики колоний используют следующие признаки:
1. Размер колонии. Колонии обычно измеряют в миллиметрах или пользуются для этого описательными терминами, такими, например, как точечные (диаметр менее 1 мм), мелкие (диаметр 1-2 мм), средние (диаметр 2-4 мм) и крупные (диаметр 4-6 мм и более).
2. Форма колонии. Бывает правильной (круглая), неправильной (амебовидная), ризоидной (корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев).
3. Контуры края. Определяют при рассмотрении колонии под лупой или микроскопом с малым увеличением. Различают ровные края в виде четко выраженной линии и неровные края (фестончатый, волнистый, эрозированный или зазубренный, бахромчатый).
4. Рельеф колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и формой на вертикальном разрезе. Определяется рельеф колонии невооруженным глазом или при помощи лупы при рассматривании сверху и сбоку. Различают каплеобразные и куполообразные колонии правильной круглой формы, плоско-выпуклые колонии, конусообразные колонии, колонии с приподнятой серединой, колонии с вдавленным центром, плоские колонии.
5. Поверхность колонии. Изучают при помощи лупы или под микроскопом при малом увеличении. Поверхность колонии бывает матовая или блестящая с глянцем, сухая или влажная, гладкая или шероховатая. Гладкие колонии обозначают буквой S (smooth - гладкий), шероховатые - буквой R (rough - шероховатый).
6. Цвет колонии. Определяется пигментом, который продуцирует культура микробов. Преобладающее большинство патогенных бактерий пигмента не образует, вследствие чего колонии их бесцветны или молочно-мутного цвета. Пигментообразующие виды микробов дают колонии различных цветов: кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, сиреневые, черные и др.
7. Структура колоний. Определяется в проходящем свете при слабом увеличении микроскопа, суженной диафрагме или при несколько опущенном конденсоре. По структуре различают гиалиновые колонии, зернистые колонии, нитевидные или волокнистые колонии.
8. Консистенция колоний. Исследуют посредством прикосновения или взятия из нее части материала бактериологической петлей. По характеру консистенции колонии бывают пастообразные, вязкие или слизистые, волокнистые или кожистые, хрупкие сухие.
Бактерии, растущие на плотных питательных средах, образуют изолированные колонии округлой формы с ровными или неровными краями (S- и R-формы), различной консистенции и цвета, зависящего от пигмента бактерий.Пигменты, растворимые в воде, диффундируют в питательную среду и окрашивают её. Другая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима в органических растворителях. И, наконец, существуют пигменты, не растворимые ни в воде, ни в органических соединениях. Наиболее распространены среди микроорганизмов такие пигменты, как каротины, ксантофиллы и меланины. Меланины являются нерастворимыми пигментами черного, коричневого или красного цвета, синтезирующимися из фенольных соединений. Меланины наряду с каталазой, супероксиддисмутазой и пероксидазами защищают микроорганизмы от воздействия токсичных перекисных радикалов кислорода. Многие пигменты обладают антимикробным, антибиотикоподобным действием.
№22. Особенности культивирования риккетсий, хламидий и вирусов.
Риккетсии и хламидии — облигатные внутриклеточные бактерии, которые не растут на искусственных питательных средах. Вирусы также являются облигатными внутриклеточными микроорганизмами, но они принципиально отличаются от всех внеклеточных и внутриклеточных бактерий; отсутствием клеточной организации, ферментов строительного и энергетического метаболизма, наличием одного типа нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), неспособностью к бинарному делению. Для культивирования риккетсии, хламидий и вирусов используют клеточные культуры, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных.
Клеточные культуры. Культуры клеток готовят из тканей животных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые. Переви-виваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование in vitro, и сохраняются на протяжении нескольких десятков пассажей.
Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например в среде 199 с дабавлением телячьей сыворотки крови.
Клетки эпителиальной и соединительной тканей растут в суспензии; при оседании они довольно прочно прикрепляются
к стенке пробирки или флакона, по которой распространяются в виде "пласте, состоящего из одного слоя клеток (монослоя).
Перевиваемые однослойные клеточные культуры приготовляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью длительно размножаться in vitro в определенных условиях. К ним относятся злокачественные клетки, а также нормальные клетки амниона человека, почек обезьяны и др.
К полуперевиваемым культурам относятся диплоидные клетки человека. Они представляют собой клеточную систему, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых.
Все работы с культурами клеток требуют строжайшего соблюдения правил асептики во избежание заноса в них различных микроорганизмов из окружающей среды.
''После получения монослоя жизнеспособной культуры клеток, которая начинает расти и развиваться, ее заражают материалом, содержащим риккетсии, хламидии или вирусы. Упомянутые микроорганизмы проникают внутрь клеток, где и размножаются:
В клетках, пораженных риккетсиями, на 3—8-й день отмечается большое количество коккобациллярных форм, заполняющих целиком цитоплазму или ядро клеток, которые затем гибнут.
'Хламидии также рассматривают в окрашенных по Романовскому—Гимзе препаратах клеток^в которых наблюдают различные формы размножающихся микроорганизмов.
размножение (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), которое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток. При этом часть из них погибает и отслаивается от стенки пробирки^Вирусные частицы, освобождающиеся при разрушении одних клеток, инфицируют другие клетки, которые через некоторое время также погибают. В результате вместо сплошного клеточного монослоя остаются лишь отдельные клеточные островки.
'Характер ЦПД, вызванный разными вирусами, неодинаков. При репродукции одних (парамиксовирусы, герпесвирусы) наблюдается слияние клеток с образованием синцития, других к (энтеровирусы, реовирусы) — сморщивание и деструкция клеток, третьих (аденовирусы) — агрегация клеток и т.д. ЦПД вирусов оценивают в динамике, просматривая клеточную
культуру под микроскопом в разные сроки после ее заражения вируссодержащим материалом) Некоторые вирусы (энтерови-русы, герпесвирусы) вызывают ЦПД в течение 1—2 сут, другие — в более поздние сроки (на 4—6-й день). Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.
один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорбировать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее постановки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.
Другой метод — реакция гемагглютинации. Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жидкости клеточной культуры либо хорион-аллантоисной или амниоти-ческой жидкости куриного эмбриона. Гемагтлютинацию— скучивание эритроцитов кур, гусей, морских свинок —вызывают вирусы, содержащие в оболочке гемагглютинин."
Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы по сравнению с клеточными культурами и подопытными животными значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздействиям. Для получения чистых культур риккетсии, хламидий и ряда вирусов в диагностических целях, а также для приготовления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы) используют куриные эмбрионы в возрасте от 8 до 12 дней. О размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим изменениям, которые обнаруживают после вскрытия эмбриона на его оболочках. О репродукции некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами
К недостаткам данного метода относятся невозможность обнаружения исследуемого микроба без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очистку риккетсии или вирусов при изготовлении различных препаратов.
Лабораторные животные. Экспериментальные животные используются для выделения риккетсий и вирусов из исследуемого материала, а также для получения больших количеств этих микроорганизмов. Например, риккетсий можно культивировать в легких мышей и кроликов, производя заражение животных через нос. При этом способе культивирования получают большое количество материала и используют его для приготовления вакцин или диагностических препаратов. Успех выделения вируса зависит от правильного выбора вида экспериментального животного и способа введения материала. Для выделения, нейровирусов наилучшим является введение исследуемого материала в головной или спинной мозг, респираторных вирусов — на слизистую оболочку верхних дыхательных путей. Для лабораторных целей используют белых мышей, кроликов, белых и хлопковых крыс, морских свинок, обезьян. Наиболее широко применяют в вирусологической практике белых мышей, например для выделения вирусов — возбудителей бешенства, энцефалита, орнитоза. После введения исследуемого материала за животным устанавливают наблюдение, отмечают его поведение, появление симптомов заболевания, температуру. Если у первично зараженного животного отсутствуют клинические проявления болезни, производят 2—3 последовательных «слепых пассажа» на новой партии животных, вводя им суспензии из органов животных первой партии. При отсутствии симптомов заболевания у повторно зараженных животных результаты исследования считают отрицательными. При наличии у животных клинических признаков болезни производят определение вирусов в суспензии органов с помощью серологических реакций (реакция нейтрализации с известными сыворотками).
Для бактериологического исследования берут стерильно кровь из сердца, кусочки органов для посева на питательные среды, готовят мазки-отпечатки для окраски и микроскопирования.
Применяют подкожный, внутрикожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, субдуральный и другие методы заражения лабораторных животных.
№23. Культивирование вирусов. Методы индикации и идентификации вирусов в культуре клеток.
1.2. Культуры клеток в вирусологии и методы их получения
Культура клеток – клетки какой-либо ткани животных или человека, способные расти и размножаться в искусственных условиях.
Культуры клеток широко применяются при диагностике вирусных инфекций, в производстве вакцин, незаменимы при проведении научных исследований в области вирусологии.
Для успешного получения клеточных культур и последующего размножения в них вирусов культивируемые клетки должны постоянно находиться в сбалансированной физиологической среде, содержащей все необходимые компоненты для их жизнедеятельности и размножения.
Питательные потребности клеток обеспечиваются наличием незаменимых аминокислот (таких, как глутамат, лейцин, изолейцин, валин, фенилаланин, аргинин, гистидин, метионин, треонин, цистин, тирозин), витаминов (особенно комплекса В), глюкозы и сыворотки крови.
Изотоничность и буферность среды поддерживается с помощью неорганических солей. Оптимальным является рН 7,2-7,4, при длительном культивировании клеток значение рН должно оставаться в пределах 6,8-7,8. Постоянство рН в течение нескольких дней обеспечивается присутствием карбонатного и фосфатного буферов. Стабилизации значения рН способствует выращивание культур в пробирках и флаконах, закрытых резиновыми пробками, вследствие чего не улетучивается СО2 (в противном случае это привело бы к сдвигу рН в щелочную сторону).
Для приготовления питательной среды требуется вода высокой степени очистки, так как культура клеток очень чувствительна к ионам тяжёлых металлов. Рекомендуется применять бидистиллированную воду, перегнанную в стеклянных аппаратах или очищенную в ионообменных колонках.
Работу с культурами клеток проводят в тщательно обработанной «вирусологической» посуде из специальных сортов стекла или пластиковой посуде из полистерола для одноразового использования.
Приготовленную культуру клеток инкубируют в термостате при температуре 36,0-38,50С.
1.2.2. Типы клеточных культур
Для приготовления культур клеток используют различные ткани животных, человека и птиц как эмбриональные, так и зрелые. Кроме нормальных используют и злокачественные перерождённые ткани, получаемые из опухолей.
Источником эмбриональной ткани часто служит куриный зародыш, а также эмбрионы человека, мышей, свиней, кроликов и др. Эмбриональная и опухолевая ткани отличаются лучшей выживаемостью и более активным ростом, чем ткани взрослого организма. Из зрелых тканей чаще всего употребляется почечная ткань (обезьян, морских свинок, хомячков и др.), амниотическая оболочка человека.
Ткани берут в асептических условиях, промывают в солевом растворе Хенкса и затем подвергают измельчению. В вирусологии используют только культуры растущих тканей, которые подразделяют на:
1. Культуры фиксированных кусочков тканей.
2. Однослойные культуры клеток:
а) первичные культуры клеток;
б) перевиваемые (стабильные) культуры клеток;
в) культуры диплоидных клеток.
3. Культуры суспензированных клеток.
В практической вирусологии чаще используют однослойные культуры, клетки которых растут и размножаются будучи прикреплёнными к твёрдому субстрату (стеклу, пластику), образуя слой толщиной в одну клетку (монослой). Метод обработки однослойных культур клеток основан на обработке исходной ткани ферментами (обычно трипсином), разрушающими межклеточные связи; ткань диспергируется, и образуется взвесь изолированных клеток. При культивировании клетки прикрепляются к стеклу сосуда и растут в виде сплошного монослоя, благодаря чему удобно воздействовать на клетки, заражая их вирусами, и визуально наблюдать возникающие изменения в динамике.
а) Первичные культуры клеток способны размножаться только в первой генерации
Методика получения первичных культур фибробластов куриного эмбриона
Яйца, инкубированные 7-11 дней, овоскопируют. Убедившись в жизнеспособности эмбриона, очерчивают границу воздушного мешка.
Скорлупу на тупом конце яйца протирают спиртом, йодом, снова спиртом, а затем срезают на уровне воздушного мешка.
Извлекают эмбрион и помещают его в стерильную чашку, удаляют голову. Тело эмбриона омывают 3-5 мл раствора Хенкса, который затем отсасывают.
Тело эмбриона тщательно измельчают ножницами, полученные кусочки (размером около 1 мм3) пипеткой переносят в пробирку.
Проводят 2-3-кратное отмывание измельчённой ткани от крови. Каждый раз наливают в пробирку с тканью по 2-3 мл раствора, дают ткани осесть, после чего жидкость отсасывают.
К отмытой ткани добавляют 3 мл 0,25% раствора трипсина и тщательно перемешивают содержимое пробирки с помощью «пипетирования» (многократного насасывания и выдувания жидкости пипеткой) или энергичного встряхивания. Под действием трипсина клетки ткани разъединяются и образуют суспензию, поэтому после оседания более крупных тканевых частиц на дно пробирки жидкость над осадком должна остаться мутной.
Верхний помутневший слой жидкости, содержащий взвесь изолированных клеток, переносят в центрифужную пробирку, куда заранее наливается 2,5 мл питательной среды гидролизата лактальбумина. Проводят центрифугирование при 1 000 об/мин в течение 10-15 минут.
Надосадочную жидкость удаляют, к осадку клеток добавляют 2-3 мл гидролизата лактальбумина и тщательно перемешивают, чтобы клетки вновь оказались во взвешенном состоянии. Для отделения конгломератов клеток, которые могут попасть во взвесь, рекомендуется последующее фильтрование через сетку из нержавеющей стали или марлю.
Производится подсчёт клеток в камере Горяева под малым увеличением микроскопа. Определив концентрацию клеток во взвеси, её разводят гидролизатом лактальбумина до 400 000 клеток в 1 мл.
Взвесь разливают в пробирки по 1 мл, закрывают резиновыми пробками и помещают в термостат при 370С в наклонном положении под углом 50.
Через 3-4 суток от начала культивирования, просматривая пробирки при малом увеличении микроскопа, можно видеть вытянутые, отростчатые клетки – фибробласты, которые растут на стенке пробирки, образу монослой.
б) Перевиваемые культуры клеток (линии клеток)
Это стабильные культуры клеток, которые способны бесконечно долго размножаться вне организма, если их культивировать в соответствующих условиях. Например, перевиваемые культуры из амниона человека (FL, А-8), почки обезьян (VERO - от зелёной мартышки, LLCMK 2 – от макаки-резус), эмбриона мыши (ЗТЗ), из опухолевых клеток человека (HeLa - из рака шейки матки, Нер–2 – из рака гортани) и многие другие.
Перевиваемые культуры клеток обладают целым рядом преимуществ по сравнению первичными. Работа с ними менее трудоёмка, они отличаются большим диапазоном чувствительности ко многим вирусам. Однако перевиваемые культуры не пригодны для производства вирусных вакцин, так как существуют опасения по поводу их возможной злокачественности.
Перевиваемые культуры клеток без пересева на свежую среду довольно быстро дегенерируют. Поэтому исходную культуру клеток выращивают в матрацах с питательной средой, еженедельно пересевая культуру в новые сосуды. При работе с пробирочными культурами также рекомендуется пересевать их через 7-8 дней, или же раз в 3-4 дня заменять питательную среду свежей, тогда клеточные культуры сохраняют свою жизнеспособность 2-3 недели.
Для культивирования перевиваемых культур клеток применяют среду 199 (часто с добавлением 10% бычьей сыворотки), среду Игла с добавлением 20% сыворотки, 0,5% гидролизат лактальбумина, содержащий 5% телячьй сыворотки.
в) Культуры диплоидных клеток
Их называют полуперевиваемыми культурами, так как ини обладают способностью к пересевам в течение длительного времени – выдерживают до 40-50 пассажей, проводимых на протяжении 8-10 месяцев. Затем культура клеток дегенерирует и гибнет. Диплоидными их называют , потому что они стойко сохраняют диплоидный кариотип, присущий исходным нормальным клеткам организма – родоначальницам диплоидной линии.
Культуры диплоидных клеток получают из различных тканей эмбриона человека, из первичных культур. Так, например, пользуется известностью штамм ДКЛЧ (диплоидные клетки лёгких человека), штаммы WJT-38, JMR-90, MRC-5 из лёгких ткани эмбриона человека.
Диплоидные культуры применяют для выделения и культивирования вирусов. Они чувствительны ко многим штаммам вирусов, онкогенно безопасны, пригодны для культивирования в промышленных масштабах и получения массового количества вирусных вакцин.

Культуры суспензированных клеток
Суспензированная культура – это культура, в которой отдельные клетки или их конгломераты постоянно находятся во взвешенном состоянии в жидкой среде.
Культуры клеток в суспензии удаётся получить, если проводить их культивирование при постоянном интенсивном перемешивании среды путём вращения пробирок в барабане, с помощью магнитной мешалки и т.п. В последнее время используют специальные аппараты – хемостаты, в которых обеспечивается автоматическое обновление среды. Суспензированные клетки обладают большей активностью роста, накапливаются в большом количестве, при регулярной замене среды длительное время остаются жизнеспособными.
1.3. Культивирование вирусов в развивающихся куриных эмбрионах
Многие вирусы, поражающие человека и животных, могут в большей или меньшей степени размножаться в курином эмбрионе. Наличие плотной скорлупы защищает эмбрион от попадания микроорганизмов из внешней среды.
Метод культивирования вирусов в куриных эмбрионах используют при лабораторной диагностике вирусных инфекций, а также для изготовления вирусных вакцин и диагностических препаратов.
1.3.1. Строение куриного эмбриона
Куриный эмбрион покрыт известковой оболочкой – скорлупой, к которой изнутри примыкает скорлупная оболочка. В тупом конце яйца она раздваивается и заключает в себе воздушное пространство. Под скорлупной оболочкой находится хорионаллантоисная оболочка, в тупом конце яйца она проходит по внутренней стороне скорлупной оболочки, замыкающей воздушное пространство, эта оболочка богата кровеносными сосудами и служит эмбриону органом дыхания.
Для успешного культивирования вирусов в организме развивающихся куриных эмбрионов требуется определённый температурный режим (360-380), влажность (50-70%), а также достаточная вентиляция. Заражают куриные эмбрионы определённого возраста, инкубированные от 6 до 13 дней в зависимости от вида вирусов и метода заражения. Необходимо подготовить: подставку для яйца, пузырьки со спиртом и йодом, пробирку со стерильным парафином, покровные стёкла, пакетики стерильной ваты и марли, завёрнутую в бумагу стерильную посуду, стерильные шприцы, иглы, пинцеты, препаровальные иглы.
1.3.2. Заражение куриного эмбриона на хорионаллантоисную оболочку
(не знаю пригодится ли)
Для заражения используют куриные эмбрионы 10-12-дневного возраста. Основные этапы заражения:
Яйцо помещают на подставку в вертикальном положении так, чтобы воздушный мешок находился наверху, проводят стерилизацию скорлупы на тупом конце яйца.
Над центром воздушного мешка делают прокол скорлупы с помощью препаровальной иглы.
в образовавшееся отверстие вводят браншу ножниц и вырезают окно в скорлупе около 1,5 см в диаметре.
Через отверстие осторожно надрывают иглой внутренний листок скорлупной оболочки и отслаивают на небольшом участке (0,5-1 см2).
Производят заражение хорионаллантоисной оболочки путём нанесения на неё 0,1-0,2 мл вируссодержащего материала с помощью пастеровской пипетки или шприца.
Окошко в скорлупе закрывают специальной эластичной плёнкой или стерильным покровным стеклом и прикрепляют расплавленным парафином.
Заражённые эмбрионы помещают в термостат в вертикальном положении и инкубируют в течение 2-3 суток, после чего производят вскрытие по следующим правилам:
Яйцо помещают на подставку так, чтобы воздушное пространство было наверху, проводится стерилизация места вскрытия.
Стерильными ножницами срезают скорлупу по границе воздушного пространства.
Пользуясь пинцетом, снимают скорлупную оболочку по границе. Обнажённую хорионаллантоисную оболочку подрезают вдоль края скорлупы. Через образовавшееся отверстие выливают всё содержимое яйца в чашку или лоток.
Оставшуюся внутри скорлупы хорионаллантоисную оболочку осторожно извлекают пинцетом и помещают в стерильную чашку с физиологическим раствором. Здесь её расправляют и изучают изменения, поместив чашку на тёмный фон.
1.4. Культивирование вирусов путём заражения лабораторных животных
Восприимчивые к изучаемым вирусам животные называются экспериментальной моделью. Взятые в опыт животные должны быть одного вида, определённого возраста и содержаться в одинаковых условиях.
Работу животными рекомендуется проводить в настольном боксе или в специальной операционной вивария. Все отходы и трупы погибших животных автоклавируют и сжигают.
При вирусологических исследованиях применяют подкожное, накожное, внутрикожное, внутримышечное, внутрибрюшинное, внутривенное, пероральное, интраназальное, интрацеребральное заражение лабораторных животных.
Индикация – неспецифическое обнаружение факта инфицирования, основано на выявлении биолог.свойств вирусов и особенностей их взаимодействия с чувствительными клетками.
Идентификация – установление вида или типа вируса.
Индикация и идентификация вирусов
Методы индикации и идентификации вирусов в клеточных культурах
При заражении вирусами клеточных культур можно получать различные видимые проявления действия вируса:
Цитопатическое действие вируса на культуру клеток (ЦПД) – возникновение в ней видимых морфологических дегенеративных изменений (литическая инфекция);
Приобретение заражённой культурой клеток способности к гемадсорбции – к адсорбции эритроцитов на поверхности клеточного слоя;
Образование в заражённой клеточной культуре под плотным слоем специального агарового покрытия характерных бляшек, являющихся «негативными колониями» вирусов;
Подавление процессов метаболизма в заражённой вирусом культуре клеток, выявляемое с помощью так называемой цветной пробы.
Окончательная идентификация выделенного вируса проводится с помощью реакции нейтрализации с диагностическими вируснейтрализующими сыворотками. Определяют их родовую и видовую принадлежность.2.1.1. Цитопатическое действие (ЦПД) вируса в культуре клетокОсновной причиной ЦПД является нарушение метаболизма клетки. Прекращается синтез РНК клетки-хозяина, что ведёт к подавлению синтеза белков, приводит к нарушению структуры клеточных мембран, лизосом, митохондрий. Освобождаются и активируются клеточные ферменты (лизосомальные), которые вызывают деструкцию клеточных компонентов, т.е. развитие ЦПД. При резкой дегенерации клеточный монослой гибнет.При острой вирусной инфекции может наблюдаться образование гигантских многоядерных клеток – симпластов (или синцитиев). Симпластообразование вызывают более 20 различных вирусов, имеющих ферменты: лецитиназу, нейраминидазу, и богатых липидами (напр., парамиксовирусы).
К проявлению ЦПД вирусов относится образование внутриклеточных включений. Они образуются, если вирус не вызывает гибели клеток, или на стадиях до наступления гибели. Образование включений может быть единственным проявлением реакции клетки на внедрение вируса.С целью обнаружения вируса в материалах от больных проводят заражение исследуемым материалом однослойных культур клеток. Для заражения отбирают пробирки со сплошным клеточным слоем, просматривая их под малым увеличением микроскопа. Перед заражением из пробирок отсасывают культуральную жидкость, затем вносят по 0,1 мл исследуемого материала и добавляют питательную среду до 1 мл. Каждую пробу материала вносят в 4 пробирки. Для контроля несколько пробирок оставляют незаражёнными, но также сменяют в них питательную среду. Пробирки выдерживают в термостате, обычно при 370С, и ежедневно микроскопируют с целью обнаружения ЦПД (в течение недели и более). ЦПД различных вирусов на клеточные культуры обладает определённой специфичностью. Родственные вирусы дают цитопатическую реакцию сходного типа, эффект действия отдалённых по свойствам вирусов часто различен, поэтому по типу ЦПД можно судить о семействе или роде, к которым относится исследуемый вирус:- энтеровирусы (вирусы полиомиелита, Коксаки, ЕСНО) вызывают однородную мелкозернистую деструкцию клеток;- аденовирусы превращают клеточный слой в скопления мелких, округлых клеток, расположенных в виде гроздьев винограда;- парагриппозные вирусы, респираторно-синцитиальный, вирусы кори и паротита образуют симпласты.Количественное определение вирусов в исследуемом материале проводится с помощью титрования. Для этой цели готовят 10-кратные последовательные разведения вируса, которыми заражают клеточные культуры. Титром вируса называют его наибольшее разведение, вызывающее ЦПД в половине заражённых культур. Титр вируса выражают в цитопатических дозах (ЦПД50) в 1 мл. За одну ЦПД50 принимают 0,1 мл вируссодержащего материала, разведённого до титра.Для идентификации выделенного вируса по нейтрализации ЦПД культуральную жидкость смешивают с равным объёмом диагностической иммунной сыворотки (разведение сыворотки 1:5 или 1:10). После 1-2-часового контакта при комнатной температуре этой смесью (по 0,2 мл) заражают 4 пробирки с культурой клеток, из которой предварительно была удалена питательная среда; после добавления смеси в пробирки вносят по 0,8 мл свежей среды. Опыт сопровождается несколькими контролями:1 – контроль незаражённой культуры;2 – контроль дозы вируса – клеточные культуры заражают той же дозой вируса, что и в опыте;3 – контроль культуры, заражённой смесью культуральной жидкости с нормально сывороткой.Опыт учитывают через 5-7 дней и более, просматривая пробирки под малым увеличением микроскопа. В первом контроле ЦПД должно отсутствовать, во втором и третьем – обязательное проявление ЦПД. Отсутствие цитопатического эффекта в опытных пробирках указывает, что в данной пробе произошла нейтрализация вируса иммунной сывороткой, сыворотка соответствует типу выделенного вируса.
2.1.2. Реакция гемадсорбцииГемадсорбирующие свойства имеют многие вирусы: орто- и парамиксовирусы, флавивирусы, поксвирусы. Эти же вирусы обладают спосодностью вызывать гемагглютинацию – склеивание эритроцитов. Приобретение способности к гемадсорбции связано со встраиванием в мембрану заражённых вирусом клеток вирусспецифических белков – гемагглютининов, к которым эритроциты имеют комплементарные рецепторы и поэтому адсорбируются на поверхности заражённых клеток. В реакции применяют эритроциты морской свинки, кур, обезьян, человека 0 (I) группы. По наличию явления гемадсорбции обнаруживают присутствие вирусов в культурах клеток при латентной инфекции, когда цитопатический эффект оказывается слабо выраженным или отсутствует совершенно.
Техника постановки реакции гемадсорбцииПредварительно клеточные культуры заражают исследуемым материалом. Реакцию гемадсорбции ставят каждые два дня до появления положительной реакции (в течение 8-10 дней). Для этого в пробирку с заражённой культурой вносят по 0,2 мл взвеси эритроцитов (0,4-1%) и выдерживают пробирки в наклонном положении, чтобы эритроциты соприкасались с клеточным слоем. Температура, при которой ставят опыт, и экспозиция зависит от вида вируса. Пробирки встряхивают и оставляют на некоторое время в вертикальном положении для оседания неадсорбировавшихся эритроцитов. При микроскопии под малом увеличением в опытной пробирке регистрируют положительную реакцию гемадсорбции, выражающуюся в том, что эритроциты адсорбируются на клетках культуры, прилипая к клеточному слою; в контрольной пробирке клеточный слой свободен от эритроцитов.При добавлении специфической иммунной сыворотки в пробирку с клеточной культурой, предварительно заражённой соответствующим вирусом, заражённые клетки теряют способность адсорбировать эритроциты, т.е. происходит явление задержки гемадсорбции. Вследствие специфичности этого явления реакция задержки гемадсорбции может быть использована для идентификации выделенных вирусов, а также с целью обнаружения и титрования вируснейтрализующих антител в сыворотках больных. 2.1.3. Метод бляшекДля получения бляшек клеточный монослой заражают небольшой концентрацией вируса и фиксируют адсорбировавшиеся на клетках вирионы с помощью агарового покрытия, в которое добавлен витальный краситель – нейтральный красный. ЦПД вирусов имеет очаговый характер, погибшие клетки дегенерируют, теряют способность удерживать нейтральный красный и обесцвечиваются. В результате на непрозрачном равномерно розовом фоне клеточного монослоя появляются бляшки в виде более прозрачных неокрашенных округлых пятен.
Агаровое покрытие готовят из высококачественного агара в концентрации 1-1,5% и других компонентов – солевых буферных растворов, дополнительных питательных веществ, антибиотиков. Раствор нейтрального красного входит в состав среды или его добавляют во флакон или чашку незадолго до учёта опыта. Часто вместо агара используют гель бентионита (5-6%) – это алюмосиликат природного происхождения, который биологически инертен и не токсичен для культур клеток.Обнаружение и титрование вирусов методом бляшекДля получения бляшек вирусов во флаконы или чашки наливают взвесь клеток в питательной среде (№ 199 или среда с гидролизатом лактальбумина). Флаконы закрывают резиновыми пробками, чашки заклеивают лейкопластырем и помещают в термостат на 5-6 дней для получения монослоя клеток, который должен быть сплошным, без признаков дегенерации. Перед заражением среду из флаконов или чашек удаляют и однослойную культуру клеток осторожно отмывают раствором Хенкса, который затем тщательно отсасывают. Заражение производят путём внесения разведённого исследуемого материала в объёме 0,1-0,25 мл и равномерного распределения этого материала по поверхности клеточного слоя с помощью покачивания. Через 30-60 минут заражённую культуру клеток заливают покровной средой. Флаконы или чашеи с застывшей средой помещают в термостат (клеточным слоем кверху) и выдерживают до образования бляшек (2-5 суток), после чего производят их подсчёт и изучение.Разные вирусы образуют бляшки, отличающиеся по величине, форме, характеру краёв, по срокам появления и другим свойствам, что может быть использовано для предварительной идентификации вируса. Для титрования вирусов готовят серийные разведения вируссодержащего материала и каждое из разведений вносят во флакон или чашку со слоем культуры клеток. Подсчитав образовавшиеся бляшки (с учётом разведения вируса), вычисляют титр вируса – количество вирионов в 1,0 мл исходного материала. Титр вируса, определяемый методом бляшек, принято выражать числом бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл.Метод бляшек даёт возможность провести точную идентификацию вируса с помощью диагностических специфических сывороток. При соответствии между сывороткой и вирусом происходит нейтрализация вируса и при заражении монослоя клеток такой смесью бляшки не образуются или их количество значительно снижается.2.1.4. Цветная пробаЦветная проба (или цветная реакция) основана на разнице в цвете среды индикатором фенолрот, в которой растёт нормальная, жизнеспособная культура клеток, и среды, где находится культура, заражённая вирусом. В процессе развития нормальной культуры клеток происходит постепенное накопление кислых продуктов обмена веществ, что приводит к сдвигу рН в кислую сторону. Такое изменение реакции среды говорит о наличии роста и размножения клеток. Среда с индикатором фенолрот, первоначально имевшая красный цвет (рН 7,4 – 7,6), вследствие снижения рН до 7,0 – 6,8 приобретает жёлтый цвет.Заражение культуры клеток вирусом приводит к развитию в ней дегенеративных процессов: происходит подавление процессов метаболизма, значительно понижается гликолиз, в результате чего кислых продуктов накапливается мало, рН среды остаётся на исходном уровне и среда с индикатором фенолрот остаётся красного цвета.С помощью цветной реакции можно определить соответствие вируса и вируснейтрализующей сыворотки, если их предварительно смешать и эту смесь после инкубации внести в культуру клеток. Специфическая сыворотка нейтрализует вирус и он не оказывает цитопатическое действие на клетки культуры. Цветную пробу ставят с различными типами клеточных культур. Чаще берут первичную культуру клеток почки обезьяны или перевиваемые культуры клеток. При постановке цветной реакции необходимо учитывать, что каждая культура клеток, на которой ставят реакцию, имеет определённый уровень метаболизма. Устанавливают дозу клеток для цветной реакции, то есть то оптимальное количество клеток, которое должно быть взято в каждую пробирку. При работе с культурой почечных клеток обезьяны готовят взвесь клеток густотой 100-200 тыс. в 1 мл. Из неё делают ряд возрастающих разведений в объёме 0,25 мл и определяют минимальное количество клеток, которое при постановке цветной пробы изменяет цвет питательной среды из красного в жёлтый н 5-6-й день выдерживания в термостате; это количество и принимается за дозу клеток. Обычно эта доза – 25 тыс. клеток в объёме 0,25 мл.Титрование вируса методом цветной пробыЦветную пробу ставят в пробирках, которые иногда закрывают резиновыми пробками, но чаще разобщение от атмосферного воздуха достигается наслаиванием стерильного вазелинового масла (0,6-0,8 мл) или применение алюминиевой фольги. Однотипную опытную смесь наливают в четыре пробирки.При оценке результатов реакции учитывают два тона: жёлтый и красный (табл. 3).При титровании вируса по цветной пробе готовят десятикратные разведения вируссодержащего материала. Эти разведения вируса, взятые в объёме 0,25 мл, смешивают с 1 дозой клеток, содержащейся в таком же объёме, добавляют питательную среду по 0,25 мл и наслаивают вазелиновое масло по 0,6-0,8 мл. В реакции ставят контроли клеточной взвеси: берут 1,1/2 и ¼ дозы клеток. Пробирки помещают на 5-6 дней в термостат при 370С после чего по изменению цвета учитывают реакцию.Титром вируса по цветной пробе называется то наибольшее разведение вируса, которое вызывает подавление метаболической активности клеток в 50% случаев. В данном примере (табл. 3) титр вируса равен 10-4 (две пробирки красные, две – жёлтые). Количество вируса, содержащееся в объёме 0,25 мл в разведении, равном титру, называется цитопатической дозой (ЦПД50) вируса.
Применение реакции гемагглютинации (РГА) для индикации и идентификации вирусов.
Гемагглютинация, вызываемая вирусами, не является иммунологической реакцией, так как здесь нет системы антиген – антитело. С помощью этой реакции легко выявить присутствие гемагглютинирующего вируса, но невозможно его идентифицировать. Вирусы, обладающие гемагглютинирующими свойствами, имеют на поверхности гемагглютинины, с помощью которых происходит склеивание эритроцитов. По своей химической природе гемагглютинины являются глико- или липопротеидами.В процессе взаимодействия вирусов с эритроцитами различают стадии адсорбции, агглютинации и элюции. Адсорбция вирусов на эритроцитах начинается как неспецифическая, а затем переходит в специфическую вследствие сродства гемагглютининов к рецепторам эритроцитов. На одном эритроците адсорбируется множество вирусов, они образуют мостики между эритроцитами, изменяется электростатический заряд эритроцитов и в результате наступает следующая стадия взаимодействия – гемагглютинация, на которой процесс может остановиться. Некоторые вирусы способны к элюции – освобождению с поверхности эритроцитов. Элюция происходит под действием вирусных ферментов (например, нейраминидазы) на рецепторы эритроцитов. Элюированные вирусы при этом не повреждаются, эритроциты же не способны повторно адсорбировать вирус вследствие разрушения рецепторов.При постановке РГА используют те эритроциты (птиц, животных, человека), с которыми гемагглютинирующие свойства данного вируса проявляются лучше (например, эритроциты кур). Задерживающее действие на РГА могут оказывать ингибиторы, содержащиеся в тканях, где размножался вирус, и других биологических субстратах. Для снятия ингибиторного действия вируссодержащие материалы прогревают, обрабатывают трипсином, ацетоном и др.2.2.1. Техника постановки РГАНа плексигласовой доске готовят двукратные возрастающие разведения в объёме 0,5 мл исследуемого вируссодержащего материала , начиная с 1:10 и до 1:1280. в луночки с разведениями добавляют равные объёмы 1% взвеси эритроцитов кур. Доску осторожно встряхивают и оставляют на 30-45 мин при комнатной температуре. Учёт результатов проводят по трёхкрестовой системе в зависимости от внешнего вида осадка эритроцитов. При гемагглютинации на «+++» осадок имеет форму зонтика и занимает всё дно лунки. При отсутствии агглютинации эритроциты оседают в центре лунки в виде компактного диска.Титром вируса называется то наибольшее его разведение, при котором ещё наблюдается выраженная гемагглютинация («+++» или «++»). В нашем примере титр вируса 1:320 (табл. 4). Количественное содержание вируса в разведении, равном титру, называется гемагглютинирующей единицей (содержится в 0,5 мл разведения 1:320). Определение этой величины необходимо для постановки РТГА, в которой в качестве рабочей дозы вируса берут 4 гемагглютинирующие единицы.
Если предварительно соединить вирус со специфической иммунной вируснейтрализующей сывороткой и потом добавить эритроциты, то такой инактивированный вирус теряет способность вызывать гемагглютинацию. Эта реакция получила название реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и может быть использована для окончательной идентификации неизвестного гемагглютинирующего вируса – по специфической диагностической сыворотке, а также для выявления титра неизвестных антител в сыворотке больного – по известным вирусным антигенам-диагностикумам.Затрудняет применение РТГА наличие в сыворотках крови человека и животных неспецифических вирусных ингибиторов, которые могут вызвать неспецифическое торможение гемагглютинации. Выпускают противовирусные диагностические сыворотки, освобожденные от ингибиторов. РТГА ставят обычно на досках с лунками по методике, сходной с РГА.
2.3. Молекулярно-генетические методы исследования в диагностике вирусных инфекцийК таким методам относятся молекулярная гибридизация и полимеразная цепная реакция, которые позволяют обнаружить присутствие в исследуемом материале даже единичных копий генов определяемых вирусов (ДНК или РНК с определённой нуклеотидной последовательностью), и тем самым доказать наличие соответствующей инфекции.
2.3.2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) или локальнаяамплификация нуклеиновых кислот (ЛАНК)ПЦР, как и молекулярная гибридизация, основана на способности ДНК к денатурации и ренатурации и на комплементарности цепей ДНК. Важным принципом реакции является использование термостабильной ДНК-полимеразы, при участии которой происходит амплификация – умножение определяемых генов или фрагментов с определённой нуклеотидной последовательностью ДНК. В результате реакции исследуемый генетический материал накапливается в значительном количестве и может быть легко выявлен и идентифицирован. Чувствительность этой реакции составляет 10-18 г/мл. В реакции участвуют следующие ингредиенты:
определяемая ДНК вирусов в испытуемом биологическом материале, который предварительно концентрируется;
праймеры 2-х типов (олигонуклеотиды) – короткие цепочки ДНК с нуклеотидной последовательностью комплементарной 3,-концам каждой из двух цепей определяемой ДНК. Праймеры получают из нуклеиновых кислот различных вирусов, их нуклеотидную последовательность определяют методом секвенирования;
свободные нуклеитиды (дезоксирибонуклеозидтрифосфаты 4-х типов с различными азотистыми основаниями) – необходимый материал для осуществления амплификации;
фермент термостабильная ДНК-полимераза – производит достройку комплементарных цепей ДНК из пула свободных нуклеотидов. Фермент выделяют из бактерий Thermus aquaticus или получают генно-инженерным методом.
Сущность ПЦР состоит в том, что определяемая ДНК, находящаяся в тестируемом биологическом материале, подвергается денатурации. Затем праймеры 2-х типов в условиях отжига присоединяются, вследствие их комплементарности, к 3,-концам каждой из антипараллельных цепей, восстанавливая на этом участке двухспиральную структуру ДНК. Праймеры служат «затравками» для последующей достройки цепей ДНК, осуществляемой термостабильной ДНК-полимеразой, которая использует для этой цели свободные нуклеотиды.В результате одного цикла ПЦР количество молекул определяемой ДНК удваивается, то есть происходит амплификация ДНК. Обычно проводят 25-40 повторных циклов амплификации и в итоге за 2-3 часа получают миллионы копий специфического фрагмента ДНК вирусов.ПЦР проводят в 0,5-1,5 мл микроцентрифужных пробирках в амплификаторах, которые автоматически регулируют смену температуры. Каждому из 3-х этапов цикла амплификации – денатурации ДНК, отжига и достройки – необходима инкубация образцов при различном температурном режиме.
Денатурация – разъединение определяемой двухспиральной ДНК на две изолированные цепи при нагревании до 90-950С в течение 0,5-1,0 мин.
Отжиг – восстановление двухцепочечной структуры определяемой ДНК в области присоединения комплементарного праймера – проводится при температуре 40-600С 0,5 мин.
Удлинение (элонгация) – достройка каждой цепи определяемой ДНК доисходного двухцепочечного состояния с помощью термостабильной ДНК-полимеразы – проводится при температуре 70-750С в течение 2-5 мин.
Наличие ДНК после повторных циклов амплификации определяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, авторадиографией или другими методами.С помощью ПЦР возможно определение не только нуклеотидной последовательности ДНК, но также РНК и, следовательно, выявление РНК-вирусов (для этого в реакцию вводят обратную транскриптазу). ПЦР особенно ценен для диагностики латентных вирусных инфекций и ВИЧ-инфекции.
№24. Классификация бактерий по типу дыхания. Культивирование облигатно – анаэробных и аэробных бактерий.
Дыхание - (или биологическое окисление) микроорганизмов представляет собой совокупность биохимических процессов, в результате которых освобождается энергия, необходимая для жизнедеятельности микробных клеток.
Классификация бактерий по типам дыхания:
Облигатные аэробы (возбудители туберкулеза, чумы, холеры) – микроорганизмы, для оптимального роста которых необходимо 21 % кислорода.
Облигатные анаэробы (возбудители столбняка, ботулизма, газовой анаэробной инфекции, бактероиды, фузобактерии) – бактерии, которые растут при отсутствии свободного молекулярного кислорода за счет процессов брожения. Они получают кислород из органических соединений в процессе их метаболизма. Некоторые из них не выносят даже незначительного количества свободного кислорода.
Факультативные анаэробы (стафилококки, ешерихии, сальмонели, шигели и другие) – приспособились, в зависимости от условий среды (наличию или отсутствию кислорода), переключать свои метаболические процессы с использованием молекулярного кислорода на брожение и наоборот.
Микроаэрофилы (молочнокислые, азотфиксирующие бактерии) – особенная группа микробов, для которых концентрация кислорода при культивировании может быть уменьшена до 2 %. Высшие его концентрации способны задерживать рост.
Капнеические (возбудитель бруцеллеза бычьего типа) – микроорганизмы, которые требуют, кроме кислорода, еще и до 10 % углекислого газа.
Культивирование облигатно анаэробных бактерий
Посевы анаэробных бактерий в жидких средах заливают вазелиновым или другим маслом. При использовании плотных сред посевы культивируют в специальных устройствах — анаэростатах (откуда откачивают воздух) либо заливают посевы тонким слоем агара. Анаэробные условия можно создать химическим путём, поместив посевы в эксикаторы, на дно которых заливают щелочной раствор пирогаллола, поглощающего кислород. Также можно использовать методы Фортнера и Малкиной.
Метод Фортнера . Посевы проводят на чашку Петри с толстым слоем среды, разделённым пополам узкой канавкой, вырезанной в агаре. На одну половину засевают культуру аэробных бактерий, на другую — анаэробных. Края чашки заливают парафином и инкубируют в термостате. Первоначально наблюдают рост аэробов, а затем (после поглощения кислорода) — рост анаэробов.
Метод Малкиной. При посеве по методу Малкиной используют 2 пробирки со скошенным МПА, соединенных трубкой. В 1ну пробирку сеют культуру аэроба, в другую анаэроба. Когда исчерпается кислород при росте аэробных бактерий, начинается рост анаэробных.
Посевы анаэробов производят на среде Китта –Тароции, состоящей из МПБ, 0,5% глюкозы и кусочков печени или мясного фарша. Перед посевом среду прогревают в водяной бане в течение 10-15 минут для удаления воздуха и остужают. После посева среду заливают слоем вазелинового масла или парафином с целью изоляции от атмос-го воздуха.
*Основные питательные среды для культивирования анаэробов: сахарный агар, сахарный кровяной агар Цейсслера, среда Китт-Тароцци, среда Вильсона-Блера, тиогликолевая среда.
Культивирование аэробных микроорганизмов
Для выращивания аэробов необходимы питательные среды, создание оптимальных температурных условий и наличие кислорода.
проводят следующим образом:
*на поверхности плотных сред или в тонком слое жидких сред, когда микроорганизмы получают кислород непосредственно из воздуха;
*в жидких средах (глубинное культивирование). В этом случае микроорганизмы используют растворенный в среде кислород. В связи с низкой растворимостью кислорода, для обеспечения роста аэробных бактерий в толще среды, требуется постоянное аэрирование.
* в простых термостатах. Обычно рост бактерий в виде помутнения жидких питательных сред или образования колоний на плотных средах наблюдается через 18—24 ч культивирования в термостате.
№ 25. Методы выделения чистых культур аэробных бактерий. Этапы выделения.
Чистая культура — это популяция микроорганизмов одного вида. Для выделения чистой культуры аэробов используют методы, основанные на:
1. Механическим разобщением бактериальных клеток;
2.  Действии физических и химических факторов, оказывающих избирательное действие;
3.  Способности некоторых бактерий размножаться в организме.
Метод Дригальского основан на механическом разобщение на поверхности плотной питательной среды микробов всех видов, входящих в состав исследуемого материала.
I этап.
1.  Определение микробного состава исследуемого материала (приготовление мазка, окраска по Граму).
2.  Посев в чашку Петри: одну каплю материала наносят на поверхность МПА и растирают шпателем. Не обжигая шпателя и не набирая нового материала, засевают вторую и третью чашки.
3.  Засеянные чашки переворачивают вверх дном и инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С.
II этап.
1.  Микроскопическое изучение колонки по величине, форме, окраске, характеру поверхности, краев, консистенции колонии. Колонии бактерий имеют различные размеры (от 2 до 4 мм), округлую правильную или неправильную форму, гладкую или шероховатую поверхность, ровные или фестончатые края и различную консистенцию. Колонии бактерий могут быть бесцветными или имеют белый, золотистый, красный, лимонно-желтый цвет за счет образования пигмента.
2.  Микроскопическое изучение одной исследуемой колонии (приготовление мазка, окраска по Граму).
3.  Оставшуюся часть колонии пересевают в пробирку со скошенным огаром.(МПА)
4. Пробирку инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С. III этап.
Проверка культуры на чистоту (макроскопическим — однородный рост, микроскопическим- однородные по морфологическим признакам и тинкториальным признакам клетки). Идентификация проводится по:
- ферментативным свойствам.
- антигенным свойствам фагочувствительности токсигенности и другим признакам
Биологический метод получения чистых культур основан на заражении чувствительных экспериментальных животных исследуемым материалом, содержащим микробные ассоциации. Например, пневмококки можно выделить из мокроты, заражая чувствительную к ним белую мышь. Через 4 ч в крови мыши обнаруживают чистую культуру пневмококков, так как они опережают размножение других микроорганизмов.
Чистую культуру аэробных бактерий можно также получить, если на исследуемый материал воздействовать каким либо физическим или химическим фактором, оказывающим избирательное антибактериальное действие.
№26. Методы выделения чистых культур облигатно анаэробных бактерий. Этапы выделения.
А) по Цейсслеру :
1 этап: из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. При обнаружении подозрительных на анаэробы микробов исследуемый материал засевают на среду Китта-Тароции. В случае необходимости предварительно исследуемый материал разводят стерильным 0,9% р-ом NaOH. заливают вазелиновым маслом или парафином, подписывают и ставят в термостат. При темп-ре 37, на 18-24ч.
2этап: на след день посевы просматривают и описывают характер роста. готовят мазок, окрашивают по Граму, микроскопируют, описывая морфологич. и тинкториаль. Свойства бактерии. Затем производят пересев в чашки Петри на сахарно – кровяной агар, для получения изолированных колоний. Чашки помещают в анаэростат и термостатируют при темп-ре 37, на 18-24ч.
3 этап: посевы просматривают, изучают изолированные колонии, описывают характер роста. Морфологию бактерий исследуют приготовлением мазка из колонии, окрашенного по Граму. Далее для выделения и накопления чистой культуры производят пересев подозрительной колонии в пробирку со средой Китта – Тароции. Пробирки термостатируют При темп-ре 37, на 18-24ч.
4 этап: отмечают визуальный характер роста чистой культуры . проводят проверку чистой культуры, для чего ее микроскопируют
Б) по Вейнбергу:
1 этап: из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. При обнаружении подозрительных на анаэробы микробов исследуемый материал засевают на среду Китта-Тароции. В случае необходимости предварительно исследуемый материал разводят стерильным 0,9% р-ом NaOH. заливают вазелиновым маслом или парафином, подписывают и ставят в термостат. При темп-ре 37, на 18-24ч. каплю материала со среды Китт — Тароцци переносят в растопленный и слегка остуженный сахарный агар, затем набирают в трубки Виньял — Вейона. Засеянные пробирки быстро охлаждают холодной водой, при этом агар застывает и фиксирует разобщенное положение отдельных микробных клеток в глубине столбика агара. инкубируют в термостате При темп-ре 37, на 18-24ч.
2 этап: выросшие в узких пробирках колонии изучают с помощью лупы. На месте отобранной подозрительной колонии делают распил пробирки, колонию отбирают и пересевают на среду Китта- Тароции. Пробирки культивируют При темп-ре 37, на 18-24ч.
Ш этап — проверяют чистоту выделенной культуры.
№27. Ферменты бактерий. Методы выявления сахаролитических и протеолитических ферментов.
Ферменты, образуемые бактериальной клеткой, могут локализоваться как внутри клетки — эндоферменты, так и выделяться в окружающую среду — экзоферменты. Экзоферменты играют большую роль в обеспечении бактериальной клетки доступными для проникновения внутрь источниками углерода и энергии. Большинство гидролаз является экзоферментами, которые, выделяясь в окружающую среду, расщепляют крупные молекулы пептидов, полисахаридов, липидов до мономеров и димеров, способных проникнуть внутрь клетки. Ряд экзоферментов, например гиалуронидаза, коллагеназа и другие, являются ферментами агрессии. Некоторые ферменты локализованы в периплазматическом пространстве бактериальной клетки. Они участвуют в процессах переноса веществ в бактериальную клетку. Ферментативный спектр является таксономическим признаком, характерным для семейства, рода и — в некоторых случаях — для видов. Поэтому определением спектра ферментативной активности пользуются при установлении таксономического положения бактерий. Наличие экзоферментов можно определить при помощи дифференциально-диагностических сред, поэтому для идентификации бактерий разработаны специальные тест-системы, состоящие из набора дифференциально-диагностических сред.
Известно более 2000 ферментов. Они объединены в шесть классов:
оксидоредуктазы окислительно-восстановительные ферменты (к ним относятся дегидрогеназы, оксидазы и др.);
трансферазы, переносящие отдельные радикалы и атомы от одних соединений к другим;
гидролазы, ускоряющие реакции гидролиза, то есть расщепления веществ на более простые с присоединением молекул воды (эстеразы, фосфатазы, глюкозидазы и др.);
лиазы, отщепляющие от субстратов химические группы негидролитическим путем (карбоксилазы и др.);
изомеразы, превращающие органические соединения в их изомеры (фосфогексоизомераза и др.);
лигазы, или синтетазы, ускоряющие синтез сложных соединений из более простых (аспарагинсинтетаза, глютаминсинтетаза и др.).
В соответствии с механизмами генетического контроля у бактерий выделяют три группы ферментов:
- конститутивные, синтез которых происходит постоянно;
- индуцибельные, синтез которых индуцируется наличием субстрата;
- репрессибельные, синтез которых подавляется избытком продукта реакции.
Идентификация бактерий по ферментативной активности.
Наиболее часто определяют ферменты класса гидролаз и оксидоредуктаз, используя специальные методы и среды.
Для определения протеолитической активности микроорганизмы засевают в столбик желатина уколом. Через 3—5 дней посевы просматривают и отмечают характер разжижения желатина. При разложении белка некоторыми бактериями могут выделяться специфические продукты — индол, сероводород, аммиак. Для их определения служат специальные индикаторные бумажки, которые помещают между горлышком и ватной пробкой в пробирку с МПБ или (и) пептонной водой, засеянными изучаемыми микроорганизмами. Индол (продукт разложения триптофана) окрашивает в розовый цвет полоску бумаги, пропитанной насыщенным раствором щавелевой кислоты. Бумага, пропитанная раствором ацетата свинца, в присутствии сероводорода чернеет. Для определения аммиака используют красную лакмусовую бумажку.
Определение сахаралитической активности проводится на средах Гисса, состоящих из 1% пептонной воды, 0,5% определенного углевода( глюкоза, лактоза, манит и др) и индикатора Андреде (кислый фуксин в 1н растворе NaOH). В пробирку со средой опускают поплавок ( стеклянная трубочка один конец которой запаян) для улавливания газообразных продуктов. Свежеприготовленная среда имеет соломенно- желтый цвет. Результаты посевов учитываются ч/з 24-48 ч. О разложении углеводов судят по изменению цвета среды( она приобретает красный цвет, в результате сдвига рН в кислую сторону). О газообразовании свидетельствует накопление газа в поплавке.
28. Понятие об инфекции, инфекционном процессе, инфекционной болезни. Условия возникновения инфекционной болезни.
Инфекция — сложный биологический процесс взаимодействия макроорганизма и возбудителя болезни, происходящий при определенных условиях внешней среды. Комплекс этих реакций сопровождается явным или скрытым нарушением постоянства внутренней среды макроорганизма (гомеостаза)
Инфекционный процесс - это комплекс взаимных приспособительных реакций в ответ на внедрение и размножение патогенного микроорганизма в макроорганизме, направленный на восстановление нарушенного гомеостаза и биологического равновесия с окружающей средой.
Инфекционная болезнь — клинически выраженная инфекция. Внешними признаками ее являются нарушение жизнедеятельности организма, функциональные расстройства, морфологические повреждения тканей, выделение возбудителя во внешнюю среду.
Возникновение, течение и исход инфекционной болезни определяются тремя группами факторов: 1) количественные и качественные характеристики микроба — возбудителя инфекционного процесса;
2) состояние макроорганизма, степень его восприимчивости к микробу;
3) действие физических, химических и биологических факторов окружающей микроб и макроорганизма внешней среды, которая и обуславливает возможность установления контактов между представителями разных видов, общность территории обитания разных видов, пищевые связи, плотность и численность популяций, особенности передачи генетической информации, особенности миграции и т. д. При этом по отношению к человеку под условиями внешней среды, прежде всего, следует понимать социальные условия его жизнедеятельности. Первые два биологических фактора являются непосредственными участниками инфекционного процесса, развивающегося в макроорганизме под действием микроба. Третий, экологический, фактор оказывает на инфекционный процесс опосредованное воздействие, снижая или повышая восприимчивость макроорганизма, либо снижая и повышая инфицирующую дозу и вирулентность возбудителя, активируя механизмы заражения и соответствующие им пути передачи инфекции, и т. д. еще зависит от патогенности и вирулентности микроорган-ма, его дозы, способа и пути проникновения, состояния макроорганизма. факторы вирул-ти определяют способность микроорг-ов прикрепляться на клетках, размножаться на их поверхности, проникать в клетки, противостоять факторам неспецифической резистентности и иммунной защиты организма.
29. Токсины бактерий, их природа и свойства.
Важную роль в развитии инфекционного процесса играют токсины. По биологическим свойствам бактериальные токсины делятся на экзотоксины и эндотоксины.  Экзотоксины – белковые токсины продуцируют как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии. По своей химической структуре это белки. По механизму действия экзотоксина на клетку различают несколько типов:
1-й тип - мембранотоксины - гемолизины, лейкоцидины;
2-й тип - функциональные блокаторы, или нейротоксины (тетаноспазмин, ботулинический токсин). Они блокируют передачу нервных импульсов в синапсах (в клетках спинного и головного мозга);
3-й тип - термостабильные и термолабильные энтеротоксины - они активизируют клеточную аденилатциклазу, что приводит к нарушению энтеросорбции и развитию диарейного синдрома. Такие токсины продуцируют холерный вибрион (холероген), энтеротоксигенные кишечные палочки; 
4-й тип - цитотоксины - это токсины, блокирующие синтез белка субклеточном уровне. К ним относятся: энтеротоксин золотистых стафилококков,  дерматонекротоксины стафилококков, палочек сибирской язвы, сине-зеленого гноя и возбудителя коклюша, а также антиэлонгаторы. Последние препятствуют элонгации (наращиванию) или транслокации, т. е. передвижению и-РНК вдоль рибосомы, и тем самым блокируют синтез белка. К антиэлонгаторам относят дифтерийный гистотоксин, токсин синегнойной палочки;
5-й тип - эксфолиатины, образуемые некоторыми штаммами золотистого стафилококка, и эритрогенины, продуцируемые пиогенным стрептококком группы А. Они влияют на процесс взаимодействия клеток между собой и с межклеточными веществами, и полностью определяют клиническую картину инфекции. В первом случае возникает пузырчатка новорожденных, во втором - скарлатина.
Механизм действия белковых токсинов сводится к повреждению жизненно важных процессов в клетке: повышение проницаемости мембран, блокады синтеза белка и других биохимических процессов в клетке или нарушении взаимодействия и взаимокоординации между клетками. Экзотоксины являются сильными антигенами, которые и индуцируют образование в организме антитоксинов. По степени связи с бактериальной клетки экзотоксины делятся условно на три класса. • Класс А - токсины, секретируемые во внешнюю среду; • Класс В - токсины частично секретируемые и частично связанные с микробной клеткой; • Класс С - токсины, связанные и с микробной клеткой и попадающие в окружающую среду при разрушении клетки. Экзотоксины обладают высокой токсичностью. Под воздействием формалина и температуры экзотоксины утрачивают свою токсичность, но сохраняют иммуногенное свойство. Такие токсины получили название анатоксины и применяются для профилактики заболевания столбняка, гангрены, ботулизма, дифтерии, а также используются в виде антигенов для иммунизации животных с целью получения анатоксических сывороток.
По отношению к t различают: термолабильные и термостабильные белковые токсины.
Все экзотоксины состоят из 2х составных частей: 1 ая- рецептор и служит для фиксации молекулы токсина на соответствующей « клетке- мишени» 2ая- собственно токсический фрагмент- проникает внутрь клетки, блокирую жизненно важные метаболические реакции.  Эндотоксины по своей химической структуре являются липополисахаридами, которые содержатся в клеточной стенке грамотрицательных бактерий и выделяются в окружающую среду при лизисе бактерий. Эндотоксины не обладают специфичностью, термостабильны, менее токсичны, обладают слабой иммуногенностью. При поступлении в организм больших доз эндотоксины угнетают фагоцитоз, гранулоцитоз, моноцитоз, увеличивают проницаемость капилляров, оказывают разрушающее действие на клетки. Микробные липополисахариды разрушают лейкоциты крови, вызывают дегрануляцию тучных клеток с выделением вазодилататоров, активируют фактор Хагемана, что приводит к лейкопении, гипертермии, гипотонии, ацидозу, диссеминированной внутрисосудистой коагуляции (ДВК). Эндотоксины стимулируют синтез интерферонов, активируют систему комплемента по классическому пути, обладают аллергическими свойствами.  При введении небольших доз эндотоксина повышается резистентность организма, усиливается фагоцитоз, стимулируются В-лимфоциты. Сыворотка животного иммунизированного эндотоксином обладает слабой антитоксической активностью и не нейтрализует эндотоксин.  Патогенность бактерий контролируется тремя типами генов: гены - собственной хромосомами, гены, привнесенные плазмидами и умеренными фагами.
№30.Факторы патогенности бактерий.
Патогенность бактерий и её факторы
Патогенность — видовой признак, передающийся по наследству, закрепленный в геноме микроорганизма, в процессе эволюции паразита, т. е. это генотипический признак, отражающий потенциальную возможность микроорганизма проникать в макроорганизм (инфективность) и размножаться в нем (инвазионность), вызывать комплекс патологических процессов, возникающих при заболевании.
Фенотипическим признаком патогенного микроорганизма является его вирулентность, т.е. свойство штамма, которое проявляется в определенных условиях (при изменчивости микроорганизмов, изменении восприимчивости макроорганизма и т.д.). Вирулентность можно повышать, понижать, измерять, т.е. она является мерой патогенности. Количественные показатели вирулентности могут быть выражены в DLM (минимальная летальная доза), DL50 (доза, вызывающая гибель 50 % экспериментальных животных). При этом учитывают вид животных, пол, массу тела, способ заражения, срок гибели.
К факторам патогенности относят способность микроорганизмов прикрепляться к клеткам (адгезия), размещаться на их поверхности (колонизация), проникать в клетки (инвазия) и противостоять факторам защиты организма (агрессия).
Адгезия является пусковым механизмом инфекционного процесса. Под адгезией понимают способность микроорганизма адсорбироваться на чувствительных клетках с последующей колонизацией. Структуры, ответственные за связывание микроорганизма с клеткой называются адгезинами и располагаются они на его поверхности. Адгезины очень разнообразны по строению и обусловливают высокую специфичность - способность одних микроорганизмов прикрепляться к клеткам эпителия дыхательных путей, других - кишечного тракта или мочеполовой системы и т.д. На процесс адгезии могут влиять физико-химические механизмы, связанные с гидрофобностью микробных клеток, суммой энергии притяжения и отталкивания. У грамотрицательных бактерий адгезия происходит за счет пилей I и общего типов. У грамположительных бактерий адгезины представляют собой белки и тейхоевые кислоты клеточной стенки. У других микроорганизмов эту функцию выполняют различные структуры клеточной системы: поверхностные белки, липополисахариды, и др.
Инвазия. Под инвазивностью понимают способность микробов проникать через слизистые, кожу, соединительно-тканные барьеры во внутреннюю среду организма и распространятся по его тканям и органам. Проникновение микроорганизма в клетку связывается с продукцией ферментов, а также с факторами подавляющими клеточную защиту. Так фермент гиалуронидаза расщепляет гиалуроновую кислоту, входящую в состав межклеточного вещества, и, таким образом, повышает проницаемость слизистых оболочек и соединительной ткани. Нейраминидаза расщепляет нейраминовую кислоту, которая входит в состав поверхностных рецепторов клеток слизистых оболочек, что способствует проникновению возбудителя в ткани.
Агрессия. Под агрессивностью понимают способность возбудителя противостоять защитным факторам макроорганизма. К факторам агрессии относятся: протеазы - ферменты, разрушающие иммуноглобулины; коагулаза - фермент, свертывающий плазму крови; фибринолизин - растворяющий сгусток фибрина; лецитиназа - фермент, действующий на фосфолипиды мембран мышечных волокон, эритроцитов и других клеток. Патогенность может быть связана и с другими ферментами микроорганизмов, при этом они действуют как местно, так и генерализованно.
Важную роль в развитии инфекционного процесса играют токсины. По биологическим свойствам бактериальные токсины делятся на экзотоксины и эндотоксины.
Экзотоксины продуцируют как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии. По своей химической структуре это белки. По механизму действия экзотоксина на клетку различают несколько типов: цитотоксины, мембранотоксины, функциональные блокаторы, эксфолианты и эритрогемины. Механизм действия белковых токсинов сводится к повреждению жизненно важных процессов в клетке: повышение проницаемости мембран, блокады синтеза белка и других биохимических процессов в клетке или нарушении взаимодействия и взаимокоординации между клетками. Экзотоксины являются сильными антигенами, которые и индуцируют образование в организме антитоксинов. Экзотоксины обладают высокой токсичностью. Под воздействием формалина и температуры экзотоксины утрачивают свою токсичность, но сохраняют иммуногенное свойство. Такие токсины получили название анатоксины и применяются для профилактики заболевания столбняка, гангрены, ботулизма, дифтерии, а также используются в виде антигенов для иммунизации животных с целью получения анатоксических сывороток.
Эндотоксины по своей химической структуре являются липополисахаридами, которые содержатся в клеточной стенке грамотрицательных бактерий и выделяются в окружающую среду при лизисе бактерий. Эндотоксины не обладают специфичностью, термостабильны, менее токсичны, обладают слабой иммуногенностью. При поступлении в организм больших доз эндотоксины угнетают фагоцитоз, гранулоцитоз, моноцитоз, увеличивают проницаемость капилляров, оказывают разрушающее действие на клетки. Микробные липополисахариды разрушают лейкоциты крови, вызывают дегрануляцию тучных клеток с выделением вазодилататоров, активируют фактор Хагемана, что приводит к лейкопении, гипертермии, гипотонии, ацидозу, диссеминированной внутрисосудистой коагуляции (ДВК).Эндотоксины стимулируют синтез интерферонов, активируют систему комплемента по классическому пути, обладают аллергическими свойствами. При введении небольших доз эндотоксина повышается резистентность организма, усиливается фагоцитоз, стимулируются В-лимфоциты. Сыворотка животного иммунизированного эндотоксином обладает слабой антитоксической активностью и не нейтрализует эндотоксин.
Патогенность бактерий контролируется тремя типами генов: гены - собственной хромосомами, гены, привнесенные плазмидами и умеренными фагами.
31) Характерные особенности инфекционных заболеваний.
инфекция - есть взаимодействие патогенного микроба и восприимчивого хозяина в определённых условиях среды. В основе лежит явление паразитизма. критерием паразитизма является патогенное воздействие паразита на организм хозяина и ответная, защитная реакция со стороны организма хозяина. Паразитизм — свойство, закрепленное за видом и передающееся по наследству. Все возбудители инфекционных и инвазионных болезней человека, животных и растений относятся к паразитам, т. е. способны к паразитической форме существования в живой системе. Крайним проявлением Инфекционного процесса - инфекционная болезнь, когда формируется очаг заболевания и проявляются его клинические симптомы.
ОСОБЕННОСТИ:
1)Специфичность - каждый возбудитель вызывает специфическую для него инфекционную болезнь, со специфической локализацией в органе/ткани.
2) Контагиозность - Способность передаваться от заражённого к не заражённому, т.е. быстро распространяться среди чувствительной популяции.
3)Цикличность течения, т.е. наличие периодов:
1. Инкубационный период — время, которое проходит с момента заражения до начала клинических проявлений болезни. В зависимости от свойств возбудителя, иммунного статуса макроорганизма, характера взаимоотношений между макро- и микроорганизмом инкубационный период может колебаться от нескольких часов до нескольких месяцев и даже лет;
2. Продромальный период — время появления первых клинических симптомов общего характера, неспецифических для данного заболевания, например слабость, быстрая утомляемость, отсутствие аппетита и т. д.;
3. Период острых проявлений заболевания — разгар болезни. В это время проявляются типичные для данного заболевания симптомы: температурная кривая, высыпания, местные поражения и т. п.;
4. Период реконвалесценции — период угасания и исчезновения типичных симптомов и клинического выздоровления.
32 Виды инфекций -
1) Моноинфекция - заболевания, вызванные одним видом микроорганизмов.
2)Смешанные инфекции - миксты- развиваются в ходе заражения несколькими видами микроорганизмов. Особенности : более тяжёлое течение, патогенность не имеет суммарного характера. Пр - Сифилис+гонорея+хламидиоз при половом заражении
Виды микстов: А) Если микроорганизмы активизируют или отягощают течение болезни - Активаторы или Синергисты(Вирус Гриппа и стрептококки группы B)
Б)Если микроорганизмы подавляют друг друга - Антагонисты(Кишечная палочка подавляет активность сальмонелл, шигелл, стрепто/стафиллококков).
В)Никак не взаимодействуют - индиферентные.
3)Суперинфекции - вторичные инфекции, развившиеся на фоне имеющихся заболеваний. Повторное заражение происходит до выздоровления.(Сифилис).
4)Реинфекции - повторное заражение тем же видом после выздоровления. Пр- гонорея, сифилис, менингококковая инфекции, скарлатина, дизентерия, рожистое воспаление.
5)Рецидив - заражение в ходе действия возбудителя, уже имевшегося в организме, обострение клинических симптомов.
6)Возникновение инфекционного процесса, вызванного активацией нормальной флоры, населяющей кожу и слизистые оболочки, обозначается как аутоинфекция.
7) Вторичная инфекция - возникает на фоне развившегося превичного заболевания и вызывается другим видом возбудителя.. Бывает Экзогенной/Эндогенной. А) Экзогенные: при попадании возбудителя в организм из вне.
Б)Эндогенная(оппуртонистическая) - Вызывается представителями нормальной микрофлоры при снижении защитных сил организма.(Эшерихиозы, занос кишечных бактерий в мочевыводящие пути.). Важная особенность - отсутствие инкубационного периода. Разновидность эндогенных инфекций – аутоинфекции, они возникают в результате самозаражения путем переноса возбудителя из одного биотопа в другой.
33. Пути проникновения микробов в организм человека.
Путь передачи - совокупность факторов передачи(), обеспечивающие перенос патогенного агента от больного, или носителя к здоровому.
Механизм передачи- способ перемещения возбудителя от источника в организм. Имеет 3 этапа:
1)Выведение возбудителя из источника в окружающую среду.
2)Пребывание возбудителя в окружающей среде и её объектах(В факторах передачи).
3)Проникновение возбудителя в организм.
В зависимости от механизма различают пути:
1)Фекально-оральный механизм имеет алиментарный (через еду), водный, контактно-бытовой пути передачи.
2)Кровяной(трансмиссивный) - парентеральный, половой, через укусы насекомых.
3)Аэрогенный - воздушно-капельный, воздушно-пылевой.
4)Контактный- раневой и контактно-половой .
Для многих возбудителей путь передачи строго специфичен, и при своём нарушении (при попадании шигелл в дыхательный тракт) может прерваться и заболевание не возникнет, или ещё больше усугубить заболевание(попадание бледной трепонемы в кровь).
Распространение бактерий вирусов и токсинов в организме больного.
Любая инфекционная болезнь, независимо от клинических признаков и локализации микроба в организме, представляет собой заболевание всего организма. Если патогенные микробы проникли в кровеносные сосуды и начинают размножаться в крови, то они очень быстро проникают во все внутренние органы и ткани. Такую форму инфекции называют септицемией. Она характеризуется быстротой и злокачественностью течения и нередко заканчивается смертельным исходом. Когда микробы находятся в крови временно и не размножаются в ней, а посредством ее только переносятся в другие чувствительные ткани и органы, где затем уже размножаются, инфекцию принято называть бактериемией. Иногда микробы, проникнув в организм, остаются только в поврежденной ткани и, размножаясь выделяют токсины. Последние, проникая в кровь, вызывают общее тяжелое отравление (столбняк, злокачественный отек). Такой процесс называется токсемией. Пути выделения патогенных микробов из организма также различны: со слюной, мокротой, мочой, калом, молоком, выделениями из родовых путей.
34Классификация инфекций. По происхождению. По локализации. По количеству возбудителей. по течению. Микробоносительство.
По происхождению :
1) Экзогенные: при попадании возбудителя в организм из вне.
2)Эндогенная(оппуртонистическая) - Вызывается представителями нормальной микрофлоры при снижении защитных сил организма.(Эшерихиозы, занос кишечных бактерий в мочевыводящие пути.). Важная особенность - отсутствие инкубационного периода. Разновидность эндогенных инфекций – аутоинфекции, они возникают в результате самозаражения путем переноса возбудителя из одного биотопа в другой.
По локализации:
1) Местная(очаговая)- возбудитель находится только в одном месте - в месте попадания микробов в макроорганизм(входные ворота). Пр- дифтерия.
2)Генерализованная - С распространением по организму. Если возбудитель распространяется в кровию НЕ РАЗМНОЖАЯСЬ в ней - наблюдается бактеримия(если возбудитель-бактерия), вирусемия(с вирусами),фунгемия(с грибами),паразитемия(с простейшими - лейшманиозы). В случае РАЗМНОЖЕНИЯ в крови бактерий - СЕПСИС. Переходит в септикопиемию, если размножение идёт во внутренних органах с образованием гнойных очагов воспаления(при иерсиниозе). Если при инфекционном процессе главным фактором патогенности служит токсикация организма через кровяное русло, то возикает явление токсинемиии. Кроме лимфо/гемато-генных путей генерализации инфекции есть ещё и нейрогенный путь - нейропробазия.(бешенство).
По количеству возбудителей:
1)моноинфекции - заболевания, вызванные одним видом микроорганизмов.
2)Полиинфекции - смешанные - миксты.
по течению:
1Острые -непродолжительны(Дни. недели грипп, корь, чума. холера)
2Хронические- Месяцы и годы (бруцеллёз, туберкулёз, сифилис). Острые могут переходить в хронические( дизентерия, гонорея). хронические же протекают в виде ремиссий(без клинических симптомов. или их ослабление) и рецидивов(обострение)
Если симптомы выражены конкретно, то наблюдается манифестная форма инфекции. Форма без симптомов - Иннапарантная.
При носительстве возбудитель размножается, циркулирует в организме, формирование иммунитета и очищение организма от возбудителя, но отсутствуют клинически выявляемые симптомы болезни (нарушение самочувствия, лихорадка, интоксикация, признаки органной патологии). Такое течение инфекционного процесса характерно для вирусных и бактериальных инфекций (вирусного гепатита А, полиомиелита, менингококковой инфекции и некоторых других). О течении инфекционного процесса судят по наличию специфических антител у лиц, не имевших клинических проявлений данной инфекционной болезни и не иммунизированных против нее.
В соответствии с носительством конкретных типов возбудителей применяют термины «бактерионосительство» («бациллоносительство»), «вирусоносительство», «гельминтоносительство». Т.е. длительное или кратковременное пребывание возбудителя в организме, с последующим его распространением в окружающей среде.
Различают следующие виды носительства: реконвалесцентное, иммунное, «здоровое», инкубационное, транзиторное.
При латентной инфекции инфекционный процесс также длительно не проявляет себя клинически, но возбудитель сохраняется в организме, иммунитет не формируется и на определенном этапе при достаточно длительном сроке наблюдения возможно появление клинических признаков болезни. Такое течение инфекционного процесса наблюдается при туберкулезе, сифилисе, герпетической инфекции, цитомегаловирусной инфекции и др.Выделение во внешнюю среду возбудителя не происходит.
35) Понятие иммунитета, его виды. Факторы неспецифической защиты организма.
Иммунитет – это способ защиты организма от генетически чужеродных веществ – антигенов экзогенного и эндогенного происхождения, направленный на поддержание и сохранение гомеостаза, структурной и функциональной целостности организма, биологической (антигенной)индивидуальности каждого организма и вида в целом.
виды
Врожденный, иди видовой, иммунитет, он же наследственный, генетический, конституциональный — это выработанная в процессе филогенеза генетически закрепленная, передающаяся по наследству невосприимчивость данного вида и его индивидов к какому-либо антигену (или микроорганизму), обусловленная биологическими особенностями самого организма, свойствами данного антигена, а также особенностями их взаимодействия.
Пример - невосприимчивость человека к некоторым возбудителям (чума крупного рогатого скота, болезнь Ньюкасла, поражающая птиц, оспа лошадей и др.), к бактериофагам, поражающим клетки бактерий. Различают чувствительность к одним и тем же антигенам у различных линий животных, т. е. животных с различным генотипом.
Видовой иммунитет может быть абсолютным и относительным. Например, нечувствительные к столбнячному токсину лягушки могут реагировать на его введение, если повысить температуру их тела. Белые мыши, не чувствительные к какому-либо антигену, приобретают способность реагировать на него, если воздействовать на них иммунодепрессантами или удалить у них центральный орган иммунитета — тимус.
Приобретенный иммунитет — это невосприимчивость к антигену чувствительного к нему организма человека, животных и пр., приобретаемая в процессе онтогенеза в результате естественной встречи с этим антигеном организма, например, при вакцинации.
Примером естественного приобретенного иммунитета у человека - невосприимчивость к инфекции, после перенесенного заболевания(постинфекционный иммунитет, после брюшного тифа, дифтерии), а также «проиммуниция», т. е. приобретение невосприимчивости к ряду микроорганизмов, обитающих в окружающей среде и в организме человека и постепенно воздействующих на иммунную систему своими антигенами.
В отличие от приобретенного иммунитета в результате перенесенного инфекционного заболевания или «скрытной» иммунизации, на практике широко используют преднамеренную иммунизацию антигенами для создания к ним невосприимчивости организма. С этой целью применяют вакцинацию, а также введение специфических иммуноглобулинов, сывороточных препаратов или иммунокомпетентных клеток. Приобретаемый при этом иммунитет называют поствакцинальным, и служит он для защиты от возбудителей инфекционных болезней, а также других чужеродных антигенов.
Приобретенный иммунитет может быть активным и пассивным. Активный иммунитет обусловлен активной реакцией, активным вовлечением в процесс иммунной системы при встрече с данным антигеном (например, поствакцинальный, постинфекционный иммунитет), а пассивный иммунитет формируется за счет введения в организм уже готовых антител, т. е. специфические иммуноглобулины и иммунные сыворотки, а также иммунные лимфоциты. Иммуноглобулины широко используют для пассивной иммунизации, а также для специфического лечения при многих инфекциях (дифтерия, ботулизм, бешенство, корь и др.). Пассивный иммунитет у новорожденных детей создается иммуноглобулинами при плацентарной внутриутробной передаче антител от матери ребенку ииграет существенную роль в защите от многих детских инфекций в первые месяцы жизни ребенка.
Иммунное состояние, т. е. активный иммунитет, может поддерживаться, сохраняться либо в отсутствие, либо только в присутствии антигена в организме. В первом случае антиген играет роль пускового фактора, а иммунитет называют стерильным. Во втором случае иммунитет трактуют как нестерильный. Примером стерильного иммунитета является поствакцинальный иммунитет при введении убитых вакцин, а нестерильного— иммунитет при туберкулезе, который сохраняется только в присутствии в организме микобактерий туберкулеза.
Иммунитет (резистентность к антигену) может быть системным, т. е. генерализованным, и местным, при котором наблюдается более выраженная резистентность отдельных органов и тканей, например слизистых верхних дыхательных путей (поэтому иногда его называют мукозальным).
Неспецифические факторы защиты организма
Механические факторы. Кожа и слизистые оболочки механически препятствуют проникновению микроорганизмов и других антигенов в организм. Они все же могут попадать в организм при заболеваниях и повреждениях кожи (травмы, ожоги, воспалительные заболевания, укусы насекомых, животных и т. д.), а в некоторых случаях и через нормальную кожу и слизистую оболочку, проникая между клетками или через клетки эпителия (например, вирусы). Механическую защиту осуществляет также реснитчатый эпителий верхних дыхательных путей, так как движение ресничек постоянно удаляет слизь вместе с попавшими в дыхательные пути инородными частицами и микроорганизмами.
Физико-химические факторы. Антимикробными свойствами обладают уксусная, молочная, муравьиная и другие кислоты, выделяемые потовыми и сальными железами кожи; соляная кислота желудочного сока, а также протеолитические и другие ферменты, имеющиеся в жидкостях и тканях организма. Особая роль в антимикробном действии принадлежит ферменту лизоциму. Этот протеолитический фермент получил название «мурамидаза», так как разрушает клеточную стенку бактерий и других клеток, вызывая их гибель и способствуя фагоцитозу. Лизоцим вырабатывают макрофаги и нейтрофилы. Содержится он в больших количествах во всех секретах, жидкостях и тканях организма (кровь, слюна, слезы, молоко, кишечная слизь, мозг и т. д.). Снижение уровня фермента приводит к возникновению инфекционных и других воспалительных заболеваний. В настоящее время осуществлен химический синтез лизоцима, и он используется как медицинский препарат для лечения воспалительных заболеваний.
Иммунобиологические факторы. В процессе эволюции сформировался комплекс гуморальных и клеточных факторов неспецифической резистентности, направленных на устранение чужеродных веществ и частиц, попавших в организм.
Гуморальные факторы неспецифической резистентности состоят из разнообразных белков, содержащихся в крови и жидкостях организма. К ним относятся белки системы комплемента(обычно неактивны, но приобретают активность в результате последовательной активации и взаимодействия компонентов комплемента), интерферон(вызывает в клетке, инфицированной вирусом, состояние противовирусной резистентности), трансферрин(конкурирует с микроорганизмами за необходимые для них метаболиты), β-лизины(вырабатываются тромбоцитами и обладают бактерицидным действием), белок пропердин(участвует в активации комплемента), фибронектин(способствует фагоцитозу) и др.
Большое значение в неспецифической резистентности имеют клетки, способные к фагоцитозу, а также клетки с цитотоксической активностью, называемые естественными киллерами, или NK-клетками. NK-клетки представляют собой особую популяцию лимфоцитоподобных клеток (большие гранулосодержащие лимфоциты), обладающих цитотоксическим действием против чужеродных клеток (раковых, клеток простейших и клеток, пораженных вирусом).
.
36) Антигены: определение, основные свойства. Антигены бактериальной клетки.
Антиген – это биополимер органической природы, генетически чужеродный для макроорганизма, который при попадании в последний распознаётся его иммунной системой и вызывает иммунные реакции, направленные на его устранение.
Антигены обладают рядом характерных свойств: антигенностью, специфичностью и иммуногенностью.
Антигенность. способность молекулы антигена активировать компоненты иммунной системы и взаимодействовать с факторами иммунитета (антитела, клон эффекторных лимфоцитов). Т.е , антиген должен выступать специфическим раздражителем по отношению к иммунокомпетентным клеткам. При этом взаимодействие компоненты иммунной системы происходит не со всей молекулой одновременно, а только с ее небольшим участком, который получил название «антигенная детерминанта», или «эпитоп».
Чужеродность является обязательным условием для реализации антигенности. По этому критерию система приобретенного иммунитета дифференцирует потенциально опасные объекты биологического мира, синтезированные с чужеродной генетической матрицы. Понятие «чужеродность» относительное, так как имму-нокомпетентные клетки не способны напрямую анализировать чужеродный генетический код. Они воспринимают лишь опосредованную информацию, которая, как в зеркале, отражена в молекулярной структуре вещества.
Иммуногенность — потенциальная способность антигена вызывать по отношению к себе в макроорганизме специфическую защитную реакцию. Степень иммуногенности зависит от ряда факторов, которые можно объединить в три группы: 1. Молекулярные особенности антигена; 2. Клиренс (показатель скорости очищения биологических жидкостей или тканей организма)антигена в организме; 3. Реактивность макроорганизма.
К первой группе факторов отнесены природа, химический состав, молекулярный вес, структура и некоторые другие характеристики.
Иммуногенность в значительной степени зависит от природы антигена. Важна также оптическая изомерия аминокислот, составляющих молекулу белка. Большое значение имеет размер и молекулярная масса антигена. На степень иммуногенности также оказывает влияние пространственная структура антигена. Оказалась также существенной стерическая стабильность молекулы антигена. Еще одним важным условием иммуногенности является растворимость антигена.
Вторая группа факторов связана с динамикой поступления антигена в организм и его выведения. Так, хорошо известна зависимость иммуногенности антигена от способа его введения. На иммунный ответ влияет количество поступающего антигена: чем его больше, тем более выражен иммунный ответ.
Третья группа объединяет факторы, определяющие зависимость иммуногенности от состояния макроорганизма. В этой связи на первый план выступают наследственные факторы.
Специфичностью называют способность антигена индуцировать иммунный ответ к строго определенному эпитопу. Это свойство обусловлено особенностями формирования иммунного ответа — необходима комплементарность рецепторного аппарата иммунокомпетентных клеток к конкретной антигенной детерминанте. Поэтому специфичность антигена во многом определяется свойствами составляющих его эпитопов. Однако при этом следует учитывать условность границ эпитопов, их структурное разнообразие и гетерогенность клонов антигенреактивных лимфоцитовой специфичности. В результате этого организм на антигенное раздражение всегда отвечает поликлональными иммунным ответом.
Антигены бактериальной клетки. В структуре бактериальной клетки различают жгутиковые, соматические, капсульные и некоторые другие антигены. Жгутиковые, или Н-антигены, локализуются в локомоторном аппарате бактерий — их жгутиках. Они представляют собой эпитопы сократительного белка флагеллина. При нагревании флагеллин денатурирует, и Н-антиген теряет свою специфичность. Фенол не действует на этот антиген.
Соматический, или О-антиген, связан с клеточной стенкой бактерий. Его основу составляют ЛПС. О-антиген проявляет термостабильные свойства — он не разрушается при длительном кипячении. Однако соматический антиген подвержен действию альдегидов (например, формалина) и спиртов, которые нарушают его структуру.
Капсулъные, или К-антигены, располагаются на поверхности клеточной стенки. Встречаются у бактерий, образующих капсулу. Как правило, К-антигены состоят из кислых полисахаридов (уроновые кислоты). В то же время у бациллы сибирской язвы этот антиген построен из полипептидных цепей. По чувствительности к нагреванию различают три типа К-антигена: А, В, и L. Наибольшая термостабильность характерна для типа А, он не денатурирует даже при длительном кипячении. Тип В выдерживает непродолжительное нагревание (около 1 часа) до 60 "С. Тип L быстро разрушается при этой температуре. Поэтому частичное удаление К-антигена возможно путем длительного кипячения бактериальной культуры.
На поверхности возбудителя брюшного тифа и других энтеробактерий, которые обладают высокой вирулентностью, можно обнаружить особый вариант капсульного антигена. Он получил название антигена вирулентности, или Vi-антигена. Обнаружение этого антигена или специфичных к нему антител имеет большое диагностическое значение.
Использование.
Антигенными свойствами обладают также бактериальные белковые токсины, ферменты и некоторые другие белки, которые секретируются бактериями в окружающую среду (например, туберкулин). При взаимодействии со специфическими антителами токсины, ферменты и другие биологически активные молекулы бактериального происхождения теряют свою активность. Столбнячный, дифтерийный и ботулинический токсины относятся к числу сильных полноценных антигенов, поэтому их используют для получения анатоксинов для вакцинации людей.
В антигенном составе некоторых бактерий выделяется группа антигенов с сильно выраженной иммуногенностью, чья биологическая активность играет ключевую роль в формировании патогенности возбудителя. Связывание таких антигенов специфическими антителами практически полностью инактивирует вирулентные свойства микроорганизма и обеспечивает иммунитет к нему. Описываемые антигены получили название протективных. Впервые протективный антиген был обнаружен в гнойном отделяемом карбункула, вызванного бациллой сибирской язвы. Это вещество является субъединицей белкового токсина, которая ответственна за активацию других, собственно вирулентных субъединиц — так называемого отечного и летального факторов.
37) Иммуноглобулины, структура и функции. Классы иммуноглобулинов, их характеристика.
иммуноглобулины — это антитела, вырабатываемые в ответ на введение антигена и способные специфически взаимодействовать с этим же антигеном.
Функции. Важнейшая - взаимодсйствие их активных центров с комплементарными им детерминантами антигенов. Вторичная функция состоит в их способности:
• связывать антиген с целью его нейтрализации и элиминации из организма, т. е. принимать участие в формировании защиты от антигена;
• участвовать в распознавании «чужого» антигена;
• обеспечивать кооперацию иммунокомпетентных клеток (макрофагов, Т- и В-лимфоцитов);
• участвовать в различных формах иммунного ответа (фагоцитоз, киллерная функция, ГНТ, ГЗТ, иммунологическая толерантность, иммунологическая память).
Структура антител. гликопротеиды,. Имеют видовые отличия, связанные с набором аминокислот(всего их18). молекулы имеют цилиндрическую форму, видны в электронном микроскопе; устойчивы к слабым кислотам, щелочам, нагреванию до 60 °С. Выделить иммуноглобулины из сыворотки крови можно физическими и химическими методами (электрофорез, изоэлектрическое осаждение спиртом и кислотами, высаливание, аффинная хроматография и др.). Эти методы используют в производстве при приготовлении иммунобиологических препаратов.
Иммуноглобулины разделяются на пять классов: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Иммуноглобулины М, G, А имеют подклассы. Все классы и подклассы различаются по аминокислотной последовательности.
Молекулы иммуноглобулинов всех пяти классов состоят из полипептидных цепей: двух одинаковых тяжелых цепей Н и двух одинаковых легких цепей — L, соединенных между собой дисульфидными мостиками. Соответственно каждому классу иммуноглобулинов, т.е. М, G, A, E, D, различают пять типов тяжелых цепей: (мю), (гамма), (альфа), (эпсилон) и (дельта), различающихся по антигенности. Легкие цепи всех пяти классов являются общими и бывают двух типов: κ (каппа) и λ (ламбда); L-цепи иммуноглобулинов различных классов могут вступать в соединение (рекомбинироваться) как с гомологичными, так и с гетерологичными Н-цепями. Однако в одной и той же молекуле могут быть только идентичные L-цепи (κ или λ). Как в Н-, так и в L-цепях имеется вариабельная — V область, в которой последовательность аминокислот непостоянна, и константная — С область с постоянным набором аминокислот. В легких и тяжелых цепях различают NH2- и СООН-концевые группы.
Как Н-цепи, так и L-цепи имеют отдельные, линейно связанные компактные участки, названные!!!!!!!!! доменами; в Н-цепи их по 4, а в L-цепи — по 2.
Активные центры( детерминанты), которые формируются в V-областях, занимают примерно 2 % поверхности молекулы иммуноглобулина. Каждая молекула иммуноглобулина может связать две молекулы антигена. Поэтому антитела являются двухвалентными.
Типовой структурой молекулы иммуноглобулина является IgG. Остальные классы иммуноглобулинов отличаются от IgG дополнительными элементами организации их молекулы.
В ответ на введение любого антигена могут вырабатываться антитела всех пяти классов. Обычно вначале вырабатывается IgM, затем IgG, остальные — несколько позже.
Иммуноглобулины по структуре, антигенным и иммунобиологическим свойствам разделяются на пять классов: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.
Иммуноглобулины класса G (IgG) составляют около 80% сывороточных иммуноглобулинов (в среднем 12 г/л), с молекулярной массой 160000 и скоростью седиментации 7S. Они образуются на высоте первичного иммунного ответа и при повторном введении антигена (вторичный ответ). IgG обладают достаточно высокой активностью, т.е. сравнительно высокой скоростью связывания с антигеном, особенно бактериальной природы. При связывании активных центров IgG с эпитопами антигена в области его Fc-фрагмента обнажается участок, ответственный за фиксацию первой фракции системы комплемента, с последующей активацией системы комплемента по классическому пути. IgG — мономер, имеет 2 антигенсвязывающих центра (может одновременно связать 2 молекулы антигена, валентность равна 2), молекулярную массу около 160 кДа , константу седиментации 7S. Различают подтипы Gl, G2, G3 и G4. Обладает высокой аффинностью(хорошо связывается).IgG обеспечивает нейтрализацию, опсонизацию и маркирование антигена, осуществляет запуск комплемент-опосредованного цитолиза и антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности.
Иммуноглобулины класса М (IgM) первыми начинают синтезироваться в организме плода и первыми появляются в сыворотке крови после иммунизации людей большинством антигенов. Обладает высокой авидностью. валентность = 10 Они составляют около 13% сывороточных иммуноглобулинов при средней концентрации 1 г/л. По молекулярной массе они значительно превосходят все другие классы иммуноглобулинов. Это связано с тем, что IgM являются пентамерами, т.е. состоят из 5 субъединиц, каждая из которых имеет молекулярную массу.. IgM принадлежит большая часть нормальных антител — изогемагглютининов, которые присутствуют в сыворотке крови в соответствии с принадлежностью людей к определенным группам крови. Эти аллотипические варианты IgM играют важную роль при переливании крови. Они не проходят через плаценту. При взаимодействии с антигенами in vitro вызывают их агглютинацию, преципитацию или связывание комплемента. В последнем случаее активация системы комплемента ведет к лизису корпускулярных антигенов.
Иммуноглобулины класса A (IgA) встречаются в сыворотке крови и в секретах на поверхности слизистых оболочек. В сыворотке крови присутствуют мономеры IgA с константой седиментации 7S в концентрации 2,5 г/л. Что достигается к 10 годам жизни ребенки. Сывороточный IgA синтезируется в плазматических клетках селезенки, лимфатических узлов и слизистых оболочек. Они не агглютинируют и не преципитируют антигены, не способны активировать комплемент по классическому пути, вследствие чего не лизи-руют антигены. IgA обеспечивает нейтрализацию, опсони-зацию и маркирование антигена, осуществляет запуск антителозависимой клеточно-опос-редованной цитотоксичности. IgA — мономер, имеет 2 антигенсвязывающих центра (т. е. 2-валентный), молекулярную массу около 170 кДа. Обладает высокой аффинностью. Может быть неполным антителом. Не связывает комплемент. Не проходит через плацентарный барьер.
Секреторные иммуноглобулины класса IgA (SIgA) отличаются от сывороточных наличием секреторного компонента, связанного с 2 или 3 мономерами иммуноглобулина А. Молекулярная масса 350 кДа и выше, константа седиментации 13S и выше. Секреторный компонент является бета-глобулином с молекулярной массой 71 KD. Он синтезируется клетками секреторного эпителия и может функционировать в качестве их рецептора, а к IgA присоединяется при прохождении последнего через эпителиальные клетки.
Секреторные IgA играют существенную роль в местном иммунитете, поскольку препятствуют адгезии микроорганизмов на эпителиальных клетках слизистых оболочек рта, кишечника, респираторных и мочевыводящих путей. Вместе с тем SIgA в агрегированной форме активирует комплемент по альтернативному пути, что приводит к стимуляции местной фагоцитарной защиты. Благодаря S-цепи он устойчив к действию протеаз.Секреторные IgA препятствуют адсорбции и репродукции вирусов в эпителиальных клетках слизистой оболочки, например при аденовируспой инфекции, полиомиелите, кори. Около 40% общего IgA содержится в крови.
.Иммуноглобулины класса D (lgD). До 75% IgD содержится в крови, достигая концентрации 0,03 г/л. Он имеет молекулярную массу 180 000 D и скорость седиментации около 7S. IgD не проходит через плаценту и не связывает комплемент является одним из рецепторов В-лимфоцитов.
Иммуноглобулины класса Е (lgE). В норме содержатся в крови в концентрации 0,00025 г/л. Они синтезируются плазматическими клетками в бронхиальных и перитонеальных лимфатических узлах, в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта со скоростью 0,02 мг/кг массы в сутки. Иммуноглобулины класса Е называют также реагинами, поскольку они принимают участие в анафилактических реакциях, обладая выраженной цитофильностью. Молекулярная масса — около 190 кДа, константа седиментации —8S, мономер. Не связывает комплемент. Не проходит через плацентарный барьер. Обладает выраженной цитофильностью — тропностью к тучным клеткам и базофилам. Участвует в развитии гиперчувствительности немедленного типа — реакция I типа.
.
38) Гиперчувствительность немедленного и замедленного типов. Кожно - аллергические пробы и их использование в диагностике инфекционных болезней.
К аллергическим реакциям относят два типа реагирования на чужеродное вещество: гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ)( реакции, проявляющиеся уже через 20—30 мин после повторной встречи с антигеном, связана с выработкой антител) и гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ реакции, возникающие не ранее чем через 24—48 ч, связана с клеточными реакциями
К ГЗТ относятся следующие формы проявления: туберкулиновая реакция, замедленная аллергия к белкам, контактная аллергия.
В отличие от реакций I, II и III типов реакции IV типа не связаны с антителами, а обусловлены клеточными реакциями, прежде всего Т-лимфоцитами. Реакции замедленного типа могут возникать при сенсибилизации организма:
1. Микроорганизмами и микробными антигенами (бактериальными, грибковыми, протозойными, вирусными); 2. Гельминтами; 3. Природными и искусственно синтезированными гаптенами (лекарственные препараты, красители); 4. Некоторыми белками.
Следовательно, реакция замедленного типа может вызываться практически всеми антигенами. Но наиболее ярко она проявляется на введение полисахаридов, низкомолекулярных пептидов, т. е. малоиммуногенных антигенов. При этом реакцию вызывают малые дозы антигенов и лучше всего при внутрикожном введении.
Механизм аллергической реакции этого типа состоит в сенсибилизации Т-лимфоцитов-хелперов антигеном. Сенсибилизация лимфоцитов вызывает выделение медиаторов, в частности интерлейкина-2, которые активируют макрофаги и тем самым вовлекают их в процесс разрушения антигена, вызвавшего сенсибилизацию лимфоцитов. Цитотоксичность проявляют также и сами Т-лимфоциты. О роли лимфоцитов в возникновении аллергий клеточного типа свидетельствуют возможность передачи аллергии от сенсибилизированного животного несенсибилизированному с помощью введения лимфоцитов, а также подавление реакции при помощи антилимфоцитарной сыворотки.
Морфологическая картина при аллергиях клеточного типа носит воспалительный характер, обусловленный реакцией лимфоцитов и макрофагов на образующийся комплекс антигена с сенсибилизированными лимфоцитами.
Аллергические реакции клеточного типа проявляются в виде туберкулиновой реакции, замедленной аллергии к белкам, контактной аллергии.
Туберкулиновая реакция возникает через 5—6 ч после внутрикожного введения сенсибилизированным туберкулезной палочкой животным или человеку туберкулина, т. е. антигенов туберкулезной палочки. Выражается реакция в виде покраснения, припухлости, уплотнения на месте введения туберкулина. Сопровождается иногда повышением температуры тела, лимфопенией. Развитие реакции достигает максимума через 24—48 ч. Туберкулиновая реакция используется с диагностической целью для выявления заболеваний туберкулезом или контактов организма с туберкулезной палочкой.
Замедленная аллергия возникает при сенсибилизации малыми дозами белковых антигенов с адъювантом, а также конъю-гатами белков с гаптенами. В этих случаях аллергическая реакция возникает не раньше чем через 5 дней и длится 2—3 нед. Видимо, здесь играют роль замедленное действие конъюгированных белков на лимфоидную ткань и сенсибилизация Т-лимфо-цитов.
Контактная аллергия возникает, если антигенами являются низкомолекулярные органические и неорганические вещества, которые в организме соединяются с белками, образуя конъюга-ты. Конъюгированные соединения, выполняя роль гаптенов, вызывают сенсибилизацию. Контактная аллергия может возникать при длительном контакте с химическими веществами, в том числе фармацевтическими препаратами, красками, косметическими препаратами (губная помада, краска для ресниц). Проявляется контактная аллергия в виде всевозможных дерматитов, т. е. поражений поверхностных слоев кожи.
Значение. Все реакции гиперчувствительности, в том числе и ГЗТ имеют большое значение. Их механизмы лежат в основе воспаления, которое способствует локализации инфекционного агента или иного антигена в пределах определённых тканей и формированию полноценной иммунной реакции защитного характера.
Гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ) — гиперчувствительность, обусловленная антителами (IgE, IgG, IgM) против аллергенов. Развивается через несколько минут или часов после воздействия аллергена: расширяются сосуды, повышается их проницаемость, развиваются зуд, бронхоспазм, сыпь, отеки. Поздняя фаза ГНТ дополняется действием продуктов эозинофилов и нейтрофилов.
К ГНТ относятся I, II и III типы аллергических реакций (по Джеллу и Кумбсу): I тип — анафилактический, обусловленный главным образом действием IgE; II тип — цитотоксический, обусловленный действием IgG, IgM; III тип — иммунокомплексный, развивающийся при образовании иммунного комплекса IgG, IgM с антигенами. В отдельный тип выделяют антирецепторные реакции.
Основные типы реакций гиперчувствительности
I тип — анафилактический. При первичном контакте с антигеном образуются IgE, которые прикрепляются Fc-фрагментом к тучным клеткам и базофилам. Повторно введенный антиген перекрестно связывается с IgE на клетках, вызывая их дегрануляцию, выброс гистамина и других медиаторов аллергии.
Первичное поступление аллергена вызывает продукцию плазмацитами IgE, IgG4. Синтезированные IgE прикрепляются Fc-фрагментом к Fc-pe цепторам (FceRl) базофилов в крови и тучных клеток в слизистых оболочках, соединительной ткани. При повторном поступлении аллергена на тучных клетках и базофилах образуюто комплексы IgE с аллергеном (перекрестная сшивка FceRl антигеном), вызывающие дегрануляцию клеток.
Клинические проявления гиперчувствительности I типа.
Клинические проявления гиперчувствительности I типа могут протекать на фоне атопии. Атопия — наследственная предрасположенность к развитию ГНТ, обусловленная повышенной выработкой IgE-антител к аллергену, повышенным количеством Fc-рецепторов для этих антител на тучных клетках, особенностями распределения тучных клеток и повышенной проницаемостью тканевых барьеров.
Анафилактический шок — протекает остро с развитием коллапса, отеков, спазма гладкой мускулатуры; часто заканчивается смертью. Крапивница — увеличивается проницаемость сосудов, кожа краснеет, появляются пузыри, зуд. Бронхиальная астма — развиваются воспаление, бронхо-спазм, усиливается секреция слизи в бронхах.
II тип — цитотоксический. Антиген, расположенный на клетке «узнается» антителами классов IgG, IgM. При взаимодействии типа «клетка-антиген-антитело» происходит активация комплемента и разрушение клетки по трем направлениям: комплементзависимый цитолиз; фагоцитоз; антителозависимая клеточная цитотоксичность. Время реакции — минуты или часы.
Ко II типу гиперчувствительности близки антирецепторные реакции (так называемый IV тип гиперчувствительности), основой которых являются антирецепторные антитела, например антитела против рецепторов к гормонам.
Клинические проявления II типа. По II типу гиперчувствительности развиваются некоторые аутоиммунные болезни, обусловленные появлением аутоантител к антигенам собственных тканей: злокачественная миастения, аутоиммунная гемолитическая анемия, вульгарная пузырчатка, синдром Гудпасчера, аутоиммунный гипертиреоидизм, инсулинозави-симый диабет II типа.
Аутоиммунную гемолитическую анемию вызывают антитела против Rh-антигена эритроцитов; эритроциты разрушаются в результате активации комплемента и фагоцитоза. Лекарственно-индуцируемые гемолитическая анемия, гранулоцитопения и тромбоцитопения сопровождаются появлением антител против лекарства — гаптена и цитолизом клеток, содержащих этот антиген.
III тип — иммунокомплексный. Антитела классов IgG, IgM образуют с растворимыми антигенами иммунные комплексы, которые активируют комплемент. При избытке антигенов или недостатке комплемента иммунные комплексы откладываются на стенке сосудов, базальных мембранах, т. е. структурах, имеющих Fc-рецепторы.
Первичными компонентами III типа гипрчувствительности являются растворимые иммунные комплексы антиген-антитело и комплемент (анафилатоксины С4а, СЗа, С5а). При избытке антигенов или недостатке комплемента иммунные комплексы откладываются на стенке сосудов, базальных мембранах, т.е. структурах, имеющих Fc-рецепторы. Повреждения обусловлены тромбоцитами, нейтрофилами, иммунными комплексами, комплементом. Привлекаются провоспалительные цитокины, включая TNF-a и хемокины. На поздних стадиях в процесс вовлекаются макрофаги.
Реакция может быть общей (например, сывороточная болезнь) или вовлекать отдельные органы, ткани, включая кожу (например, системная эритематозная волчанка, реакция Артюса), почки (например, волчаночный нефрит), легкие (например, аспергиллез) или другие органы. Эта реакция может быть обусловлена многими микроорганизмами. Она развивается через 3-10 часов после экспозиции антигена, как в реакции Артюса. Антиген может быть экзогенный (хронические бактериальные, вирусные, грибковые или прото-зойные инфекции) или эндогенный, как при системной эри-тематозной волчанке.
Клинические проявления III типа. Сывороточная болезнь происходит при введении высоких доз антигена, например лошадиной противостолбнячной сыворотки. Через 6-7 дней в крови появляются антитела против лошадиного белка, которые, взаимодействуя с данным антигеном, образуют иммунные комплексы, откладывающиеся в стенках кровеносных сосудов и тканях. Развиваются системные васкулиты, артриты (отложение комплексов в суставах), нефрит (отложение комплексов в почках).
Реакция Артюса развивается при повторном внутрикожном введении антигена, который локально образует иммунные комплексы с ранее накопившимися антителами. Проявляется отеком, геморрагическим воспалением и некрозом.
Аллергические пробы, их сущности, применение.
Аллергические пробы - биологические реакции для диагностики ряда заболеваний, основанные на повышенной чувствительности организма, вызванной аллергеном.
При инфекционных заболеваниях развивается повышенная чувствительность организма к возбудителям и продуктам их жизнедеятельности.
Все аллергические пробы подразделяют на две группы — пробы in vivo и in vitro.
К первой группе {in vivo) относятся кожные пробы, осуществляемые непосредственно на пациенте и выявляющие аллергию немедленного (через 20 мин) и замедленного (через 24 — 48 ч) типов.
Аллергические пробы in vitro основаны на выявлении сенсибилизации вне организма больного. Их применяют тогда, когда по тем или иным причинам нельзя произвести кожные пробы, .
Для проведения аллергических проб используют аллергены(диагностические препараты, предназначенные для выявления специфической сенсибилизации организма). это очищенные фильтраты бульонных культур, реже взвеси убитых микроорганизмов или АГ, выделенные из них.
Кожные пробы. Инфекционные аллергены вводят внутрикожно или накожно, втирая в участки кожи. При внутрикожном способе в среднюю треть передней поверхности предплечья специальной тонкой иглой вводят 0,1 мл аллергена. Через 28 - 48 ч оценивают результаты реакции ГЗТ, определяя на месте введения размеры папулы(сыпь).
Неинфекционные аллергены (пыльца растений, бытовая пыль, пищевые продукты, лекарственные и химические препараты) вводят в кожу уколом (прик-тест), накожно - втирая или внутрикожной инъекцией разведенного раствора аллергена. Результаты учитывают в течение 20 мин (ГНТ) по величине папулы (иногда до 20 мм в диаметре), наличию отека и зуда. Внутрикожные пробы ставят в случае отрицательного или сомнительного результата прик-теста. По сравнению с последним, дозу аллергена уменьшают в 100-5000 раз.
Кожные пробы на наличие ГЗТ применяют для выявления инфицированности людей микобактериями туберкулеза (проба Манту), возбудителями бруцеллеза (проба Бюрне), лепры (реакция Митсуды), туляремии, сапа, актиномикоза, дерматомикозов, токсоплазмоза, некоторых гельминтозов и др.
Пробы in vitro. безопасны для больного, достаточно чувствительны, позволяют количественно оценить уровень аллергизации организма.
В настоящее время разработаны тесты для определения чувствительности, основанные на реакциях Т- и B-лимфоцитов, тканевых базофилов, выявлении общих специфических IgE в сыворотке крови и др. К ним относятся реакции торможения миграции лейкоцитов и бласттрансформации лимфоцитов, специфическое розеткообразование, базофильный тест Шелли, реакция дегрануляции тканевых базофилов, а также аллергосорбентные методы (определение специфических IgE в сыворотке крови).
Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ). РТМЛ основана на подавлении миграции моноцитов и других лейкоцитов под действием медиаторов, вырабатываемых сенсибилизированными лимфоцитами, в присутствии специфического аллергена.
Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТ). В основе этой реакции лежит способность нормальных лимфоцитов периферической крови вступать в митоз и превращаться в бластные формы при культивировании их in vitro под действием специфических факторов — аллергенов и неспецифических стимуляторов митогенеза — митогенов (фитогемагглютинин, конканавалин А, липополисахариды и другие вещества).
Реакция специфического розеткообразования. Розетки — характерные образования, возникающие in vitro в результате прилипания эритроцитов к поверхности иммунокомпетентных клеток. Розеткообразование может происходить спонтанно, поскольку Т-лимфоциты человека содержат рецепторы к эритроцитам барана. Спонтанное розеткообразование здоровых людей составляет 52 — 53% и служит показателем функционального состояния Т-лимфоцитов. Этот феномен воспроизводится также и в том случае, если используют эритроциты, на которых фиксированы соответствующие аллергены.
Реакция дегрануляции тканевых базофилов. Методика основана на том, что под действием аллергена происходит дегрануляция тканевых базофилов крысы, предварительно сенсибилизированных цитофильными AT из сыворотки крови больного.
Базофильный тест Шелли. Известно, что базофильные гранулоциты человека или кролика также дегранулируются в присутствии сыворотки больного и аллергена, к которому чувствителен данный пациент.
Определение антител класса IgE in vitro. Лабораторная диагностика заболеваний, в основе которых лежит ГНТ, основана на определении аллергенспецифических IgEанти-IgE. При использовании радиоактивной метки метод носит название радиоаллергосорбентного теста (PACT), но чаще в качестве метки используют фермент или флюоресцирующее вещество (ФАСТ). Время анализа — 6 — 7 часов. Принцип метода: фиксированный на твердой основе известный аллерген инкубируют с сывороткой крови больного; находящиеся в сыворотке специфические IgEанти-IgE связываются с аллергеном и, таким образом, остаются фиксированными на основе и могут вступать в специфическое взаимодействие с добавляемыми мечеными анти-IgE.
39) Реакции иммунитета. Их использование для диагностики инфекционных заболеваний.
Взаимодействие антигена с антителом имеет 2 стадии: Специфическую(Соединение активного центра антитела с антигеном, идёт быстро.) и неспецифическую(внешнее проявление реакции - медленно). Прочность комплекса антигена с антителом определяется гидрофобными, ван-дер-ваальсовыми взаимодействиями, водородными связями и называется аффинитетом. Суммарная сила взаимодействия поливалентного антитела( т.е. антитела с несколькими активными центрами) с несколькими детерминантами антигена- есть Авидность антител.
Реакции иммунитета используются для диагностики этиологии заболевания у больных и здоровых людей. Виды реакций:
1) Реакции агглютинации
2) Преципитации/
3)Реакция нейтрализации/
4) Реакции сучастием комплемента/
5)Реакции с использованием меченых антител/антигенов/
Реакции агглютинации - выявляет корпускулярные антигены т.е. антигены, расположенные на больших частицах(микрооргарнизмы, эритроциты.) Механизм: Двухвалентное антитело реагируя двумя активными центрами связывает антигены через их детерминанты. Проходит в изотоническом растворе электроолита(0,9%NaCl). Итог- образование осадка или хлопьев. Используют для определения антител в сыворотке крови больных(при тифе и паратифах - реакция Видаля), бруцеллёз( реакция Райта, Хеддлсона), туляремии, для определения групп крови.
Развёрнутая РА - в пробирке. К разведениям сыворотки больного добавляют взвесь убитых микроорганизмов(т.е. диагностикум). при 37 градусах отмечают максимальное разведение, где есть агглютинация - называют титром сыворотки крови. Разновидность - КРОВЯНО_КАПЕЛЬНАЯ ПРОБА НА ТУЛЯРЕМИЮ(нанесение убитых микроорганизмов на каплю крови и появление белёсого осадка) и реакция Хеддлсона на бруцеллёз(нанесение на каплю сыворотки диагностикума, окрашенного генциановым фиолетовым).
Ориентировочная - На предметном стекле. проводят Для определения возбудителя, полученного от больного. К капле диагностической имунной сыворотки в разведении1:10, 1:20 добавляют чистую культуру возбудителя. При образовании осадка(положительный результат) ставят развёрнутую РА с культурой выделенной от больного и разведениями диагностической сыворотки, причём увеличивая дозу сыворотки, добавляя в каждую дозу сыворотки 3 капли взвеси микроорганизмов. Реакция положительна, если агглютинация идёт в разведении лизком к титру диагностической сыворотки. В контрольном опыте осадка нет.
Реакции Прямой геммаглютинации. Прямая. т.к. исследуемые антигены- естественные компоненты эритроцитов. используется для установления групп крови. Используют стндартные сыворотки с анти-А и анти-B-агглютининами
непрямой ГемАгглютинации(РНГА, РПГА). Названы так, потому что используются антитела/антигены, искусственно сорбированные на разных корпускулярных часттицах. В основе лежит взаимодействие антиген+антитело. На эритроцитах находятся антитела/антигены, что из-за реакции с соответсвующими антителами/антигенами образуют фестончатый осадок. Используют для определения повышенной чувствительности к лекарствам, беременности, выявления инфекционных болезней.
реакция торможения пассивной(непрямой)гемангглютинации. Механизм: Антиген реагирует с антителом. Затем в смесь вносят эритроциты, что чувствительны к этому антигену. Если в среде не осталось свободных антигенов, то эритроциты не агглютинируются. Используется ля диагностики вирусных - корь краснуха, грипп, кл.энцефалит.
Коагглютинации- Антигены возбудителя определяют с помосчью стафиллококков,обработанных иммунной диагностической сывороткой. В ходе реакции образуются хлопья, состоящие из стафилококков, антител сыворотки и определяемого микроорганизма.
Метод Латекс -Агглютинации. Антиген/антитело взаимодействует с частицами латекса, что нагружены специфическими моноклальными Антигенами/антителами. через 15 мин - образуются видимые агрегаты(учёт ведётся при косом освещении на тёмном фоне). Используется для обнаружения менинго/стафило/стрептококков.
2)Преципитации - осаждение комплекса антиген - антитело(образование осадка или помутнение среды. В пробирках, нанесением раствора антигена на иммунную сыворотку.Реагент- гипериммунная сыворотка с высоким титром антител. при постановке разводят не сыворотку а антиген. Чувствительна.
реакция кольцепреципитации- на слой антисыворотки наслаивают жидкость с рвстворимым антигеном, через несолько секунд образуется кольцо преципитации. Разновидность это - Термопреципитация по Асколи - на сибирскую язву. В качестве антигенов используют прокипячённые и профильтрованные водные экстракты органов и тканей. В остальном не отличается от предыдущей.
Микропреципитации - для выявления низких титров антител(например при повышенной чувствительности к лекарству). Механизм - В сыворотку крови вносят антиген в убывающей концентрации, и если присутствует хоть какое-то(малое) количество антител, то оптическая плотность среды будет увеличена.
Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони - растопленный агаровый гель выливают на стеклянную пластинку, после его затвердевания вырезают лунки(2-3мм), куда раздельно вмещают антигены и иммунные сыворотки, что диффундируя в агар образуют преципитат в виде белой полосы.
Радиальная иммуннодиффузия - сыворотку вносят в гель из агара. В лунки геля помесчают антиген, что диффундируя в гель, образует кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Используется для определения содержания иммуноглобулинов разных классов.
иммуноэлектрофорез - слой агара наносят на предметное стекло. На разных краях вырезают по лунке, куда вносят антигены,в центре - разделяющую их канавку. Далее проводят электрофорез 1-2 часа. Разные антигены перемещаются с разной скоростью между катодом(старт) и анодом (финиш).Затем в канавку вносят преципитирующую сыворотку, и через 5-7сут в геле образуются зоны преципитации. Для визуального эффекта огар окрашивают(амидо чёрный).
3)Реакция нейтрализации.
В основе этой реакции лежит способность специфической антитоксической сыворотки нейтрализовать экзотоксин. проводят путем введения смеси антиген/антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген—антитело. исследуемый материал, в котором предполагается наличие экзотоксина, смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и вводят животным (морским свинкам, мышам).
Виды реакции:
иммобилизации - Антитела подавляют подвижность микроорганизмов. Для бледной трепоными и холерного вибриона.
Имунного лизиса - Активация системы комплемента, из-за взаимодействия антител с соответствующими клетками, вызывает лизис. Пр- гемолиз, вибриолиз.
Сложные реакции(состоят из простых).
4) Реакции сучастием комплемента - основаны на активации комплемента, из-за присоединения его к антителам, что связаны с антигеном.
Реакция связывания комплемента РСК - 2 фазы. 1-ая : Антиген реагирует с диагностической сывороткой (или диагностикумом,т.е. с микроорганизмами с специфическим антителом). и комплементом. Образующийся комплекс Антиген/ Антитело связывает комплемент. 2 фаза - индикаторная - определяется количество оставшегося, свободного комплемента. внесением его в реакционную среду гемолитической системы - эритроцитов барана и сыворотки, содержащей антитело к ним. если антиген не соответствует антителу, связывание комплемента не идёт и он реагирует с гемолитической сывороткой, вызвая гемолиз крови и феномен Лаковой крови( т.е реакция отрицательна.) Используют для диагностики сифилиса(р-ия Вассермана).
Реакция радиального гемолиза. - ставится в геле агара, содержащего эритроциты баранов и комплемент. После внесения в лунки геля гемолитической сыворотки вокруг них в результате радиальной диффузии антител образуется зона Гемолиза, чьи размеры зависят от титра. так опредедляется активность комплемента и гемолитической сыворотки и антитела в сыворотке урови больных краснухой, кл.энцефалитом, гриппом. Для этого на эритроцитах адсорбируют антигены вируса, а в лунке геля с данными эритроцитами добавляют сыворотку крови больного. противовирусные антитела реагируют с вирусными антигенами , после чего к этому комплексу присоединяется комплемент. вызывая гемолиз.
Реакция иммунофлюоресценции(РИФ) - применение антител, меченых флюорохромными красителями. При связи с антигеном образуется свечение иммунных комплексов в УФ спектре(бактерии святятся по периферии в виде каймы зелёного цвета). имеет 3 метода : прямой, непрямой, с комплементом.
5)Реакции с использованием меченых антител/антигенов
Иммуноферментный анализ(ИФА)-Выявление антигенов через антитела, связанные с ферментом(пероксидаза хрена, бета - галактаза, щёлочная фосфатаза) После образования комплекса с антителом добавляют субстрат, что расщепляется ферментом, окрашивая раствор в жёлто-карий(пероксидаза) или жёлто-зелёный (фосфатаза). Высоко чувствительный метод. Используют для обнаружения Клостридий, хламидий, стрептококков.
Радиоиммунологический анализ.(РИА) - количественное определение антител/антигенов, меченных радионуклидом, с использованием аналогичных антител/антигенов. После образования комплекса, определяют его радиоактивность по счётчику импульсов.
Иммуноблоттинг - определение антигенов / антител помсчью известных сывороток или антигенов. Механихзм - выделение антигена через электрофорез в полиакриламидном геле. потом антиген переносится на активированную бумагу или нитроцеллюлозу. Антиген проявляется с помощью ИФА(появление окрашенных пятен). Используется для диагностики.
40) Механизмы лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных болезней. Пути ее преодоления.
Антибиотикорезистентность — это устойчивость микробов к антимикробным химиопрепаратам. Бактерии следует считать резистентными, если они не обезвреживаются такими концентрациями препарата, которые реально создаются в макроорганизме. Резистентность может быть природной и приобретенной.
Природная устойчивость. Некоторые виды микробов природно устойчивы к определенным семействам антибиотиков или в результате отсутствия соответствующей мишени (например, микоплазмы не имеют клеточной стенки, поэтому не чувствительны ко всем препаратам, действующим на этом уровне), или в результате бактериальной непроницаемости для данного препарата (например, грамотрицательные микробы менее проницаемы для крупномолекулярных соединений, чем грамположительные бактерии, так как их наружная мембрана имеет «маленькие» поры).
Приобретенная устойчивость. Приобретение резистентности — это биологическая закономерность, связанная с адаптацией микроорганизмов к условиям внешней среды. Она, хотя и в разной степени, справедлива для всех бактерий и всех антибиотиков. К химиопрепаратам адаптируются не только бактерии, но и остальные микробы — от эукариотических форм (простейшие, грибы) до вирусов. Проблема формирования и распространения лекарственной резистентности микробов особенно значима для внутрибольничных инфекций, вызываемых так называемыми «госпитальными штаммами», у которых, как правило, наблюдается множественная устойчивость к антибиотикам (так называемая полирезистентность).
Генетические основы приобретенной резистентности. Устойчивость к антибиотикам определяется и поддерживается генами резистентности (r-генами) и условиями, способствующими их распространению в микробных популяциях. Приобретенная лекарственная устойчивость может возникать и распространяться в популяции бактерий в результате:
• мутаций в хромосоме бактериальной клетки с последующей селекцией (т. е. отбором) мутантов. Особенно легко селекция происходит в присутствии антибиотиков, так как в этих условиях мутанты получают преимущество перед остальными клетками популяции, которые чувствительны к препарату. Мутации возникают независимо от применения антибиотика, т. е. сам препарат не влияет на частоту мутаций и не является их причиной, но служит фактором отбора. Далее резистентные клетки дают потомство и могут передаваться в организм следующего хозяина (человека или животного), формируя и распространяя резистентные штаммы. Мутации могут быть: 1) единичные (если мутация произошла в одной клетке, в результате чего в ней синтезируются измененные белки) и 2) множественные (серия мутаций, в результате чего изменяется не один, а целый набор белков, например пени-циллинсвязывающих белков у пенициллин-резистентного пневмококка);
• переноса трансмиссивных плазмид резистентности (R-плазмид). Плазмиды резистентности (трансмиссивные) обычно кодируют перекрестную устойчивость к нескольким семействам антибиотиков. Впервые такая множественная резистентность была описана японскими исследователями в отношении кишечных бактерий. Сейчас показано, что она встречается и у других групп бактерий. Некоторые плазмиды могут передаваться между бактериями разных видов, поэтому один и тот же ген резистентности можно встретить у бактерий, таксономически далеких друг от друга. Например, бета-лактамаза, кодируемая плазмидой ТЕМ-1, широко распространена у грамотрицательных бактерий и встречается у кишечной палочки и других кишечных бактерий, а также у гонококка, резистентного к пенициллину, и гемофильной палочки, резистентной к ампициллину;
• переноса транспозонов, несущих r-гены (или мигрирующих генетических последовательностей). Транспозоны могут мигрировать с хромосомы на плазмиду и обратно, а также с плазмиды на другую плазмиду. Таким образом гены резистентности могут передаваться далее дочерним клеткам или при рекомбинации другим бактериям-реципиентам.
Реализация приобретенной устойчивости. Изменения в геноме бактерий приводят к тому, что меняются и некоторые свойства бактериальной клетки, в результате чего она становится устойчивой к антибактериальным препаратам. Обычно антимикробный эффект препарата осуществляется таким образом: агент должен связаться с бактерией и пройти сквозь ее оболочку, затем он должен быть доставлен к месту действия, после чего препарат взаимодействует с внутриклеточными мишенями. Реализация приобретенной лекарственной устойчивости возможна на каждом из следующих этапов:
• модификация мишени. Фермент-мишень может быть так изменен, что его функции не нарушаются, но способность связываться с химиопрепаратом (аффинность) резко снижается или может быть включен «обходной путь» метаболизма, т. е. в клетке активируется другой фермент, который не подвержен действию данного препарата.
• «недоступность» мишени за счет снижения проницаемости клеточной стенки и клеточных мембран или «эффлюко-механизма, когда клетка как бы «выталкивает» из себя антибиотик.
• инактивация препарата бактериальными ферментами. Некоторые бактерии способны продуцировать особые ферменты, которые делают препараты неактивными (например, бета-лактамазы, аминогликозид-модифицирующие ферменты, хлорамфениколацетилтрансфераза). Бета-лактамазы — это ферменты, разрушающие бета-лактамное кольцо с образованием неактивных соединений. Гены, кодирующие эти ферменты, широко распространены среди бактерий и могут быть как в составе хромосомы, так и в составе плазмиды.
Для борьбы с инактивирующим действием бета-лактамаз используют вещества — ингибиторы (например, клавулановую кислоту, сульбактам, тазобактам). Эти вещества содержат в своем составе бета-лактамное кольцо и способны связываться с бета-лактамазами, предотвращая их разрушительное действие на бета-лактамы. При этом собственная антибактериальная активность таких ингибиторов низкая. Клавулановая кислота ингибирует большинство известныхбета-лактамаз. Ее комбинируют с пеницил-линами: амоксициллином, тикарциллином, пиперациллином.
Предупредить развитие антибиотикорезистентности у бактерий практически невозможно, но необходимо использовать антимикробные препараты таким образом, чтобы не способствовать развитию и распространению устойчивости (в частности, применять антибиотики строго по показаниям, избегать их использования с профилактической целью, через 10—15 дней ан-тибиотикотерапии менять препарат, по возможности использовать препараты узкого спектра действия, ограниченно применять антибиотики в ветеринарии и не использовать их как фактор роста).
41.Антибиотики .Их классификация по химической структуре и спектру действия.
Антибиотики- химические вещества биологического происхождения ,избирательно тормозящие рост и размножение или убивающие микроорганизмы.
Классификация антибиотиков по химической структуре:
1)Беталактамиды:Антибиотики, в молекуле которых присутствует β-
лактамныйцикл.бициклические: производные 6-аминопеницил-
лановой кислоты (пенициллины:ампициллин,уреидопенициллин,бензопенициллин); производные 7-аминоцефалоспорановой кислоты (цефалоспорины:цефазолин,цефуроксим,цефотаксим,цефипим)
моноциклические: монобактамы(азтреонам),карбапенемы(имипенем)
2)Макролиды иазалидыАнтибиотики, содержащие в молекуле лактонное кольцо,
в состав которого входят 14 – 16 атомов. У азалидов(азитромицин) в цикле присутствует атом азота.
14-членные макролиды (эритромицин, олеандоми-
цин, кларитромицин, рокситромицин и др.)
15-членные азалиды (азитромицин);
16-членные макролиды (спирамицин и др.)
3) Аминогликозиды(аминоциклитолы)Антибиотики, в молекулах которых присутствует струк-
тура циклогексана с OH- и NH2- или гуанидино-
заместителями с гликозидными заместителями по одной
или нескольким OH-группам
производные D-стрептидина (стрептомицин);
производные 2-дезокси-D-стрептамина (канамицин,гентамицин, амикацин)
4)ТетрациклиныАнтибиотики, в молекулах которых присутствует час-
тичногидрированное ядро тетрацена
тетрациклин, окситетрациклин, доксициклин и т.д.
5)АмфениколыПрактическое значение имеет хлорамфеникол (левоми-
цетин), который по химической структуре относится к
нитрофенилалкиламинам
6)Антибиотики другой структуры
линкозамиды(линкомицин, клиндамицин);
полиеновые антибиотики (нистатин, леворин,амфотерицин В) –макролиды, молекулы которых содержат систему сопряжённых двойных связей;
гликопептиды(ванкомицин) и др.
анзамицины — группа антибиотиков, образуемых лучистым грибком Streptomycesmediterranei. Трансформация химической структуры природных анзамицинов (рифамицинов) позволила получить полусинтетические производные — рифампицин (основной представитель).антибиотики, содержащие в молекулах ароматическое ядро (как правило,нафталиновое), к которому в двух положениях присоединена алифатическаяцепь, состоящая из 15 – 20 атомов углерода
полипептиды (полимиксины В, Е, М)
Классификация по спектру действия.Спектром действия антибиотика называют набор микроорганизмов, на которые антибиотик способен оказывать влияние. В зависимости от спектра действия антибиотики могут быть:
1)влияющие преимущественно на грамположительные микроор-
ганизмы (бензилпенициллин, эритромицин);
2) влияющие преимущественно на грамотрицательные микроор-
ганизмы (уреидопенициллины, монобактамы);
3)широкого спектра действия (тетрациклины, аминогликозиды)
4)противотуберкулёзные антибиотики (стрептомицин, рифампи-
цин);
5)противогрибковые антибиотики (нистатин, грамицидин);
6)антибиотики, влияющие на простейших (трихомицин);
7)противоопухолевые антибиотики (адриамицин, оливомицин).
42.Принципы химиотерапии инфекционных болезней.Химиотерапевтические препараты и их общая характеристика.
Принципы химиотерапии:
1.Рациональный выбор препарата на основе клинического и бактериологического диагноза с учетом состояния и особенностей больного, его аллергологического анамнеза и чувствительности возбудителей к ХТС
2.Выбор оптимальных доз, путей введения и интервалов между приемами препарата с учетом возраста, массы тела, состояния больного, локализации и тяжести инфекционного процесса, фармакокинетики препарата с целью создания эффективной концентрации в организме.
3.Определение оптимального курса лечения. При острых инфекциях действие ХТС проявляется быстрее, поэтому требуется более короткая интенсивная терапия, которая должна продолжаться еще 2–3 дня после исчезновения клинических симптомов заболевания. При подострых и хронических инфекциях ХТС действуют, как правило, медленнее, поэтому курс терапии должен быть более продолжительным и при необходимости повторяться. Преждевременная отмена препарата способствует возникновению резистентных форм микробов или рецидива заболевания.
4.Комбинированное применение ХТС с целью усиления лечебного эффекта, ослабления побочного действия и уменьшения вероятности развития устойчивых форм микроорганизмов.
ХТС можно классифицировать по структуре и применению: 1) антибиотики; 2) сульфаниламидные средства; 3) производные нитрофурана;;4)производные нитромидазола.5)хинолоны;6)Диаминопиримидины;7)Противосифилитические препараты;8)противотуберкулёзные препараты;9)Азолы
1.Антибиотики- химические вещества биологического происхождения ,избирательно тормозящие рост и размножение или убивающие микроорганизмы-антибактериальные препараты,мишенями которых служат различные клеточные структуры и органоиды.В зависимости от спектра действия антибиотики могут быть:
1)влияющие преимущественно на грамположительные микроорганизмы (бензилпенициллин, эритромицин);
2) влияющие преимущественно на грамотрицательные микроор-
ганизмы (уреидопенициллины, монобактамы);
3)широкого спектра действия (тетрациклины, аминогликозиды)
4)противотуберкулёзные антибиотики (стрептомицин, рифампи-
цин);
5)противогрибковые антибиотики (нистатин, грамицидин);
6)антибиотики, влияющие на простейших (трихомицин)
7)противоопухолевые антибиотики (адриамицин, оливомицин).
2.Сульфаниламидные средства-производные амидасульфациловойкислоты.К ним относятся:сульфадимидин,сульфатиазол,сульфадиметоксин,сульфаметоксазол.Имеют широкий спектр действия,активны в отношение кокков,представителей кишечного семейства,хламидий).Но их использование привело к резистентности к ним штаммов микроорганизмов,поэтому применяют комбинированные препаратыиз сульфаниламида и триметоприма.кКним относятся бисептол,сульфатон.Они оказывают бактерицидное действие на грам+ и грам_ бактерии,применяют для лечения верхних дыхательных путей,мочевыводящих путей и др.Помеханизму действия-антиметаболиты,которые включаются в биохимические процессы,нарушаяих,что приводит к угнетению роста и гибели клетки.
3.Производные нитрофурана-синтетические нитрофуранальдегиды,выывающие бактерицидный эффект.Их применяют как интисептикиместно(фурацилин).Как химиотерапевтическое средство для лечения инфекций ЖКТ и мочевыводящих путей(фуразолидон,фурагин,нитрофурантоин).Кним чувствительны бактерии,устойчивые к антибиотикам и сульфаниламидам.Механизм-нарушения процессов дыхания микробной клетки,воздействие на ДНК.
4.Производные нитромидазола(метронидазол)оказывают бактерицидное действие на грам- анаэробные бактерии содержащих белки-ферредоксины(Helicobacter),которые восстанавливают нитрогруппу препаратов,накапливаются в клетке,вызывая нарушения структуры ДНК.К ним чувствительны простейшие:трихомонады,лямбли,кишечные амёбы.
5.Хинолоны 1 поколения-нефторированные(невиграмон,палин)имеют узкий спектр действия-кишечное семейство.Используют для лечения инфекций мочевыводящих путей.Препараты 2 поколения(норфлоксацин,ципрофлоксацин) действуют на стафилококки и многие грам-,хламидии,риккетсии,микоплазмы.3,4 поколения(левофлоксацин,моксифлоксацин)-широкий спектр, наиболее активны в отношении хламидий,пневмококков.Используются в терапии инфекций верхних дыхательных путей,мочеполовойсистемы,ЖКТ,менингита и р.Механизм-ингибирование фермента ДНК-гиразы.
6.Диаминопиримидины-ингибируют синтез ДНК у бактерий и некоторых грибов.Препараттриметоприм применяется в комбинации с сульфаметаксозолом,окахывая бактерицидное действие.
7.Противосифилитические препараты:антибиоткикпинициллиновогоряда,макролиды.Помимо антибиотиков назначают препараты висмута-бийохинол,бисмоверол.Механизм-подавление ферментов.содержщихсульфагруппу.
8.Противотуберкулёзные препараты:комбинацииантибиотиков;изониазиды-ингибирует активность ферментов клеточной стенки. Быстро развивается резистентность;этамбутол-подавляет синтез РНК;натрияпарааминосалицилат-бактериостатическое действие.
9.Азолы-производные имидазола(клотримазол,миконазол и триазола(вориконазол)-изменяют структуру ЦПМ,противогрибковые препараты.
43.Понятие о химиотерапии и ХТП.ХТИ
Химиотерапия-лечение бактериальных,вирусных,грибковых,протозойных инфекций с помощью химиотерапевтических препаратов,которые избирательно подавляют жизнедеятельность соответствующих инфекционных агентов в организме человека.
Требования к ХТП:1)максимальная терапевтическая активность при минимальной концентрации в организме человека.2)максимальное действие при минимальной токсичности.3)стабильность при широких диапазонах ph.4)не вызывать аллергических ревкций.5)не воздействовать на нормальную микрофлору.
ХТС можно классифицировать по структуре и применению: 1) антибиотики; 2) сульфаниламидные средства; 3) производные нитрофурана;;4)производные нитромидазола. 5)хинолоны;6) Диаминопиримидины;7) Противосифилитические препараты;8)противотуберкулёзные препараты;9)Азолы
1. Антибиотики- химические вещества биологического происхождения ,избирательно тормозящие рост и размножение или убивающие микроорганизмы-антибактериальные препараты,мишенями которых служат различные клеточные структуры и органоиды. В зависимости от спектра действия антибиотики могут быть:
1)влияющие преимущественно на грамположительные микроорганизмы (бензилпенициллин, эритромицин);
2) влияющие преимущественно на грамотрицательные микроор-
ганизмы (уреидопенициллины, монобактамы);
3)широкого спектра действия (тетрациклины, аминогликозиды)
4)противотуберкулёзные антибиотики (стрептомицин, рифампи-
цин);
5)противогрибковые антибиотики (нистатин, грамицидин);
6)антибиотики, влияющие на простейших (трихомицин)
7)противоопухолевые антибиотики (адриамицин, оливомицин).
2.Сульфаниламидные средства-производные амидасульфациловойкислоты.К ним относятся:сульфадимидин,сульфатиазол,сульфадиметоксин,сульфаметоксазол.Имеют широкий спектр действия,активны в отношение кокков,представителей кишечного семейства,хламидий).Но их использование привело к резистентности к ним штаммов микроорганизмов,поэтому применяют комбинированные препаратыиз сульфаниламида и триметоприма.кКним относятся бисептол,сульфатон.Они оказывают бактерицидное действие на грам+ и грам_ бактерии,применяют для лечения верхних дыхательных путей,мочевыводящих путей и др.Помеханизму действия-антиметаболиты,которые включаются в биохимические процессы,нарушаяих,что приводит к угнетению роста и гибели клетки.
3.Производные нитрофурана-синтетические нитрофуранальдегиды,выывающие бактерицидный эффект.Их применяют как интисептикиместно(фурацилин).Как химиотерапевтическое средство для лечения инфекций ЖКТ и мочевыводящих путей(фуразолидон,фурагин,нитрофурантоин).Кним чувствительны бактерии,устойчивые к антибиотикам и сульфаниламидам.Механизм-нарушения процессов дыхания микробной клетки,воздействие на ДНК.
4.Производные нитромидазола(метронидазол)оказывают бактерицидное действие на грам- анаэробные бактерии содержащих белки-ферредоксины(Helicobacter),которые восстанавливают нитрогруппу препаратов,накапливаются в клетке,вызывая нарушения структуры ДНК.К ним чувствительны простейшие:трихомонады,лямбли,кишечные амёбы.
5.Хинолоны 1 поколения-нефторированные(невиграмон,палин)имеют узкий спектр действия-кишечное семейство.Используют для лечения инфекций мочевыводящих путей.Препараты 2 поколения(норфлоксацин,ципрофлоксацин) действуют на стафилококки и многие грам-,хламидии,риккетсии,микоплазмы.3,4 поколения(левофлоксацин,моксифлоксацин)-широкий спектр, наиболее активны в отношении хламидий,пневмококков.Используются в терапии инфекций верхних дыхательных путей,мочеполовойсистемы,ЖКТ,менингита и р.Механизм-ингибирование фермента ДНК-гиразы.
6.Диаминопиримидины-ингибируют синтез ДНК у бактерий и некоторых грибов.Препараттриметоприм применяется в комбинации с сульфаметаксозолом,окахывая бактерицидное действие.
7.Противосифилитические препараты:антибиоткикпинициллиновогоряда,макролиды.Помимо антибиотиков назначают препараты висмута-бийохинол,бисмоверол.Механизм-подавление ферментов.содержщихсульфагруппу.
8.Противотуберкулёзные препараты:комбинацииантибиотиков;изониазиды-ингибирует активность ферментов клеточной стенки. Быстро развивается резистентность;этамбутол-подавляет синтез РНК;натрияпарааминосалицилат-бактериостатическое действие.
9.Азолы-производные имидазола(клотримазол,миконазол и триазола(вориконазол)-изменяют структуру ЦПМ,противогрибковые препараты.
Химиотерапевтический индек(ХТИ)с-показатель широты терапевтического действия химиотерапевтического средства, представляющий собой отношение его минимальной эффективной дозы к максимальной переносимой.Чем выше индекс,тем шире терапевтическое действие.ХТИ является важным критерием эффективности лекарственного средства.
44.Антибиотики.Общая характеристика..Историяоткрытия.Классификация по механизму действия.
Антибиотики- химические вещества биологического происхождения ,избирательно тормозящие рост и размножение или убивающие микроорганизмы.
К антибиотикам относятся ХТП,полученные на основе продуктов метаболизма, в основном микроорганизмов,иизбирательноподавляющие жизнедеятельность жругихмикроорганизмов,а также рост некоторых опухолей.
Уникальные свойства антибиотиков:
Мишень-рецептор находится не в тканях человека, а в клетке микроорганизма.
Активность антибиотиков не является постоянной, а снижается со временем, что обусловлено формированием устойчивости (резистентности).
Резистентность – неизбежное биологическое явление, предотвратить ее практически невозможно.
Антибиотикорезистентность – это опасность не только для пациента, но для многих других людей.
Свойства антибиотиков.
Высокая биологическая активность по отношению к чувствительным микроорганизмам.
Избирательность действия - активность в отношении отдельных групп микроорганизмов.
Требования :
Максимальная терапевтическая эффективность при минимальной концентрации в организме человека.
Максимальное действие при минимальной токсичности.
Стабильность при широких диапазонах рН(peros).
Не вызывать аллергических реакций у хозяина
Не воздействовать на нормальную микрофлору
Краткая история открытия: в 1928 году Александр Флеминг открыл пенициллин.ЭрнестЧейниВальтерФлори получили стабильную форму пинициллина в Оксфорде.В 1940 году Чейндоказывает,что пенициллин имеет формуß-лактама.Г.Флори и фирма «Мерк» в СШАзапустили производство пенициллина в 1943.В нашей стране в 1943 году в промышленное производство пенициллин запущен в 1943 приактивном участии Ермольевой З.В.
По механизму действия:1)ингибиторы синтеза клеточной стенки:беталактамные антибиотики –влияют на синтез пептидогликана клеточной стенки бактерий.Беталактамиды:Антибиотики, в молекуле которых присутствует β-
лактамныйцикл.бициклические: производные 6-аминопеницил-
лановой кислоты (пенициллины:ампициллин,уреидопенициллин,бензопенициллин); производные 7-аминоцефалоспорановой кислоты (цефалоспорины:цефазолин,цефуроксим,цефотаксим,цефипим)
моноциклические: монобактамы (азтреонам),карбапенемы(имипенем)Основная мишень-пенициллинов-пенициллин-связывающие белки,а также ингибиторы аутолитическихферментов.Также к этой группе относятся бацитрацины,ванкомицин,циклосерин)
2)ингибиторы функций цитоплазматической мембраны. ЦПМслужит селективно проницаемым барьером,арушение её функций приводит к выходу из клеток белков,ионов,что ведёт к её гибелиК препаратам этой группы относят полимиксины(В.Е)-нарушают осмотическую резистентность ЦПМ;полиеновые антибиотики-связывают эргостерол ЦПМ(противогрибковый препараты-нистатин,леворин,амфотерицин В);грамицидины-полипептидные антибиотики,нарушают целостность ЦПМ.
3)Ингибиторы синтеза белка-нарушают функциональные свойства рибосом.К этой группе отнесены аминогликозиды,тетрациклины,хлорамфеникол,макролиды,азалиды,линкозамиды.
-аминогликозиды Антибиотики, в молекулах которых присутствует струк-
тура циклогексана с OH- и NH2- или гуанидино-
заместителями с гликозидными заместителями по одной
или нескольким OH-группам
производные D-стрептидина (стрептомицин);
производные 2-дезокси-D-стрептамина (канамицин,гентамицин, амикацин)
Они реагируют с субъеденицей,образуя необратимый комплекс с одним из белков,в результате блокируется функция рибосом.
-тетрациклины-Антибиотики, в молекулах которых присутствует час-тичногидрированное ядро тетрацена тетрациклин, окситетрациклин, доксициклин и т.д.Взаимодействует с 30 субъединицей рибосомы,блокируя присоединение тРНК к комплексу рибосома-мРНК.
-хлорамфеникол(левомицетин)ингибирует работу ферманта, ответственного за образование пептидных связей.
-макролиды и азалиды.Антибиотики, содержащие в молекуле лактонное кольцо,
в состав которого входят 14 – 16 атомов. У азалидов(азитромицин) в цикле присутствует атом азота.
14-членные макролиды (эритромицин, олеандоми-
цин, кларитромицин, рокситромицин и др.)
15-членные азалиды (азитромицин);
16-членные макролиды (спирамицин и др.)
Механизм:проявляют бактериостатический эффект ,подавляя активность пептидилтрансфераз.Могут быть неэффективны у бактерий с мутациями.
-линкозамиды(линкомицин, клиндамицин)Механизм как у макролидов.
4)Ингибиторы транскрипции и синтеза нуклеиновых кислот. К ним относятся анзамицины— группа антибиотиков, образуемых лучистым грибком Streptomycesmediterranei. Трансформация химической структуры природных анзамицинов (рифамицинов) позволила получить полусинтетические производные — рифампицин (основной представитель).антибиотики, содержащие в молекулах ароматическое ядро (как правило,нафталиновое), к которому в двух положениях присоединена алифатическаяцепь, состоящая из 15 – 20 атомов углерода
-сульфаниламиды-производные амидасульфациловойкислоты.К ним относятся:сульфадимидин,сульфатиазол,сульфадиметоксин,сульфаметоксазол.Имеют широкий спектр действия,активны в отношение кокков,представителей кишечного семейства,хламидий).Но их использование привело к резистентности к ним штаммов микроорганизмов,поэтому применяют комбинированные препаратыиз сульфаниламида и триметоприма.кКним относятся бисептол,сульфатон.Они оказывают бактерицидное действие на грам+ и грам_ бактерии,применяют для лечения верхних дыхательных путей,мочевыводящих путей и др.Помеханизму действия-антиметаболиты,которые включаются в биохимические процессы,нарушаяих,что приводит к угнетению роста и гибели клетки.
45.Классификация антибиотиков по происхождению и спектру действия.
Классификация по происхождению
Антибиотики, полученные из грибов, например рода Penicillium (пенициллин), рода Cephalosporium (цефалоспорины).
Антибиотики, полученные из актиномицетов; группа включает около 80% всех антибиотиков. Среди актиномицетов основное значение имеют представители рода Streptomyces, являющиеся продуцентами стрептомицина, эритромицина, левомицетина.
Антибиотики, продуцентами которых являются собственно бактерии. Чаще всего с этой целью используют представителей рода Bacillus и Pseudomonas. Примерами антибиотиков данной являются полимиксины, бацитрацины, грамицидин.
Антибиотики животного происхождения; из рыбьего жира получают эктерицид, из молок рыб – экмолин, из эритроцитов – эритрин.
Антибиотики растительного происхождения. К ним можно отнести фитонциды, которые выделяют лук, чеснок, сосна, ель, сирень, другие растения. В чистом виде они не получены, так как являются чрезвычайно нестойкими соединениями. Антимикробным действием обладают многие растения, например, ромашка, шалфей, календула.
Классификация п спектру действия
.Спектром действия антибиотика называют набор микроорганизмов, на которые антибиотик способен оказывать влияние. В зависимости от спектра действия антибиотики могут быть:
1)влияющие преимущественно на грамположительные микроор-
ганизмы (бензилпенициллин, эритромицин);
2) влияющие преимущественно на грамотрицательные микроор-
ганизмы (уреидопенициллины, монобактамы);
3)широкого спектра действия (тетрациклины, аминогликозиды)
4)противотуберкулёзные антибиотики (стрептомицин, рифампи-
цин);
5)противогрибковые антибиотики (нистатин, грамицидин);
6)антибиотики, влияющие на простейших (трихомицин,метронидазол,тетрациклины);
7)противоопухолевые антибиотики (адриамицин, оливомицин).
46.Классификация антибиотиков по источнику получения.Способы получения.
По способу получения.
1. Биосинтетические (природные). Получают биосинтетически, путем культивирования микроорганизмов-продуцентов на специальной питательной среде при сохранении стерильности, оптимальной температуре, аэрации.
2. Полусинтетические продукты модификации молекул: получают присоединением к аминогруппе различных радикалов. Оксациллин относится к препаратам 1 поколения и имеет менее широкий спектр действия, чем ампициллин относящийся к препаратам 2-3 поколения. Известно множество полусинтетических цефалоспоринов.
3. Синтетические (получают путем химического синтеза)К ним относятся сульфаниламиды, производные хинолона ,производные нитрофурана.
Химиотерапевтическая активность сульфаниламидных препаратов впервые была обнаружена в 1935 г. немецким врачом и исследователем Г. Домагком.Впоследствии на основе молекулы сульфаниламида было синтезировано большое количество его производных, из которых часть получила широкое применение в медицине. Синтез различных модификаций сульфаниламидов осуществлялся в направлении создания более эффективных, продолжительно действующих и менее токсичных препаратов.За последние годы использование сульфаниламидов в клинической практике снизилось, поскольку по активности они значительно уступают современным антибиотикам и обладают сравнительно высокой токсичностью. Кроме того, в связи с многолетним, часто бесконтрольным и неоправданным применением сульфаниламидов большинство микроорганизмов выработало к ним резистентность.
Способы полученияВ настоящее время различают три способа получения антибиотиков: биологический, метод получения полусинтетических препаратов и синтез химических соединений — аналогов природных антибиотиков.
1. Биологический синтез. Одним из главных условий получения антибиотика в большом количестве является продуктивность штамма, поэтому используются наиболее продуктивные мутанты «диких штаммов», полученные методом химического мутагенеза. Продуцент выращивают в жидкой оптимальной среде, в которую и поступают продукты метаболизма, обладающие антибиотическими свойствами. Антибиотики, находящиеся в жидкости, выделяют, используя ионообменные процессы, экстракцию или растворители. Определение активности антибиотика в основном производится микробиологическими методами с использованием чувствительных тест-микробов. За Международную единицу активности антибиотика (ЕД) принимают специфическую активность, содержащуюся в 1 мкг чистого препарата пенициллина Международная единица активности равна 0,6 мкг.
2. Полусинтетические антибиотики. Их готовят комбинированным способом: методом биологического синтеза получают основное ядро молекулы нативного антибиотика, а методом химического синтеза, путем частичного изменения химической структуры — полусинтетические препараты.
Большим достижением является разработка метода получения полусинтетических пенициллинов. Методом биологического синтеза было извлечено ядро молекулы пенициллина — 6-аминопенициллановая кислота (6-АПК), которая обладала слабой антимикробной активностью. Путем присоединения к молекуле 6-АПК бензильной группы созданбензилпенициллин, который теперь получают и методом биологического синтеза. Широко применяемый в медицине под названием пенициллин, бензилпенициллин обладает сильной химиотерапевтической активностью, но активен лишь в отношении грамположительных микробов и не действует на, устойчивые микроорганизмы, особенно стафилококки, образующие фермент — р-лактамазу. Бензилпенициллин быстро теряет свою активность в кислой и щелочной средах, поэтому его нельзя применять перорально (он разрушается в желудочно-кишечном тракте).
Другие полусинтетические пенициллины: метициллин (Meticillin) — применяется для лечения инфекций, вызванных устойчивыми к бензилпенициллину стафилококками, так как не разрушается под действием фермента — (3-лактамазы; оксациллин (Oxacillin) — устойчив к кислой среде, поэтому его можно применять внутрь; ампициллин — задерживает размножение не только грамположительных, но и грамотрицательных бактерий (возбудителей брюшного тифа, дизентерии и др.).
Полусинтетические препараты получают также на основе 7-аминоцефалоспориновой кислоты (7-АЦК). Производные 7-АЦК: цефалотин (Cefalotin), цефалоридин (Сеfaloridinum) не дают аллергических реакций у лиц, чувствительных к пенициллину. Получены и другие полусинтетические антибиотики, например рифампицин (Rifampicinum) — эффективный противотуберкулезный препарат.
3. Синтетические антибиотики. Изучение химической структуры антибиотиков дало возможность получать их методом химического синтеза. Одним из первых антибиотиков, полученных таким методом, был левомицетин. Большие успехи в развитии, химии привели к созданию антибиотиков с направленно измененными свойствами, обладающих пролонгированным действием, активных в отношении устойчивых к пенициллину стафилококков. К пролонгированным препаратам относятся экмоновоциллин (Ecmonovocillinum), бициллин 1,3,5.
По спектру действия все антибиотики принято классифицировать на антибактериальные, антигрибковые и противоопухолевые.
Антибактериальные антибиотики угнетают развитие бактерий. Существуют антибиотики узкого спектра действия, которые угнетают рост только грамположительных или грамотрицательных бактерий (например, полимиксин (Polymyxin) и др.), и антибиотики широкого спектра, которые угнетают рост как грамположительных, так и грамотрицательных бактерий. К антибиотикам широкого спектра относятся беталактамиды, составляющие группу, в которую входят пенициллины и цефалоспорины. Основу молекул этих антибиотиков составляет бета-лактамное кольцо. Они обладают следующими свойствами: бактерицидный тип действия, высокая токсичность в отношении грамположительных микробов, быстрое наступление антибактериального эффекта и хорошая переносимость макроорганизмом, даже при длительном применении. В эту группу входят биосинтетические пенициллины, полусинтетические пенициллины, действующие на грамположительные микробы, и полусинтетические пенициллины и цефалоспорины с широким спектром действия.
Тетрациклины — группа антибиотиков широкого спектра действия, в которую входят природные антибиотики (тетрациклин, окситетрациклин и др.) и их полусинтетические производные.
47.Осложнения при антибиотикотерапии. Их предупреждение.
Как и всякие лекарственные средства, практически каждая группа антимикробных химиопрепаратов может оказывать побочное действие, причем и на макроорганизм, и на микробы, и на другие лекарственные средства.
Осложнения со стороны макроорганизма
Наиболее частыми осложнениями антимикробной химиотерапии являются:
Токсическое действие препаратов. Как правило, развитие этого осложнения зависит от свойств самого препарата, его дозы, способа введения, состояния больного и проявляется только при длительном и систематическом применении антимикробных химиотерапевтических препаратов, когда создаются условия для их накопления в организме. Особенно часто такие осложнения бывают, когда мишенью действия препарата являются процессы или структуры, близкие по составу или строению к аналогичным структурам клеток макроорганизма. Токсическому действию антимикробных препаратов особенно подвержены дети, беременные, а также пациенты с нарушением функций печени, почек.
Побочное токсическое влияние может проявляться как нейротоксическое (например, гликопептиды и аминогликозиды оказывают ототоксическое действие, вплоть до полной потери слуха за счет воздействия на слуховой нерв); нефротоксическое (полиены, полипептиды, аминогликозиды, макролиды, гликопептиды, сульфаниламиды); общетоксическое (противогрибковые препараты — полиены, имидазолы); угнетение кроветворения (тетрациклины, сульфаниламиды, левомицетин/хлорамфеникол, который содержит нитробензен — супрессор функции костного мозга); тератогенное [аминогликозиды, тетрациклины нарушают развитие костей, хрящей у плода и детей, формирование зубной эмали (коричневая окраска зубов), левомицетин/хлорамфеникол токсичен для новорожденных, у которых ферменты печени не полностью сформированы («синдром серого ребенка»), хинолоны — действуют на развивающуюся хрящевую и соединительную ткани].
Предупреждение осложнений состоит в отказе от противопоказанных данному пациенту препаратов, контроле над состоянием функций печени, почек и т. п.
Дисбиоз (дисбактериоз). Антимикробные химиопрепараты, особенно широкого спектра, могут воздействовать не только на возбудителей инфекций, но и на чувствительные микроорганизмы нормальной микрофлоры. В результате формируется дисбиоз, поэтому нарушаются функции ЖКТ, возникает авитаминоз и может развиться вторичная инфекция (в том числе эндогенная, например кандидоз, псевдомембранозный колит). Предупреждение последствий такого рода осложнений состоит в назначении, по возможности, препаратов узкого спектра действия, сочетании лечения основного заболевания с противогрибковой терапией (например, назначением нистатина), витаминотерапией, применением эубиотиков и т. п.
Отрицательное воздействие на иммунную систему. К этой группе осложнений относят, прежде всего, аллергические реакции. Причинами развития гиперчувствительности может быть сам препарат, продукты его распада, а также комплекс препарата с сывороточными белками. Возникновение такого рода осложнений зависит от свойств самого препарата, от способа и кратности его введения, индивидуальной чувствительности пациента к препарату. Аллергические реакции развиваются примерно в 10 % случаев и проявляются в виде сыпи, зуда, крапивницы, отека Квинке. Относительно редко встречается такая тяжелая форма проявления аллергии, как анафилактический шок. Такое осложнение чаще дают бета-лактамы (пенициллины), рифампицины. Сульфаниламиды могут вызвать гиперчувствительность замедленного типа. Предупреждение осложнений состоит в тщательном сборе аллергоанамнеза и назначении препаратов в соответствии с индивидуальной чувствительностью пациента. Кроме того, антибиотики обладают некоторым иммунодепрессивным действием и могут способство­вать развитию вторичного иммунодефицита и ослаблению напряженности иммунитета.
Эндотоксический шок (терапевтический). Это явление, которое возникает при лечении инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями. Введение антибиотиков вызывает гибель и разрушение клеток, и высвобождение больших количеств эндотоксина. Это закономерное явление, которое сопровождается временным ухудшением клинического состояния больного.
Взаимодействие с другими препаратами. Антибиотики могут способствовать потенцированию действия или инактивации других препаратов (например, эритромицин стимулирует выработку ферментов печени, которые начинают ускоренно метаболизировать лекарственные средства разного назначения).
Побочное воздействие на микроорганизмы.
Применение антимикробных химиопрепаратов оказывает на микробы не только прямое угнетающее или губительное воздействие, но также может привести к формированию атипичных форм микробов (например, к образованию L-форм бактерий или изменению других свойств микробов, что значительно затрудняет диагностику инфекционных заболеваний) и персистирующих форм микробов. Широкое использование антимикробных лекарственных средств ведет также к форми­рованиюантибиотикозависимости (редко) и лекарственной устойчивости — антибиотикорезистентности (достаточно часто).
Самым главным предупреждением осложнений является выбор правильных антибиотиков,которые быстро дадут необходимый эффект,не используя длительную антибиотикотерапию.
48.Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам.
Определение чувствительности бактерий к антибиотикам:
1)диффузионные методы
-с использованием дисков с антибиотиками
-с помощью Е-тестов
2)методы разведения
-разведение в жидкой питательной среде (бульоне)
-разведение в агаре
Культуры микроорганизмов, выделенные у больных, в настоящее время обязательно проверяют на чувствительность к антибиотикам, используемым для лечения. Это позволяет более рационально проводить антибиотикотерапию. Проверка чувствительности микробов к антибиотикам тем более необходима, что в последние годы появились штаммы микроорганизмов, устойчивые к различным антибиотикам.
Для определения чувствительности микробов к антибиотикам существуют различные методы, среди которых наиболее распространены методы диффузии в агар (метод дисков) и метод последовательных разведений в жидкой или плотной питательной среде.
Метод диффузии в агар, или метод дисков. Испытуемую культуру засевают сплошным газоном на поверхность чашки Петри с мясопептонным агаром. Затем на поверхность агара помещают диски, пропитанные растворами антибиотиков (рис. 26).
Диски готовят из специального картона диаметром 6 мм. Содержание антибиотика в диске указывается на этикетке и соответствует рекомендации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ). Действие антибиотиков оценивают по феномену задержки роста вокруг диска после инкубации в термостате при 37°С в течение 18—24 ч. В зависимости от диаметра зоны задержки роста различают степень чувствительности испытуемого штамма: чувствительные (более 10 мм), малочувствительные (менее 10 мм) и устойчивые (отсутствие зоны). Вместо дисков при определении чувствительности микробов можно использовать цилиндрики (фарфоровые или металлические), куда заливают растворы антибиотика разной концентрации.
Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной. В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).
Несомненным достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют диско-диффузионный метод.
Метод последовательных разведений антибиотиков. Готовят серию двукратных разведений антибиотика в жидкой или плотной питательной среде, а затем в пробирки или на поверхность чашек Петри с каждым из разведений засевают испытуемую культуру микробов.Методы разведения основаны на использовании двойных последовательных разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). При этом антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон) или в агар. Затем бактериальную суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, помещают в бульон с антибиотиком или на поверхность агара в чашке. После инкубации в течение ночи при температуре 35о-37оС проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) или на поверхности агара свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК). Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (рис. 3).Минимальная подавляющая концентрация (МПК) - наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая invitro полностью подавляет видимый рост бактерий.
49.Сульфаниламиды.Разновидности.Механизм действия.
Первые бактериальны препараты широкого спектра действия, сильные бактериостатики, относятся к антиметаболитам(включаются в метаболизм и нарушают его). Получают из сульфаниламида, путём замещения атома водорода в амидной группе. Внешне- белые или желтоватые порошки без запаха, некоторые горького вкуса. Большинство из них плохо растворимы в воде, лучше в разбавленных кислотах и водных растворах щелочей. Хорошей растворимостью обладает только сульфацил.
К ним относятся :сульфадимидин, норсульфазол, сульфадиметоксин, сульфаметоксозал...
Сейчас используются в комплексе с триметопримом. (Бисептол, сульфатон, что применяются при лечении верхних дыхательных, мочевыводящих путей, бактериальногогастроэнтероколита).
механизм действия: угнетают действие дигидроптеоратсиннтетазы, препятствуя синтезу дегидрофолиевой и тетрагидрофолиевойкислот, что нужны для синтеза пуриновых и пиримидиновых оснований. Итог - подавление синтеза микроорганизмов.
действует на - многие грамм+(Стрептококки. актиномицеты,нокардии,сибиреязвенныебацилллы), грибы, простейшие. Почти все грамм- устойчивы к их действию, кроме шигелл, кишечной палочки, иерсинии, хламидии. Для человека - безвреден, т.к. клетки не синтезируют фолиевую кислоту. по строению близки к парааминосалициловой килсоты и сульфоны(дапсон). что проявляется в лечение микобактериозов(туберкулёз, лепра). Используется для комплексной терапии токсоплазмоза, малярии.
Классификация сульфаниламидов:
1. Препараты быстро и полно всасывающиеся из желудочно-кишечного тракта (сульфаниламиды резорбтивного действия). Относят стрептоцид, норсульфазол, сульфазин, сульфадимезин и др.
2. Препараты, плохо всасывающиеся из желудочно-кишечного тракта и создающие высокую концентрацию в просвете кишечника (действующие в просвете кишечника). Относят фталазол, сульгин, фтазин.
3. Препараты, применяемые местно (профилактика и лечение инфекций глаз, раневой инфекции, ожоги и раны) - сульфацил-натрий, сульфаргин.
4. Сульфаниламиды специального назначения - салазосульфапиридин, салазопиридазин (применяются при неспецифическом язвенном колите), сульфантрол (противопироплазмидозное средство), диакарб (мочегонное).
5. Комбинированные препараты сульфаниламидов с триметопримом (триметосул, тримеразин и др.).
50.Антимикробные химиопрепараты.Нитрофураны, фторхинолоны. Механизм действия.
Нитрофураны. фуразолидон, фурацилин, фурагин, нитрофурантоин, Представляют собой синтетическиенитрофуранальдегиды, что вызывают бактерицидный эффект invitro.
Спектр Влияния - бактерии, устойчивые к антибиотикам и сульфаниламидам. Как грамм+, так и граммотрицательные бактерии(стафило/стрептококки, кишечная палочка, шигеллы, сальмонеллы,). фуразолидон применяют так же от трихомонад и лямблий. Так же применяют как а нтисептики(местно - фурацилин), для лечения инфекции ЖКТ(фуразолидон - ректально) и мочевыводящих путей(,фурагин,нитрофурантоин)
Механизм действия - нарушение процессов дыхания и других биоэнергетических. Препятствуют переносу электронов в дыхательной цепи, и воздействуют на ДНК микроорганизмов.
Фторхинолоны: норфлоксанцин, циплофлоксанцин,офлоксанцин, левоксанцин, монофлоксанцин.
плюсы: высокая доступность/широкий антимикробный спект действия/слабой токсичности.
Спектр действия - некоторые грам+(стафилококки) и многиеграмотрицательные(всё семейство Enterobacteriaceae, синегнойная палочка, легионеллы, менинго/гонококки) и на внутриклеточных паразитов - хламидии, рикетсии, микоплазмы. монофлоксанцин хорош против аэробных бактерий. Используются в терапии инфекции дыхательных путей, мочеполовой системы, кишечной инфекции, менингита. Не эффективны против грибов и простейших, т.к. в эукариотах нет ДНК-гидразы(мишени их действия).
механизм действия - ингибирование фермента ДНК - гидразы и топоизомеразы4, что участвуют в процессах формирования пространственной структуры бактериальной ДНК( в раскручивании суперспирализованных нитей ДНК) . Итог- нарушение процессов репликации, деления и клетка гибнет.
Производные нитроимидазола - Метронидазол
Спектр действия - бактерицидный эффект для аэробов( род Bacteroides, helicobacterpilory)
Механизм действия - влияет на ферродоксины, что участвуют в ОВР, воссанавливая нитрогруппы до нитрозогидроксиламиногрупп, что копятся в клетке в большой концентрации, вызывая токсикацию и нарушение ДНК. Не действует на теплокровных, ибо в них нет пируват-редоксиноксиредуктазы
Диамминопиримидины. -триметоприм(используется вместе с сульфометоксозалом, оказывая бактерицидное дей-ие.)
ингибируют синтез ДНК у бактерий и грибов, подавляя активность дигидрофталатредуктазы, нарушая синтез фолиевой кислоты.
Противотуберкулёзные.
из-за устойчивости возбудителя данной болезни для лечения используют комбинацию антибиотиков (римфампицин, стрептомицин,циклосерин, канамицин, виомицин) с синтетическими препаратами( изониазид, этамбутол, натрия аминосалицилат).
Изониазид. схож с пироксидином .
Механизм - ингибирует активность ферментов, важных для синтеза миколевых кислот, что составляю стенку микобактерий, внутриклеточное действие. Быстрое привыкание.
Этамбутол - подавление синтеза ДНК, активен только против возбудителя туберкулёза.
Натрия парааминосалицилат - бактериостатичекое действие, только для возбудителя туберкулёза, из-за конкурентных взаимоотношений с p-аминобензойной кислотой.
51.Микрофлора тела человека и ее значение.
Организм человека, начиная с первых часов жизни, постоянно соприкасается с окружающей средой и заселяется микроорганизмами. Особенно обильно заселены микроорганизмами те области кожных покровов, которые защищены от действия света и высыхания: подмышечные впадины,межпальцевые промежутки, паховые складки. В норме многие ткани и органы здорового человека свободны от микроорганизмов, т. е. стерильны. К ним относятся: матка, бронхиолы, альвеолы. На поверхности тела человека обитают стафилококки,микрококки,стрептококки,дрожжи,нитчатые грибы. Качественный и количественный состав микрофлоры человека меняется в течение жизни и зависит от пола, возраста, питания.
Микрофлора полости рта многочисленна и разнообразна,т.к. влажность,t , обилие питат. веществ, pH создают благоприятные условия для развития микроорганизмов. Главными обитателями полости рта взрослого человека являются различные виды кокков: анаэробные стрептококки, тетракокки, маловирулентные пневмококки, сапрофитные нейссерии.  Микроорганизмы полости рта играют большую роль в возникновении заболевании десен и зубов (кариеса,стоматита). Микрофлора слизистых оболочек глаза немногочисленна,потому что в слезной жидкости содержится лизоцим,подавляющий развитие микробов. Постоянными обитателями конъюктивы в норме яв-ся белые стафилококки и Corynebacterium xerosis.
Для нормальной микрофлоры верхних дыхательных путей характерно почти полное отсутствие микроорганизмов из внешней среды, так как большая часть их задерживается в полости носа, где погибает через некоторое время.
Наиболее активно бактерии заселяют ЖКТ. В желудке здорового человека микробов практически нет, что вызвано действием желудочного сока. Тем не менее отдельные виды (например, Helicobacter pylori) адаптировались к обитанию на слизистой оболочке желудка. Верхние отделы тонкой кишки также относительно свободны от бактерий , что связано с неблагоприятным действием щелочного рН и пищеварительных ферментов. Тем не менее в этих отделах можно обнаружить кандиды, стрептококки и лактобациллы.
Наибольшее количество МО заселяют толстую кишку:эубактерии, лактбациллы, клостридии перфрингенс,кишечные палочки). ЖКТ новорождённого можно считать стерильным; имеется незначительное число бактерий, проникших во время прохождения по родовым путям. Интенсивная колонизация ЖКТ начинается в течение первых суток внеутробной жизни; в составе микрофлоры в дальнейшем возможны вариации. У естественно вскармливаемых детей доминирует Lactobacillus bifidus; прочие бактерии представлены кишечными палочками, энтерококками и стафилококками.
Нормальная микрофлора играет важную роль в защите организма от патогенных микробов, например стимулируя иммунную систему, принимая участие в реакциях метаболизма. В то же время эта флора способна привести к развитию инфекционных заболеваний.
52. Дисмикробиоценоз. Препараты применяемые для лечения.
Дисбиоз (дисбактериоз) — качественное и количественное изменение состава нормальной микрофлоры макроорганизма.Дисбиозы классифицируют по этиологии(грибковый,стафилококковый)и по локализации(дисбиоз рта,кишки).Изменения нормальной микрофлоры сопровождаются различными нарушениями:развитием инфекций, диареи,запора, гастрита,язвенной болезни,аллергии,кариеса,артрита.Для восстановления нормальной микрофлоры проводят селективную деконтаминацию и назначают per os различные препараты: - пребиотики-вещества немикробного происхождения(лактулоза-синтетический дисахарид),стимулирующие рост или метаболитическую активность норм.микрофлоры чел-ка;
- эубиотики, содержащие живые бактерии,представителей норм.микрофлоры кишечника,кот. оказывают нормализирующее действие на организм человека и его микрофлору:бифидобактерии(бифибумбактерин),кишечные палочки(коли-бактерин)лактобактерии(лактобактерин);синбиотики-комбинированные препараты,состоящие из пробиотико(эубиотиков и пребиотиков).
53. Изменчивость бактерий. Понятие о генотипе и фенотипе бактерий.
Изменчивость м.б. фенотипическая(модификации) и генотипическая (мутации,трансформации,конъюгации, трансдукции).
Модификации – это изменения микроорганизмов под влиянием условий среды. Изменяются только фенотипические (внешние) признаки (форма, размеры, цвет колоний). Модификационные изменения легко исчезают при устранении условий, их вызвавших.
Мутации – изменения в генетич.аппарате организма,передающиеся по наследству. Изменчивость открывает возможности для селекции с целью отбора полезных видов МО. Так были получены вакцинные штаммы вирусы бешенства,противотуберкулезная вакцина (БЦЖ), живая вакцина против полиомиелита.
Трансформация(превращение) бактерий может произойти при передаче ДНК из одной клетки в другую без их непосредственного контакта. Так можно передать различные признаки: устойчивость к лекар.средствам, способность синтезировать ферменты.
Трансдукция- это процесс, при котором ДНК доора переносится в клетку реципиента с помощью бактериофага.
Конъюгация-процесс,при кот.передача генетич.материала из клетки в клетку происходит при непосредственном контакте МО.В результате конъюгации клетка-донор передает бактерии реципиенту плазмиду F в виде цельной структуры. Плазмида детерминирует какое-то дополнительное свойство у бактерий.
54,56. Плазмиды бактерий и их значение. Использование плазмид в генной инженерии.
Бактериальные плазмиды — небольшие кольцевые двухцепочечные молекулы ДНК, способные удваиваться независимо от хромосомы хозяина. Многие плазмиды несут гены, влияющие на фенотип клетки-хозяина, и сообщают ей новые свойства: устойчивость к лекарственным препаратам, способность к образованию токсинов (бактериоцины), к конъюгации. В последние годы описаны скрытые (криптические) плазмиды, которые не имеют фенотипических выражений.
Плазмиды используются в практической деятельности человека, в частности в генной инженерии,при конструировании специальных рекомбинантных бактериальных штаммов, вырабатывающих в больших количествах биологически активные вещества.
Типы плазмид. Большинство плазмид классифицируют на основании тех свойств бактериальной клетки, которые привели к обнаружению этих плазмид: 1) F-факторы (fertility — плодовитость); 2) R-факторы (resistance — резистентность, устойчивость); 3) Соl-факторы (соlicinogeny — колициногенность); 4) пенициллиназные плазмиды золотистого стафилококка; 5) плазмиды деградации псевдомонад и др.
Соl-фактор, или фактор колициногенности, определяет способность бактерий образовывать особые вещества, которые вызывают гибель близкородственных штаммов.
Особое значение в мед.микробиологии имеют плазмиды,обеспечивающие устойчивость бактерий к антибиотикам(R-плазмиды),обеспечивают продукцию факторов патогенности, способствующих развитию инфекц.процесса в макроорганизме.
Плазмиды широко используются в генной инженерии для переноса генетической информации и генетических манипуляций. Для этого создаются искусственные плазмиды — векторы, состоящие из частей, взятых из разных генетических источников, а также из искусственно созданных фрагментов ДНК.
55.Виды генетических рекомбинаций у бактерий.
Генетич.рекомбинация- это взаимодействие между двумя ДНК, обладающими различными генотипами, которое приводит к образованию рекомбинантной ДНК, сочетающей гены обоих родителей. Рекомбинация может происходить путем обмена клеточными ядрами, целыми молекулами ДНК или частями молекул.
Особенности рекомбинаций у бактерий определяются отсутствием истинного полового процесса и мейоза у прокариот и гаплоидным набором генов.
В процессе рекомбинации бактерии условно делятся на клетки-доноры, которые передают генетический материал, и клетки-реципиенты, которые этот материал воспринимают. В клетку-реципиент проникает не вся, а только часть хромосомы клетки-донора, т.е. один или несколько генов. Образуется только одинрекомбинант, генотип которого представлен в основном генотипом реципиента с включением фрагментов хромосомы донора.Все этапы рекомбинации у бактерий обеспечиваются соответствующими ферментами: рестриктазами, лигазами и др.
 Три вида рекомбинаций у бактерий:
Гомологичная (общая) рекомбинация-обмен между участками ДНК, обладающими высокой степенью гомологии, происходит в процессе разрыва и воссоединения ДНК через образование промежуточного соединения (крестообразной структуры Холидея или полухиазмы).Процесс находится под контролем генов,объединенных в REC-систему,состоящую из генов recA,B,C,D. Продукты этих генов производят расплетание нитей ДНК и их переориентацию с обраованием структуры Холиде, а также разрезает структуру Холидея для завершения процесса рекомбинации. Общая рекомбинация наиболее эффективна при внутривидовом генетическом обмене.
Сайтспецифическая рекомбинация –Не зависит от генов REC-системы. происходит в определенных участках генома и не требует высокой степени гомологии ДНК.   Для его протекания необходимы строго определенные последовательности ДНК и специальные ферменты(н-р: встраивание плазмиды в хромосому бактерий;интеграция ДНК фага в хромосому бактерии).
Незаконная(репликтивная) рекомбинация - происходит на любом участке ДНК, не зависит от генов REC-системы. Например, транспозиция подвижных генетических элементов по репликону или между репликонами.
57.Использование достижений генной инженерии в получении иммунобиологических препаратов.
Иммунобиологические препараты - это лекарственные препараты, действующие вещества которых имеют биологическое происхождение (или есть искусственно синтезированными аналогами природных веществ) и предназначены для проведения специфической профилактики (иммунопрофилактики), диагностики и лечения (иммунотерапии) инфекционных или аллергических заболеваний.Относятся: вакцины, анатоксины, иммуноглобулины, сыворотки, интерфероны, бактериальные препараты, аллергены, бактериофаги и другие.
Среди многих достижений генной инженерии, получивших применение в медицине, наиболее значительное – получение человеческого инсулина в промышленных масштабах.  До стадии производства доведены рекомбинантный интерферон (ряд белков со сходными свойствами, выделяемых клетками организма в ответ на вторжение вируса.) и лекарственные формы на его основе медицинского и ветеринарного назначения, интерлейкин (является частью иммунной системы), эритропоэтин. Около 200 новых диагностических препаратов уже введены в медицинскую практику, и более 100 генно-инженерных лекарственных веществ находится на стадии клинического изучения. Среди них лекарства, излечивающие артрозы, сердечно-сосудистые заболевания, некоторые опухолевые процессы и, возможно, даже СПИД. Активно ведутся исследования по разработке вакцин для профилактики и лечения гепатитов, СПИДа и ряда других заболеваний, а также конъюгированных вакцин нового поколения против наиболее социально значимых инфекций. Полимер-субъединичные вакцины нового поколения состоят из высокоочищенных протективных антигенов различной природы и носителя – иммуностимулятора полиоксидония, обеспечивающего повышенный уровень специфического иммунного ответа.
58.Понятие о биотехнологии. Использование достижений в практической микробиологии.
Биотехнология - область знаний, которая возникла на основе достижений генной инженерии., изучая биотехнологические процессы, протекающие в живой клетке, использует эти процессы для получения полезных для человека веществ в промышленных условиях.
Биотехнология — это получение продуктов из биологических объектов или с применением биологических объектов. В качестве биологических объектов могут быть использованы организмы животных и человека (например, получение иммуноглобулинов из сывороток вакцинированных лошадей или людей; получение препаратов крови доноров), отдельные органы (получение гормона инсулина из поджелудочных желез крупного рогатого скота и свиней) или культуры тканей (получение лекарственных препаратов).
С помощью биотехнологических процессов получают профилактические, лечебные и диагностические препараты, в том числе вакцины, антибиотики, лечебные сыворотки и иммуноглобулины.
Важнейшим достижением в биотехнологии стала технология рекомбинантных ДНК , более известная как генная инженерия. Она позволяет непосредственно вмешиваться в генетический аппарат и служит для получения генетически модифицированного организма (ГМО).Методы рекомбинантной ДНК открывают широкие перспективы в развитии медицины. В настоящее время получены рекомбинантные штаммы бактерий, продуцирующие инсулин, гормон роста,интерферон.С помощью этого метода получена рекомбинантная вакцина против гепатита В.
.
59.Вакцины. Классификация вакцин. Требования предъявляемые к вакцинным препаратам.
Вакцины-препараты, предназначенные для активной иммунопрофилактики,т.е.для создания активной специфической невоспроимчивости организма к конкретному возбудителю. Иногда исп-ют для лечения: дизентерия, бруцеллез.
Классификация вакцин:
Живые вакцины - приготавливают из специально полученных штаммов МО с ослабленной аттенуированной) вирулентностью и полноценным иммуногенными свойствами.Основное достоинство-полностью сохраненный набор АГ, что обеспечивает развитие длительной невосприимчивости даже после однократной иммунизации. Живые вакцины исп-ют для профилактики полиомиелита, чумы, краснухи,кори ,туберкулеза(БЦЖ).
Убитые(инактивированные)-содержат инактивированные тем или иным способом МО. Для инактивации исп-ют разные методы – нагревание, УФ-облучение,УЗ, химич.в-ва (формальдегид,фенол,спирты). Получают путем выращивания МО на искусств.питат.средах или культурах клеток. После инактивации проводят выделение антигенных комплексов, их очистку. Иммунногенность убитых вакцин ниже, чем у живых. Поэтому вызываемый ими иммунитет кратковременный. Относятся вакцины против брюшного тифа, паратифов, холеры, коклюша, гриппа, полиомиелита.
Химические(компонентные) - создаются из антигенных компонентов, извлеченных из микробной клетки. Выделяют те антигены, которые определяют иммуногенные характеристики микроорганизма. Примером служит брюшнотифозная вакцина,состоящая из О-антигенов(соматических), против гриппа(вирусные нейраминидазы и гемагглютинины),пневмококков(на основе полисахаридных капсул). Для придания более высокой иммуногенности компонентные вакцины нередко добавляют адъюванты (сорбируют на гидроксиде алюминия).
Анатоксины - обезвреженные формалином экзотоксины возбудителей токсинемических инфекций. Формирует напряженный иммунитет на 4-5 лет.
Молекулярные вакцины в них антиген находится в молекулярной форме или даже в виде фрагментов его молекул, определяющих специфичность т. е. в виде эпитопов, детерминант.
Рекомбинатные (генно-инженерные) - вакцины, полученные с помощью генной инженерии. В генетический аппарат неболезнетворного вируса встраивают участок ДНК болезнетворного вируса. Такие вакцины дают напряженный иммунитет (вакцина против вирусного гепатита В).
Корпускулярные вакцины - представляют собой бактерии или вирусы, инактивированные химическим (формалин, спирт, фенол) или физическим (тепло, ультрафиолетовое облучение) воздействием(противочумная, антирабическая).
Вакцины, содержащие антигены бактерий и анатоксины, называются ассоциированными. Примерами ассоциированных вакцин являются: вакцина АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столб-нячная вакцина), в которой коклюшный компонент представлен убитой коклюшной вакциной, а дифтерийный и столбнячный — соответствующими анатоксинами;
Существуют общие требования ко всем вакцинам. Любой рекомендуемый для вакцина¬ции препарат должен быть: иммуногенным, безопасным, нереактогенным, не вызывать аллергических реакций, не обладать тератогенностью, онкогенностью; штаммы, из которых готовят вакцину, должны быть генетически стабильными, вакцина должна обладать длительным сроком хранения, производство ее должно быть технологичным, а способ применения — по возможности, простым и доступным для массового применения.
60. Анатоксины, их получение и практическое применение.
Анатоксины - обезвреженные формалином экзотоксины возбудителей токсинемических инфекций (дифтерийный анатоксин, столбнячный, ботулинический, гангренозный, стафилококковый). Формирует напряженный иммунитет на 4-5 лет. Получают из вышеперечисленных возбудителей инфекций, выращивают на жидких питат.средах для накопления токсина, затем фильтруют через бактериальные фильтры для удаления микробных клеток . К фильтрату добавляют 0,3-0,4% формалина и выдерживают его при 370C 3-4недели до полного исчезновения токсических свойство, очищают. Исп-ют для активной иммунопрофилактики токсинемических инфекций ( столбняка, дифтерии, ботулизма).
61. Диагностикумы (бактериальные, эритроцитарные, вирусные), получение и использование.
Диагностикумы. Получение, применение.
В диагностических целях при обнаружении антител в сыворотке крови больных, реконвалесцентов и бактерионосителей используются серологические реакции.
Для постановки таких реакций применяются диагностикумы - препараты, содержащие взвесь обезвреженных микроорганизмов или определенные антигены.
Необходимость использования диагностикумов для серологических реакций связана не только с явным их преимуществом перед живыми культурами микробов (безопасность в работе), но еще и потому, что для приготовления диагностикумов подбираются штаммы микроорганизмов с высокой чувствительностью к антителам и способностью длительно сохранять антигенные свойства.
Для инактивации микроорганизмов при приготовлении диагностикумов чаще всего используются химические вещества, особенно формалин, являющийся лучшим консервантом. Убитые нагреванием микробы хуже сохраняют антигенные свойства и применяются редко.
В серологических реакциях (реакции агглютинации, реакции пассивной гемагглютинации, реакции связывания комплемента, реакции торможения гемагглютинации) для выявления специфических антител применяются: бактериальные, эритроцитарные и вирусные диагностикумы.
Бактериальные диагностикумы могут содержать инактивированную микробную взвесь или отдельные антигенные компоненты бактерий: О, Н или Vi-антигены и используются в реакциях агглютинации.
Эритроцитарные диагностикумы представляют собой эритроциты (обработанные танином или формалином) с адсорбированными на них антигенами, извлеченными из бактерий, и применяются в РПГА (реакции пассивной гемагглютинации). В том случае, когда РПГА используется для выявления антигена в выделениях больных, в тканях и др., применяют «антительные диагностикумы», т. е. эритроциты, сенсибилизированные антителами.
Вирусные диагностикумы — препараты, содержащие инактированные вируссодержащие жидкости (культуральные, из куриных эмбрионов или организма животных, зараженных соответствующим вирусом), применяются в РСК (реакции связывания комплемента), реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и реакции нейтрализации.
В настоящее время в лабораториях используются следующие диагностикумы.
1. Бактериальный диагностикум сальмонелл тифа. Применяется в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных.
2. Сальмонеллезные О-диагностикумы содержат О-антигены различных групп сальмонелл (инактивированных 15%-ным раствором глицерина). Применяются для выявления О-антител при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглютинации с сывороткой больных.
3. Сальмонеллезные Н-монодиагностикумы. Используются в реакции агглютинации для определения заболевания в прошлом (анамнестическая реакция агглютинации) и реже с диагностической целью.
4. Vi — брюшнотифозный диагностикум. Применяется в реакции агглютинации при выявлении брюшнотифозного бактерионосительства.
5. Единый бруцеллезный диагностикум — взвесь бруцелл (инактивированных фенолом), подкрашенная метиленовым синим. Применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Райта и Хеддльсона.
6. Эритроцитарный сальмонеллезный О-диагностикум — взвесь эритроцитов с адсорбированными на них О-антигенами различных групп сальмонелл. Используется для постановки РПГА с сывороткой больного при уточнении клинического диагноза сальмонеллезной инфекции.
7. Эритроцитарный Vi-диагностикум — эритроциты, сенсибилизированные очищенным Vi-антигеном S. typhi, применяется в РПГА при выявлении брюшнотифозного бактерионосительства.
8. Гриппозный диагностикум представляет собой аллантоисную жидкость инфицированных вирусом гриппа (типов А, В) куриных эмбрионов и инактивированную мертиолатом или формалином. Диагностикумы необходимы при постановке РТГА с парными сыворотками больных для уточнения клинического диагноза и циркулирующего типа вируса гриппа.
9. Диагностикум вируса клещевого энцефалита получают из суспензии мозга белых мышей, зараженных вирусом клещевого энцефалита. Суспензию подвергают центрифугированию (для осветления) и инактивируют химическими веществами.
Диагностикум используется в РТГА и РСК с сывороткой больных при диагностике заболевания.
62. Диагностические сыворотки, получение и использование.
Диагностические иммунные сыворотки широко применяются для определения вида или типа микроба, выделенного от больного или носителя и для определения природы неизвестного белка при условии, если его можно получить в коллоидном состоянии. В зависимости от характера антигена, послужившего для иммунизации животного, сыворотка последнего приобретает различные свойства.Специфические свойства иммунных сывороток могут быть обнаружены путем изучения действия их на соответствующие антигены. В зависимости от условий опыта у таких сывороток можно наблюдать агглютинирующее (склеивающее), преципитирующее (осаждающее) и литическое (растворяющее) действие. Применительно к наблюдаемым феноменам принято говорить о соответствующих иммунных телах, содержащихся в сыворотках: агглютининах, преципитинах, лизинах и пр.Агглютинирующие сывороткиПри идентификации микробов, наряду с определением морфологических, культуральных и биохимических свойств их, широко используются диагностические агглютинирующие сыворотки. Агглютинацией называется склеивание микробов, скучивание их под влиянием специфических антител - агглютининов, содержащихся в иммунной сыворотке.Реакция агглютинации в настоящее время является наиболее часто применяемой, нередко единственной в смысле определения и выделения различных видов из группы морфологически неотличимых бактерий. Групповая агглютинация затрудняет определение вида выделенного микроба и серологическую диагностику заболевания.Устранить групповую агглютинацию можно, удалив из сыворотки антитела в отношении антигенов, являющихся общими для гомологичного микроба и для родственных с ним. Это достигается путем смешения небольшого количества сыворотки с густой взвесью микробов, дающих групповую агглютинацию, что ведет к адсорбции на их поверхности соответствующих антител. В жидкости, полученной после центрифугирования, остаются антитела лишь в отношении гомологичного микроба. Антитела, обусловливающие агглютинацию бактерий и иных клеток, получили название агглютининов, а сыворотки, содержащие эти антитела, агглютинирующих. Сыворотки получаются путем иммунизации животных соответствующими микробами. В качестве продуцентов агглютинирующих сывороток могут быть использованы кролики, бараны, козы, ослы и лошади. Наиболее свободными от неспецифических антител являются сыворотки кроликов.Для иммунизации животных можно применять живые и убитые культуры, являющиеся типичными по своим морфологическим, культуральным, биохимическим, серологическим и антигенным свойствам. Лучшие результаты получаются при применении формалинизированных и обработанных парами формалина микробных взвесей. Иммунизацию проводят путем введения антигена в краевую ушную вену, начиная с 500 млн. микробных тел в 1 мл и увеличивая дозу вдвое при последующих введениях. Для получения полноценных сывороток обычно бывает достаточно 3-4 инъекций с интервалами в 5 дней. На 5-7 день после третьей иммунизации берется проба крови и проверяется титр сыворотки. Титром сыворотки считается то наибольшее ее разведение, с которым получается реакция агглютинации соответствующей культуры, оцениваемая тремя крестами при помощи агглютиноскопа. Если титр сыворотки оказывается достаточным, то в тот же день у кролика производится кровопускание. Кровь можно получить тремя способами: 1) из ушной вены; 2) из сердца;3) из сонной артерии (тотальное кровопускание).Кровь по каплям собирается в большую стерильную пробирку. Полученная кровь ставится на 10-15 минут в термостат, образовавшийся сгусток отделяется от стенок пробирки, после чего кровь выдерживается в течение 24-48 часов в рефрижераторе при температуре 4-8 °С. В настоящее время от крупных животных (лошади, ослы и др.) кровь берут в бутыли с цитратным раствором. Плазму дефибринируют раствором хлористого кальция.К полученной сыворотке добавляется консервант. Сыворотка (в нативном виде) выдерживается не менее 1 месяца при температуре 4-8 °С для стабилизации титра, после чего определяется окончательный титр ее к гомологичным штаммам и наличие групповой реакции путем постановки реакции агглютинации с набором соответствующих живых культур в количестве 3-5 штаммов каждого вида. Титр групповых агглютининов не должен превышать 1/8 титра к гомологичным культурам.Институтами вакцин и сывороток выпускаются неадсорбированные и адсорбированные агглютинирующие сыворотки. Специфические адсорбированные агглютинирующие сыворотки получают путем удаления методом адсорбции неспецифических и групповых антител из нативных сывороток. Использование адсорбированных сывороток дает возможность определения выделенного микроба в пределах вида или типа при помощи реакции агглютинации на стекле без дополнительной постановки развернутой агглютинации.Для адсорбции агглютинирующих сывороток в качестве адсорбента могут применяться живые и убитые бактерии. Наилучшей адсорбционной способностью обладает живая культура, содержащая все антигенные компоненты в неизмененном виде. Полученные микробные взвеси перед употреблением центрифугируются в необходимом количестве и добавляются к адсорбируемой сыворотке. Адсорбцию сывороток следует начинать адсорбентами, имеющими близкое родство с культурой, примененной для получения данной сыворотки.Сыворотка с адсорбентом помещается в термостат при 37 °С на срок от 2 до 18 часов и затем в рефрижератор до следующего дня. Истощаемая сыворотка после каждой адсорбции проверяется в реакции агглютинации на стекле как с культурами того вида, которыми ведется истощение, так и с культурами, реагировавшими с ней при первоначальном контроле, а также с гомологичными культурами.Полностью адсорбированные сыворотки освобождаются от микробных тел путем центрифугирования или сепарирования. Если к нативной сыворотке не добавлялся консервант, то к полученной серии сыворотки следует добавить 1-2 % перекристаллизованной борной кислоты. Затем сыворотка фильтруется через стерилизующий бактериальный фильтр и после выдерживания в течение 2-х суток при комнатной температуре испытывается на стерильность, специфичность и высоту титра.Контроль на специфичность адсорбированных агглютинирующих сывороток проводится до и после фильтрования - реакцией агглютинации на стекле и развернутой реакцией агглютинации с гомологичными и гетерологичными культурами. Ясно выраженная положительная реакция агглютинации, получаемая с 3-5 гомологичными культурами в течение 1 минуты при комнатной температуре, при отсутствии реакции агглютинации с культурами других серологических типов в течение 20 минут служит критерием для выпуска адсорбированных сывороток. Диагностические агглютинирующие сыворотки разливаются по 1 мл в соответствующие ампулы, которые упаковываются по нескольку штук (не более 10) в коробку.Агглютинирующие сыворотки необходимо хранить в темном сухом месте при 4-10 °С. При правильном содержании сыворотка сохраняет свою активность в течение одного года со дня изготовления.Агглютинирующие адсорбированные сыворотки выпускаются и в сухом виде. Сыворотки перед высушиванием в стерильных условиях разводят сахарозо-желатиновой средой, разливают по 1 мл в стерильные ампулы и высушивают из замороженного состояния в условиях глубокого вакуума.Преципитирующие сывороткиПреципитирующие сыворотки применяются для постановки реакций преципитации с целями диагностики некоторых инфекционных заболеваний, для определения природы неизвестного белка при условии, если его можно получить в коллоидном состоянии, в судебно-медицинской практике для распознавания видовой принадлежности крови, в санитарии, химии и т.д.Реакция преципитации характеризуется чрезвычайно высокой чувствительностью и специфичностью. Она позволяет обнаружить ничтожные следы антигена (до разведения 1:100000 и выше). Действие преципитирующих сывороток на антиген сходно с действием агглютинирующих.Преципитирующие сыворотки получаются путем искусственной иммунизации животного живыми или убитыми микробами, а также разнообразными лизатами и экстрактами микробных клеток. Наилучшие преципитирующие сыворотки получаются при иммунизации полным антигеном или соляно-кислой вакциной. Применяемую для иммунизации животных экстрагированную соляно-кислую вакцину готовят следующим образом: густой смыв суточной культуры дважды промывают (при центрифугировании) физиологическим раствором и обрабатывают десятикратным количеством 0,2 N соляной кислоты в течение 18-24 часов при температуре 37 °С. Затем центрифугируют, полученный осадок микробных тел дважды промывают физиологическим раствором и нейтрализуют 25 % раствором углекислой соды. Полученную вакцину оставляют в виде осадка.Преципитирующие сыворотки готовятся подобно агглютинирующим, только выпускаются они с высокими титрами, не ниже 1:100000, что достигается более длительной иммунизацией животных. Небольшие дозы (0,5 мл) антигена вводятся в течение 2-3 недель по 3 дня подряд с перерывом в 4 дня. Более массивные дозы (1-2-3 мл) вводятся с интервалами в 4-6 дней по 8-12-16 раз. Значительной эффективностью обладает разделение иммунизации на несколько циклов, из которых один производится внутривенно (6-8 инъекций по 1-2 мл), а другой - крупными дозами внутрибрюшинно (6-8 инъекций по 3-5 мл). Кровопускание производится на 8-12-й день после последнего введения антигена. Полученная сыворотка консервируется добавлением 1-2 % сухой борной кислоты или 0,5 % хлороформа. Готовый препарат контролируют на специфичность, стерильность и высоту титра. При титровании преципитирующей сыворотки определяется то предельное разведение антигена, которое может быть обнаружено при помощи цельной или разведенной иммунной сыворотки.62.Живые вакцины, получение и применение, достоинства и недостатки.
Живые аттенуированные вакцины конструируются на основе ослабленных штаммов микроорганизмов, потерявших вирулентность, но сохранивших антигенные свойства. Такие штаммы получают методами селекции или генетической инженерии. Живые вакцины при введении в организм приживляются, размножаются, вызывают генерализованный вакцинальный процесс и формирование специфического иммунитета к патогенному микроорганизму, из которого получен аттенуированный штамм. Получают живые вакцины путем выращивания аттенуированных штаммов на питательных средах, оптимальных для данного микроорганизма. Бактериальные штаммы культивируют или в ферментерах на жидких питательных средах, или на твердых питательных средах; вирусные штаммы культивируют в куриных эмбрионах, первично-трипсинизированных, перевиваемых культурах клеток. Процесс ведут в асептических условиях. Биомассу аттенуированного штамма подвергают концентрированию, высушиванию со стабилизирующей средой, затем ее стандартизируют по числу микроорганизмов и фасуют в ампулы или флаконы. Консервант к живой вакцине не добавляют. Срок годности вакцины ограничен 1.2 годами, вакцина должна храниться и транспортироваться при пониженной температуре (от 4 до 8 .С). Живые вакцины применяют, как правило, однократно; вводят их подкожно, накожно или внутримышечно, а некоторые вакцины . перорально (полиомиелит) и ингаляционно. Живые вакцины составляют примерно половину всех применяемых в практике вакцин. Наиболее важные для иммунопрофилактики живые вакцины приведены ниже. Бактериальные живые вакцины: туберкулезная (из штамма БЦЖ); чумная (из штамма EV); туляремий-ная, сибиреязвенная (из штамма СТИ-1); бруцеллезная (из штамма 19-ВА); против Ку-лихорадки. Вирусные живые вакцины: оспенная (на основе вируса оспы коров); коревая (из штамма Л-16 и штамма Эдмонстон); полиомиелитная (из штаммов А. Сэбина типов 1, 2, 3); против желтой лихорадки (из штамма 17D); гриппозная (из лабораторных штаммов); против венесуэльского энцефаломиелита лошадей (из штамма 230); паротитная
Положительные стороны: по механизму действия  на  организм  напоминают
"дикий"  штамм,  может  приживляться  в  организме  и  длительно   сохранять
иммунитет (для коревой  вакцины  вакцинация в 12 мес.  и  ревакцинация  в  6
лет), вытесняя "дикий" штамм. Используются  небольшие  дозы  для  вакцинации
(обычно однократная) и поэтому вакцинацию  легко  проводить  организационно.
Последнее  позволяет  рекомендовать  данный  тип   вакцин   для  дальнейшего
использования.
   Отрицательные стороны: живая  вакцина  корпускулярная -  содержит  99%
балласта и поэтому обычно достаточно реактогенная, кроме того, она  способна
вызывать мутации клеток  организма  (хромосомные  аберрации),  что  особенно
опасно  в  отношении  половых  клеток.  Живые   вакцины   содержат   вирусы-
загрязнители (контаминанты), особенно это  опасно  в  отношении  обезьяннего
СПИДа и онковирусов.  К  сожалению,  живые   вакцины   трудно  дозируются  и
поддаются биоконтролю, легко чувствительны к действию высоких  температур  и
требуют неукоснительного соблюдения холодовой цепи.
  Хотя  живые   вакцины  требуют  специальных  условий  хранения,  они
продуцируют достаточно  эффективный  клеточный  и  гуморальный  иммунитет  и
обычно требуют лишь  одно  бустерное  введение.  Большинство  живых   вакцин
вводится парентерально (за исключением полиомиелитной  вакцины).
 
      На фоне преимуществ живых  вакцин  имеется и одно  предостережение,  а
именно: возможность реверсии вирулентных  форм,  что  может  стать  причиной
заболевания вакцинируемого. По  этой  причине  живые   вакцины  должны  быть
тщательно   протестированы.   Пациенты   с   иммунодефицитами    (получающие
иммуносупрессивную терапию, при СПИДе и опухолях) не должны  получать  такие  вакцины.
64.Инактивированные, корпускулярные вакцины. Приготовление и применение. Достоинства и недостатки.
Для профилактики вирусных заболеваний широко применяют инактивированные вакцины, которые имеют ряд преимуществ перед живыми вакцинами. Важным условием эффективности вакцин является количество и качество вирусного антигена, выбор инактиватора и оптимальных условий инактивации, позволяющих полностью лишить вирус инфекционности при максимальном сохранении антигенности. Понятие «инактивированный» относится к жизнеспособности вирусов, входящих в состав вакцины. Инактивированные вирусные вакцины обычно готовят из вирулентных вирусов, разрушая вирулентность химическими(ацетон) или физическими(нагревание) методами при сохранении иммуногенности. Такие вакцины должны быть безопасны и содержать большое количество вирусного антигена, чтобы вызвать иммунный ответ и образование антител. Среди первых инактивированных вирусных вакцин были вакцины против бешенства, желтой лихорадки, ящура, классической чумы свиней, чумы плотоядных, ньюкаслской болезни и оспы животных. Поскольку не все из созданных вакцин оказались эффективными, а некоторые из них таили угрозу инфицирования из-за недостаточной полноты инактивации вируса, многие исследователи стали отдавать предпочтение живым вакцинам, приготовленным на основе аттенуированных штаммов. Лучшим примером живых вакцин служит вакцина против оспы людей.
Убитые корпускулярные вакцины представляют собой препараты, приготовленные из штаммов бактерий и вирусов, убитых (инактивированных) либо мягким нагреванием («гретые» вакцины), либо химическими веществами (формалин, спирт, ацетон и др.). Они менее иммуногенны по сравнению с живыми, что определяет необходимость их многократного введения, как правило, парентерального. К числу наиболее известных убитых корпускулярных вакцин следует отнести брюшнотифозную (гретую, спиртовую), коклюшную, лептоспирозную и вакцину против клещевого энцефалита. Убитые вакцины более устойчивы при хранении, чем живые, однако их замораживание с последующим оттаиванием может привести к изменению их физических и биологических свойств.
Положительные  стороны:  Корпускулярные
убитые  вакцины  легче дозировать, лучше очищать, они длительно  хранятся  и
менее  чувствительны  к  температурным  колебаниям.  Отрицательные  стороны:
 вакцина  корпускулярная - содержит 99 % балласта  и  поэтому  реактогенная,
кроме того, содержит агент, используемый для  умерщвления  микробных  клеток
(фенол). Еще одним недостатком инактивированной  вакцины  является  то,  что
микробный  штамм  не  приживляется,  поэтому  вакцина  слабая  и  вакцинация
проводится в 2  или  3  приема,  требует  частых  ревакцинаций  (АКДС),  что
труднее   в   плане   организации   по   сравнению   с   живыми   вакцинами.
Инактивированные вакцины выпускают как в сухом , так и  в
жидком виде.
65. Химические (субклеточные вакцины) вакцины. Получение и применение. Роль адъювантов.
Химические вакцины -препараты, содержащие наиболее активные по иммунологическим свойствам антигены, извлекаемые из микробных клеток различными методами (например, ферментативным перевариванием с последующим осаждением антигена этиловым спиртом). Следует помнить, что термин «химическая вакцина» не вполне точен, так как подобные вакцины не являются химическими веществами в чистом виде, а представляют собой группы антигенов, эндотоксины и т. д. Химические вакцины изготовляются путем сложной химической и ферментативной обработки бактериальных культур с целью извлечения из них растворимых антигенов в чистом виде; бактериальные клетки и их фрагменты при этом отсеиваются как балластные вещества, не обладающие иммуногенными свойствами и повышающие реактогенность. Преимущества химических вакцин: 1) из микробных клеток выделяются иммунологически активные субстанции — изолированные антигены (комплекс — липополисахариды с полипептидами или протективные антигены); 2) они менее реактогенны; 3) стабильны и лучше подвергаются стандартизации, что дает возможность более точной дозировки; 4) вводятся в больших дозах и в виде ассоциированных препаратов.
Одним из недостатков химической вакцины являются небольшие размеры вводимых комплексов, что приводит к быстрому выведению их из организма и краткому антигенному раздражению. Поэтому химические вакцины вводятся на адъювантах (от adjuvans — помогающий), в качестве которых используются различные минеральные адсорбенты (гидрат окиси алюминия, фосфат кальция, минеральные масла). Адъюванты способствуют повышению эффективности вакцинации, так как они укрупняют антигенные частицы, создают в месте введения «депо», из которого происходит замедленная резорбция антигена, что приводит к перманентному антигенному раздражению. Кроме того, депонирующие вещества являются неспецифическими стимуляторами, вызывают приток плазматических клеток, непосредственно участвующих в выработке антител, что связано с развитием местного воспалительного процесса и стимуляцией пролиферативной и фагоцитарной активности ретикулоэндотелиальной системы.
66.Ассоциированные и комбинированные вакцины. Достоинства.
Ассоциированные вакцины – препараты, включающие несколько разнородных антигенов и позволяющие проводить иммунизацию против нескольких инфекций одновременно. Если в препарат входят однородные антигены, то такую ассоциированную вакцину называют поливакциной. Если же ассоциированный препарат состоит из разнородных антигенов, то его целесообразно называть комбинированной вакциной. Они представляют собой препараты, состоящие из микробного антигенного компонента (обычно выделенного и очищенного или искусственно синтезированного антигена возбудителя) и синтетических полиионов (полиакриловая кислота и другие) - мощных стимуляторов иммунного ответа. Содержанием этих веществ они и отличаются от химических убитых вакцин.
Возможна так же комбинированная иммунизация, когда одновременно вводят несколько вакцин в различные участки тела, например, против оспы (накожно) и чумы (подкожно).
Примером поливакцины можно считать живую полиомиелитную поливакцину, содержащую аттенуированные штаммы вируса полиомиелита I, II, III типов. Примером комбинированной вакцины является АКДС, куда входят инактивированная корпускулярная  коклюшная вакцина, дифтерийный и столбнячный анатоксин.
Комбинированные вакцины применяются в сложной противоэпидемической обстановке. В основе их действия лежит способность иммунной системы отвечать на несколько антигенов одновременно.
67. Антимикробные сыворотки. Получение и применение.
Антимикробные сыворотки содержат антитела против клеточных антигенов возбудителя. Их получают иммунизацией животных клетками соответствующих возбудителей, и дозируют в миллилитрах.
Антимикробные сыворотки могут применяться при лечении: сибирской язвы, чумы, стрептококковых инфекции,  стафилококковой инфекции,  синегнойной инфекций. 
Их назначение определяется тяжестью течения заболевания и в отличие от антитоксических не является обязательным.
При лечении больных с хроническими, длительно, вяло текущими формами инфекционных заболеваний, возникает необходимость стимулировать собственные механизмы специфической зашиты путем введения различных антигенных препаратов и создания активного приобретенного искусственного иммунитета (иммунотерапия антигенными препаратами). Для этих целей используются в основном лечебные вакцины, и значительно реже - аутовакцины или стафилококковый анатоксин.
68.Антитоксические сыворотки. Получение, очистка, титрование и применение.
Антитоксические сыворотки содержат антитела против экзотоксинов. Антитоксические сыворотки получают путем гипериммунизации (т. е. многократной интенсивной иммунизации) животных (чаще всего лошади, ослы, иногда кролики) специфическим антигеном (анатоксином) с последующим, в период максимального антитело-образования, кровопусканием и выделением из крови иммунной сыворотки. Иммунные сыворотки, полученные от животных, называют гетерогенными, так как они содержат чужеродные для человека сывороточные белки.
Для получения гомологичных нечужеродных сывороток используют сыворотки переболевших людей (коревая, паротитная, оспенная сыворотки) или специально иммунизированных людей-доноров (противостолбнячная, противоботулиническая и другие сыворотки) либо СЫВОРОТКИ из плацентарной, а также абортной крови, содержащие антитела к ряду возбудителей инфекционных болезней вследствие вакцинации или перенесенного заболевания. Естественно, что гомологичные сыворотки предпочтительнее гетерологичных. Поскольку нативные иммунные сыворотки содержат в своем составе ненужные балластные белки, например альбумин, из этих сывороток выделяют и подвергают очистке и концентрированию специфические белки — иммуноглобулины.
Для очистки и концентрирования иммуноглобулинов используют различные физико-химические методы: осаждение спиртом или ацетоном на холоде, обработка ферментами, аффинная хроматография, ультрафильтрация.
Титрование антитоксических сывороток может производиться тремя методами: по Району, Эрлиху и Ремеру:
Метод Района. Осуществляется с помощью реакции флоккуляции по известному анатоксину или токсину, одну Lf которых нейтратизует одна единица антитоксина. Первичная, или инициальная, реакция флоккуляции наступает при соответствии количества антигенных единиц анатоксина количеству антитоксинов в исследуемой сыворотке. Исходя Из результатов первичной реакций флоккуляции и ведут расчет антитоксических единиц в 1 мл испытуемой сыворотки. Однако метод Района является только ориентировочным.
 
Метод Эрлиха. Перед титрованием сывороток определяют условную смертельную (опытную) дозу токсина. За опытную дозу токсина (Lt) принимается то его количество, которое в смеси с 1ME стандартной сыворотки вызывает гибель 50% взятых в опыт животных. На втором этапе титрования к различным разведениям испытуемой сыворотки добавляют опытную дозу токсина, смесь выдерживают 45 мин и вводят животным. По получаемым результатам производят раечет титра испытуемой антитоксической сыворотки.
Метод Ремера. Титрование также осуществляется в два этапа, но данный метод является более экономичным, так как опыт проводится на одном животном. Предварительно определяется опытная некротическая доза токсина — Ln (Limes necrosis) введением внутрикожно морской свинке различного количества токсина со стандартной сывороткой. За некротическую дозу токсина принимается то его наименьшее количество, которое при внутрикожном введении морской свинке в смеси с 1/50 MEстандартной антитоксической сыворотки вызывает на месте введения некроз на 4—5-й день. Затем различные объемы испытуемой сыворотки в смеси с оттитро ванной некротической дозой токсина вводят внутрикожно морской свинке и по результатам производят расчет титра сыворотки. По методу Ремера титруется противодифтерийная сыворотка.
Активность антитоксических сывороток выражают в антитоксических единицах, в титрах вируснейтрализующей, гемагглютинирующей, преципитирующей, агглютинирующей и т. д. активности, т. е. тем наименьшим количеством антител, которое вызывает видимую или регистрируемую соответствующим способом реакцию с определенным количеством специфического антигена.
Антитоксические сыворотки применяют с лечебной и профилактической целью. Особенно эффективно применение сывороточных препаратов для лечения токсинемических инфекций (столбняк, ботулизм, дифтерия, газовая гангрена), а также для лечения бактериальных и вирусных инфекций (корь, краснуха, чума, сибирская язва и др.) в комплексе с другими способами лечения.
69.Иммуноглобулины. Получение и применение.
Иммуноглобулины- это растворимые гликопротеины, присутствующие в сыворотке крови, тканевой жидкости или на клеточной мембране, которые распознают и связывают антигены. Иммуноглобулины синтезируются В-лимфоцитами (плазматическими клетками) в ответ на чужеродные вещества определенной структуры — антигены.
Ig получают осаждением сыворотки крови, что освобождает их от балластных компонентов. Затем препараты очищают и концентрируют. Иммуноглобулин применяют для лечения и профилактики кори, клещевого энцефалита, стафилококковых инфекции, столбняка и др.
Выделяют пять классов антител (иммуноглобулинов) — IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, различающихся между собой по строению и аминокислотному составу тяжёлых цепей и по выполняемым эффекторным функциям. Иммуноглобулин G.Количество иммуноглобулинов G составляет около 70% всех сывороточных иммуноглобулинов. Функции иммуноглобулинов G:•    проникают через плацентарный барьер, обеспечивая организму новорожденного естественный пассивный иммунитет;•    активно участвуют в развитии иммунного ответа и одновременно регулируют его;•    являются поздними антителами против полисахаридных антигенов бактерий;•    участвуют в активации комплемента;•    усиливают фагоцитоз.
Иммуноглобулины G вырабатываются при обязательном участии Т-лимфоцитов. Поэтому воздействия на иммунную систему, такие, как облучение и прием иммунодепрессантов подавляют синтез иммуноглобулинов G.
Иммуноглобулин М.Составляют 5 -10% от общего количества. Функции иммуноглобулинов М:•    первыми синтезируются в организме новорожденного;•    являются ранними антителами против вирусов и грамотрицательных бактерий;•    участвуют в активации комплемента;•    усиливают фагоцитоз.
К классу иммуноглобулинов М принадлежат холодовые агглютинины, антитела против стрептококка,ревматоидный фактор, агглютинины групп крови. Иммуноглобулины М привлекают фагоциты в очаг инфекции и активируют фагоцитоз. Являются слабоспецифичными, могут связывать одновременно пять молекул антигена. Это приводит к образованию больших иммунных комплексов, что способствует более быстрому выведению антигенов из циркуляции, и предотвращает прикрепление антигенов к клеткам. Агглютинирующая и комплементсвязывающая способности иммуноглобулинов М в сотни раз выше, чем у иммуноглобулинов G.
Иммуноглобулин А.Составляют 10 -15% от общего количества. Функции иммуноглобулинов А:•    защищают слизистые оболочки;•    нейтрализуют вирусы и бактериальные токсины.
Иммуноглобулины А в больших количествах содержатся в слюне, слезах, желудочном и кишечном секретах, желчи, во влагалище, легких, бронхах, мочеполовых путях. Богатым источником иммуноглобулина А является грудное молоко. Этим обеспечивается защита детей первых месяцев жизни при естественном вскармливании.
Иммуноглобулин Е.Составляют около 0,2% от общего количества иммуноглобулинов. Функции иммуноглобулинов Е:•    индуцируют аллергическую реакцию и анафилаксию;•    защищают от паразитов;•    активируют тканевые базофилы.
Иммуноглобулины Е защищают слизистые оболочки, контактирующие с окружающей средой.Они прикрепляются к специфическим рецепторам поверхности тучных клеток и базофилов, и если происходит связывание с антигеном, то образуется комплекс, стимулирующий освобождение из клеток медиаторов аллергических реакций.
Иммуноглобулин D.Составляют около 0,2% от общего количества иммуноглобулинов.
Функции иммуноглобулинов D:•    функционируют почти исключительно в качестве мембранных рецепторов для антигенов;•    участвуют в дифференцировке лимфоцитов. 
70. Методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.
Лабораторная диагностика инфекционных заболеваний проводится в трех основных направлениях:
1) поиски возбудителя заболевания в материале, взятом у больного (испражнения, моча, мокрота, кровь, гнойное отделяемое и др.);
2) обнаружение специфических антител в сыворотке крови — серологическая диагностика;
3) выявление повышенной чувствительности организма человека к возбудителям инфекционных заболеваний — аллергический метод.
Для выявления возбудителя инфекционного заболевания и его идентификации (определения вида возбудителя) используют три метода: микроскопический, микробиологический (бактериологический) и биологический.
Микроскопический метод позволяет обнаружить возбудителя непосредственно в материале, взятом у больного. Этот метод имеет решающее значение при диагностике гонореи, туберкулеза, заболеваний, вызываемых простейшими: малярии, лейшманиозов, балантидиаза, амебиаза. Возможности микроскопического метода при этих инфекциях обусловлены значительными морфологическими различиями возбудителей данных заболеваний. Особенности морфологии возбудителей играют основную роль в постановке диагноза. Однако микроскопический метод не позволяет поставить диагноз при таких инфекциях, как, например, брюшной тиф и паратифы, дизентерия, потому что различить их возбудителей по морфологическим признакам невозможно (все они грамотрицательные палочки). Для того чтобы различить сходные между собой по морфологии микроорганизмы, их надо получить в чистой культуре и идентифицировать, что можно сделать с помощью микробиологического (бактериологического) метода исследования.
Микробиологический метод заключается в посеве исследуемого материала на питательные среды, выделении чистой культуры возбудителя и его идентификации. Определение вида и типа возбудителя производят по ряду признаков: морфологии, способности окрашиваться различными красителями (тинкториальные свойства), характеру роста на искусственных питательных средах (культуральные свойства), ферментации углеводов и белков (биохимические свойства). Окончательную принадлежность выделенной культуры к определенному виду (типу) микроорганизмов устанавливают после изучения антигенной структуры, используя различные иммунологические реакции (агглютинации, преципитации, нейтрализации и др.).
Если возбудители инфекционных заболеваний (риккетсии, вирусы, некоторые простейшие) не растут на искусственных питательных средах или необходимо выделить возбудителя из микробных ассоциаций, то используют метод заражения восприимчивых животных биологический.
Биологический метод осуществляют путем выделения возбудителя заболевания или его токсина при заражении лабораторных животных, восприимчивых к данному заболеванию. Диагноз устанавливают по воспроизведению у животного типичной картины заболевания и по выделению чистой культуры возбудителя из различных органов путем посева на питательные среды в случае заражения животного микробными ассоциациями. Идентификацию выделенного возбудителя проводят до вида (типа), используя бактериологический метод. Биологический метод используют также при определении вирулентности возбудителей.
Серологические методы диагностики инфекционных заболеваний основаны на выявлении специфических иммунных антител в сыворотке крови больного. Для этого используют различные иммунологические реакции: реакцию агглютинации при брюшном тифе (Видаля), реакцию Райта при бруцеллезе, реакцию связывания комплемента (Вассермана) при сифилисе, реакцию непрямой гемагглютинации при многих инфекционных заболеваниях, реакцию нейтрализации и торможения гемагглютинации при вирусных заболеваниях.
Аллергический метод позволяет поставить диагноз инфекционного заболевания с помощью аллергических проб — накожных и внутрикожных. Метод выявляет повышенную чувствительность замедленного типа, возникающую в организме при многих инфекционных заболеваниях. Введение аллергена накожно или внутрикожно используют для диагностики бруцеллеза, туляремии, токсоплазмоза и других заболеваний.
Для того чтобы правильно поставить диагноз инфекционного заболевания, чаще всего используют комплекс всех лабораторных методов: выделение возбудителя, определение антител в крови больного и выявление повышенной чувствительности замедленного типа.
71. Основные принципы микробиологической диагностики вирусных инфекций.
Цель микробиологических исследований: установить факт наличия или отсутствия возбудителя в организме больного или на объектах окружающей среды.
Задачи микробиологических исследований: идентифицировать микроорганизмы в исследуемом материале, определить к какому виду они относятся, морфологические, биохимические, токсигенные и антигенные свойства, установить чувствительность микроорганизмов к антимикробным препаратам.
Отбор материала – первый этап микробиологической диагностики. Материал определяют свойствами возбудителя патогенезом вызываемого им заболевания. При поражении отдельных органов и систем отбирают материал соответствующей локализации. При отсутствии поражений исследуют кровь. Образцы следует забирать до назначения антимикробной терапии, соблюдая правила асептики для предупреждения загрязнения материала. Каждый образец следует рассматривать как потенциально опасный. Материал собирают в объеме достаточном для всего комплекса исследований. Микробиологическое исследование следует начинать немедленно после поступления материала в лабораторию. Выбор материала для исследования должен соответствовать характеру инфекционного процесса.
Выбор лабораторных исследований. Микробиологической диагностики инфекционных заболеваний составляют: микроскопические, микробиологические, биологические, серологические и аллергологические методы.
Микроскопические методы включают приготовление мазков и препаратов для микроскопирования. В большинстве случаев результаты микроскопических исследований носят ориентировачный характер ( например, определяют отношение возбудителей к окраске), так как многие микроорганизмы лишены морфологических и тинкториальных особенностей. Тем не менее микроскопией материала можно определить некоторые морфологические признаки возбудителей (наличие ядер, жгутиков, внутриклеточных включений и др.), а также установить факт наличия или отсутствия микроорганизмов в присланных образцах.
Микробиологические методы – «золотой стандарт» микробиологической диагностики, так как результаты микробиологических исследований позволяют точно установить факт наличия возбудителя в исследуемом материале. Идентификацию чистых культур (до вида микроорганизма) проводят с учетом морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, токсигенных и антигенных свойств микроорганизма. Большинство исследований включает определение чувствительности к антимикробным препаратам у выделенного возбудителя. Для эпидемиологической оценки роли микроорганизма проводят внутривидовую идентификацию определением фаговаров, биоваров, резистентваров и т.д.
Биологические методы направлены на определение наличия токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение возбудителя. Методы включают заражение лабораторных животных исследуемым материалом с последующим выделением чистой культуры патогенна либо установлением факта присутствия микробного токсина и его природы. Моделирование эксперементальных инфекций у чувствительных животных – важный инструмент изучения патогенеза заболевания и характера взаимодействий внутри системы микроорганизм - макроорганизм. Для проведения биологических проб используют только здоровых животных определенных массы тела и возраста. Инфекционный материал вводят внутрь, в дыхательные пути, внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно и подкожно, в переднюю камеру глаза, через трепанационное отверстие черепа субокципитально (в большую цистерну головного мозга). У животных прижизненно забирают кровь, экссудат из брюшины, после гибели – кровь, кусочки различных органов, СМЖ, экссудат из различных полостей.
Серологичекие методы выявления специфических АТ и Аг возбудителя – важный инструмент в диагностике инфекционных заболеваний. Особую ценность имеет в том случае, если выделить возбудителя не представляется возможным. При этом необходимо выявить повышение титров АТ , в связи с чем исследуют парные образцы сыворотки, взятые в интервале 10 – 20 суток (иногда этот интервал может быть более длительным). Антитело обычно появляется в крови на 1-2ю неделю заболевания и циркулируют в организме относительно долго, что позволяет использовать их выявление для ретроспективных эпидемиологических исследований. Определение классов Ig четко характеризует этапы инфекционного процесса, а также может служить косвенным прогностическим критерием. Особое значение имеют методы выявления микробных Аг. В значимых количествах они появляются уже на самых ранних сроках, что делает их идентификацию важным инструментом экспресс – диагностики инфекционных заболеваний, а количественное их определение в динамике инфекционного процесса служит критерием эффективности проводимой антимикробной терапии.
Аллергологичиские методы. Аг многих возбудителей обладают сенсибилизирующим де0йствием, что используют для диагностики инфекционных заболеваний, а также при проведении эпидемиологических исследований. Наибольшее распространение кожно – аллергические пробы, включающие внутрикожное введение Аг(аллергена) с развитием реакции ГЗТ. Кожные пробы нашли применение в диагностике таких заболеваний как сап, меллиоидоз, бруцеллез. Наиболее известна проба Манту, используемая как для диагностики туберкулеза, так и для оценки невосприимчивости организма к возбудителю.
72. Серологический метод диагностики инфекционных заболеваний.
Особую ценность имеет в том случае, если выделить возбудителя не представляется возможным. При этом необходимо выявить повышение титров АТ , в связи с чем исследуют парные образцы сыворотки, взятые в интервале 10 – 20 суток (иногда этот интервал может быть более длительным). Антитело обычно появляется в крови на 1-2ю неделю заболевания и циркулируют в организме относительно долго, что позволяет использовать их выявление для ретроспективных эпидемиологических исследований. Определение классов Ig четко характеризует этапы инфекционного процесса, а также может служить косвенным прогностическим критерием. Особое значение имеют методы выявления микробных Аг. В значимых количествах они появляются уже на самых ранних сроках, что делает их идентификацию важным инструментом экспресс – диагностики инфекционных заболеваний, а количественное их определение в динамике инфекционного процесса служит критерием эффективности проводимой антимикробной терапии.
Сущность серологических методов исследования состоит в определении титра антител в сыворотке крови больного в динамике болезни по отношению к известному антигену, вводимому в серологическую реакцию.
В клинической практике чаще всего используется реакция агглютинации (РА) Видаля, ее разновидности, РНГА, РСК и более информативные современные методы (ИФА, РИА, ЛИФА и др.).
РА — определение неизвестных антител с помощью известных антигенов и установление вида возбудителя с помощью известных антител. РИГА и РНГА — более специфичны, используются меченные эритроциты. РТГА — основан на способности некоторых вирусов агглютинировать эритроциты. РИ — реакция иммунодиффузии, различная способность антигенов и антител диффундировать в геле. РСК титрование антигенов или антител по степени фиксации комплемента с комплексом антиген-антитело. PH - способность антител нейтрализовать токсины и антигены вирусов. ИФА — используются антитела, конъюгированные с ферментом. РИА — используется радиоактивная метка антигенов или антител. ЛИФА — лантанидный иммунофлюоресцентный анализ — используются в качестве метки элементы редкоземельных металлов.
Забор крови для серологического исследования выполняется так же, как и при посеве, но в отличие от последнего, его лучше осуществлять самотеком, а не шприцом. Для этого берут иглу с более широким просветом и вводят в локтевую вену без шприца. В пробирку собирают 3—5 мл крови. При таком сборе эритроциты меньше травмируются и сыворотка крови реже бывает с явлениями гемолиза. После отстаивания и центрифугирования крови сыворотку с помощью пипетки переносят в другую пробирку или эпиндорф и хранят в холодильнике при температуре +4 °С до постановки реакции. Поскольку иммунный ответ при большинстве инфекционных болезней развивается с 5-7-го дня, а максимальное нарастание титра антител происходит лишь в периоде реконвалесценции, серологические методы менее пригодны для ранней диагностики и используются главным образом в целях ретроспективной расшифровки этиологии уже перенесенного инфекционного заболевания.
Однако кровь для серологических исследований берется и в первые дни болезни, что в дальнейшем дает возможность наблюдать за нарастанием титра антител в динамике заболевания. Повторные серологические исследования при бактериальных инфекциях производятся не раньше, чем через 5-7 дней. При вирусных заболеваниях берутся «парные сыворотки» с интервалом 10-12 дней и при нарастании титра антител в 4 раза и более подтверждается диагноз предполагаемого заболевания.
73. Понятие об иммуномодуляторах. Принцип действия. Применение.
Известно большое количество иммуномодуляторов, разделяемых на три основных класса
Цитокины: ИЛ, ИФН, колониестимулирующие факторы, ФНО, эритропоэтины и др.
Природные соединения (микроорганизмы и их компоненты): Бактериальные и вирусные вакцины, Л ПС, гликаны, продигиозан, сальмазан, пирогенал, рибомунил и др.
Синтетические высоко- и низкомолекулярные препараты: Полифосфаты, поликарбоксилаты, полисульфаты, левамизол, инозиплекс, диуцифон и др.
• Синтетические экзогенные иммуномодуляторы включают тысячи соединений, обладающих, помимо иммуномодулирующего, рядом других эффектов
Их объединяет одно свойство — иммуномодуляторы имеют «иммунные точки действия», то есть мишени среди иммунокомпетентных клеток.
Эндогенные иммуномодуляторы — цитокины, обеспечивающие поддержание гомеостаза в организме. Экзогенные иммуномодуляторы разделяют на природные и синтетические. • Природные экзогенные иммуномодуляторы — компоненты микроорганизмов (вирусов, бактерий); наиболее изучены ЛПС, пептидо- и кетогликаны бактерий. Некоторые вакцины сами способны оказывать иммуномодулирующее и терапевтическое действие. Например, противогерпетическан вакцина снижает частоту рецидивов простого герпеса; введение БЦЖ усиливает эффективность химиопрепаратов, применяемых для лечения лепры. Аналогичный эффект наблюдают и при сочетании БЦЖ с противотуберкулёзными ЛС.
• Синтетические экзогенные иммуномодуляторы включают тысячи соединений, обладающих, помимо иммуномодулирующего, рядом других эффектов (например, гипотензивным). В эту группу препаратов входят синтетические аналоги нуклеиновых кислот (синтетические полинуклеотиды), адапто-гены, поверхностно-активные вещества (полисульфаты, поликарбонаты), производные пирана, имидазола, флюоренов, пиримидинов и др. Помимо иммуномодулирующего действия, многие синтетические препараты и микробные продукты способны активировать систему ИФН.
Препараты можно применять как для лечения иммунодефицитов, вызванных вирусными инфекциями, так и для профилактики инфекций у лиц с иммунодефицитами. В настоящее время выделяют три основных типа иммуномодулирующей терапии — активная, адаптивная и пассивная. Важное условие для успешного применения иммуномодуляторов — знание мишеней, на которые они действуют. Например, известные бактериальные продукты (ЛПС энтеро-бактерий, сальмозан, продигиозан и др.) активируют макрофаги. ИЛ-4, ИЛ-5 и ИЛ-6 стимулируют рост и дифференцировку В-лимфоцитов. Пептиды вилочковой железы (входящие в состав препаратов тимозин, тимопоэтин, тималин, Т-активин), левамизол, изопринозин, полиакриламидные кислоты, ИЛ-I, ИЛ-2 и ИЛ-3 стимулируют различные популяции Т-клеток.
Наконец, ИФН рассматривают как лимфокины с неспецифическим механизмом действия, а синтетические и природные полифосфаты и поликарбоксилаты — как поликлональные активаторы, действующие на целые субпопуляции лимфоцитов.
Применение иммуномодуляторов. Подавляющее большинство иммуномодуляторов в силу ряда причин (токсичность, недостаточная эффективность, побочные эффекты, высокая стоимость, недостаточная изученность) редко применяют на практике. Практическое применение нашли лишь единичные препараты:
Иммуномодуляторы, имеющие клиническое значение:
Диуцифон - Стимуляция секреции ИЛ-2
Левамизол - Коррекция функций Т-лимфоцитов и фагоцитов
Изопринозин - Стимуляция активности Т-лимфоцитов
Миелопептид - Стимуляция активности В-лимфоцитов
Дибазол, метилурацил, пентоксил, пирогенал, продигиозан, ЛПС энтеробактерий, сальмозан - Стимуляция активности фагоцитов, В-лимфоцитов, лейкопэза и цитотоксических свойств моноцитов
ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6 - Запуск и стимуляция дифференцировки В-лимфоцитов
Т-активин, тимозин, тимотропин, тималин - Коррекция функций Т-лимфоцитов, стимуляция синтеза ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-3 и цитотоксической активности лимфоидных клеток
Полифосфаты, поликарбоксилаты - Поликлональная активация иммунокомпетентных клеток
Индукторы ИФН - Синтез ИФН
ИФН - Описано более 100 эффектов
Принцип действия иммуномодуляторов:Основная способность этих лекарств – активизация естественной защиты организма – иммунитета. Благодаря иммуномодуляторам наше тело активнее вырабатывает вещества, уничтожающие токсины и вирусы. Если организм недостаточно быстро производит антитела и интерфероны, то вирусы успевают опередить иммунную защиту и человек заболевает. Иммуномодуляторы поддерживают защитные механизмы в «боевой готовности», чтобы в любой момент организм мог эффективно противостоять вирусной инфекции.
74. Стафилококки. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Отдел: Firmicutes
Семейство: Micrococcaceae
Род: Staphylococcus
Виды: S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus.
Морфологические свойства: Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются несимметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некоторых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы.Культуральные свойства: Стафилококки — факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом, не имеющим таксономического значения.  Могут расти  на агаре с высоким содержанием NaCl. Обладают сахаролитическими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу.Стафилококки пластичны, быстро приобретают устойчивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерминируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции бета-лактамазы.Антигенная структура. Около 30 антигенов, представляющих собой белки, полисахариды и тейхоевые кислоты. В составе клеточной стенки стафилококка содержится протеин А, который может прочно связываться с Fc-фрагментом молекулы иммуноглобулина, при этом Fab-фрагмент остается свободным и может соединяться со специфическим антигеном. Чувствительность к бактериофагам (фаготип) обусловлена поверхностными рецепторами. Многие штаммы стафилококков являются лизогенными (образование некоторых токсинов происходит с участием профага).Факторы патогенности: Условно – патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза – защищает бактерии от действия фагоцитов, бета-лактамаза – разрушает молекулы антибиотиков.Резистентность. Устойчивость в окружающей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная.Патогенез. Источником инфекции стафилококков  -  человек и некоторые виды животных (больные или носители). Механизмы передачи — респираторный, контактно-бытовой, алиментарный.Иммунитет: Постинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий, ненапряженный.Клиника. Около 120 клинических форм проявления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гнойно-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглотки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (интоксикации).Микробиологическая диагностика. Материал для исследования – гной, кровь, моча, мокрота, испражнения. Бактериоскопический метод: из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие  грам«+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений.Бактериологический метод: Материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течение суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2—3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков. S.aureus – «+»: образование плазмокоагулазы, лецитиназы. Ферментация: глюк, маннита, образование а-токсина.Для установления источника госпитальной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры.Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте ( компонент клеточной стенки).Лечение и профилактика. Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, метициллин, оксациллин, устойчивые к бета-лактамазе: ванкомицин. тейкопланин. линезолид. фузидиевая кислота ). В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитоксическая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизированный адсорбированным стафилококковым анатоксином. Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином. Стафилококковый анатоксин: получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой  и адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Стафилококковая вакцина: взвесь коагулазоположительных стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют для лечения длительно текущих заболеваний.  Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый: гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержит стафилококковый анатоксин. Готовят из человеч. крови, с высоким содержанием антител. Применяется для специфического лечения.
75. Стрептококки – возбудители гнойно- воспалительных инфекций. Классификация. Свойства. Патогенез вызываемых поражений.
Род: Streptococcus
Виды: S.pyogenes, S.pneumoniae
По предложению Ребекки Лэнсфилд (1933), согласно наличию специфических углеводов в клеточной стенке стрептококки делят на 17 серогрупп (наиболее важные - A, B, C, D, G). Такое разделение возможно с помощью серологических (от лат. serum - сыворотка) реакций, т.е. путем определения требуемых антигенов по их взаимодействию с известными антителами стандартных сывороток.
Большинство болезней человека вызывается β-гемолитическими стрептококками из серогруппы A. Практически все они принадлежат одному виду - S. Pyogenes Он вызывает:
рожистое воспаление (рожу),
скарлатину (симптомы: ангина + повышенная температура + мелкоточечная сыпь + интоксикация)
стрептококковые фарингиты (воспаление глотки) и ангины.
Свойства: Гр +, мелкие, шаровидные клетки, располагаются цепочками или попарно, спор и жгутиков нет, имеют капсулу. Факультативные анаэробы. На простых питательных средах растут плохо. Культивируют в сахарном бульоне и на кровяном агаре, при рН 7,2-7,6, оптимальная температура роста для них 37°С.
Патогенез поражений стрептококками (по Поздееву)
Первый этап инфекционного процесса — адгезия микроорганизма к эпителию слизистых оболочек. Основные адгезины — липотейхоевые кислоты, покрывающие поверхностные фимбрии. Не менее важную роль в прикреплении к субстратам играют гиалуронидаза, стрептокиназа и стрептодорназа.
Белок М стрептококков [от англ. mucoid, слизистый, так как колонии штаммов-продуцентов имеют слизистую консистенцию] по структуре напоминает фимбрии грамотрицательных бактерий. Белок М— основной фактор вирулентности и типоспецифтеский Аг. AT к нему обеспечивают длительную невосприимчивость к повторному заражению, однако выделяют более 80 сероваров белка М, что значительно снижает эффективность гуморальных защитных реакций. Белок М ингиби-рует фагоцитарные реакции, непосредственно действуя на фагоциты либо маскируя рецепторы для компонентов комплемента и опсонинов, адсорбируя на своей поверхности фибриноген, фибрин и продукты его деградации. Белок также проявляет свойства суперантигена, вызывая поликлональную активацию лимфоцитов и образование AT с низким аффинитетом. Подобные свойства играют существекную роль в нарушении толерантности к тканевым изоантигенам и развитии аутоиммунной патологии.
Капсула стрептококков — второй по значимости фактор вирулентности. Она защищает бактерии от антимикробного потенциала фагоцитов и облегчает адгезию к эпителию. Капсула образована гиалуроновой кислотой, аналогичной входящей в состав соединительной ткани. Соответственно капсула проявляет минимальную иммуногенную активность и не распознаётся как чужеродный агент. Интерес представляет способность бактерий самостоятельно разрушать капсулу при инвазии в ткани за счёт синтеза гиалуронидазы. Роль гиалуронидазы в патогенезе поражений изучена плохо: с одной стороны, она участвует в разрушении соединительнотканной стро-мы, с другой — имеет сходство со многими аутоантигенами и, возможно, участвует в запуске аутоиммунных реакций.
С5а-пептидаза стрептококков — третий фактор патогенности, подавляющий активность фагоцитов. Фермент расщепляет и инактивирует С5а компонент комплемента, выступающий мощным хемо-аттрактантом.
Стрептолизин О стрептококков[от англ. oxygen sensitive, чувствительный к кислороду] проявляет свойства гемолизина, разрушая эритроциты в анаэробных условиях. Проявляет иммуногенные свойства, титры AT к нему имеют прогностическое значение. Стрептолизин S [от англ. stable, устойчивый] резистентен к кислороду, не несёт антигенной нагрузки и вызывает поверхностный гемолиз на кровяных средах. Оба фермента разрушают не только эритроциты, но и другие клетки; например, стрептолизин О вызывает повреждение кардиомиоцитов, а стрептолизин S — фагоцитов, поглотивших бактерии.
Эритрогенные (пирогенные) токсины стрептококков весьма схожи с токсинами стафилококков. Имму-нологически их разделяют на три типа (А, В и С); способность к образованию токсинов детерминирована заражением бактериальной клетки умеренным фагом, несущим ген токсинообразо-вания. Эритрогенные токсины проявляют свойства суперантигенов: оказывают митогенное действие на Т-клетки, а также стимулируют секрецию макрофагами ИЛ-1 и ФНО.
Кардиогепатический токсин стрептококков синтезируют некоторые штаммы стрептококков группы А. Он вызывает поражения миокарда и диафрагмы, а также образование гигантоклеточных гранулём в печени.
Прочие экзоферменты стрептококков. Стрептокиназа (фибринолизин) активирует плазминоген, что приводит к образованию плазмина и растворению фибриновых волокон (фермент не проявляет прямой фибринолитической активности). Гиалуронидаза облегчает перемещение бактерий по соединительной ткани. Роль ДНКазы (стрептодорназа) и НАДаз изучена плохо, но выявление AT к стрептодорназе В используют в диагностике различных осложнений, вызванных стрептококками группы А. Медицинское применение нашла очищенная смесь стрептокиназы, стрепто-дорназы и других протеолитических ферментов стрептококков (стрсптокиназа-стрептодорназа), используемая для рассасывания тромбов, фибринозных и гнойных экссудатов.
Перекрёстные реакции стрептококков. Несмотря на способность подавлять или снижать активность фагоцитов, стрептококки инициируют выраженную воспалительную реакцию, во многом обусловленную секрецией более 20 растворимых веществ. Часть из них составляют ферменты {стрептолизины S и О, гиалуронидаза, ДНКазы, НАДазы и стрептокиназа), часть — эритрогенные токсины. Патогенез ревматических поражений, особенно кардитов, существенно отличается от наблюдаемых при большинстве инфекций, сопровождающихся бактериемией. Основные повреждения вызывают иммунные механизмы, в частности перекрёстная реакция с миокардио-цитами и белком М возбудителя. Весьма сходны механизмы повреждения почек при острых гломерулонефритах, обусловленные депонированием иммунных комплексов (стрептококк-IgG) на базальной мембране. С одной стороны, они активируют комплементарный каскад, что стимулирует воспалительный ответ, с другой — за счёт нарушения аутотолерантности и антигенной мимикрии индуцируют клеточные цитотоксические реакции.
76. Стрептококки – возбудители распираторных инфекций. Классификация. Свойства. Патогенез вызываемых поражений.
Род: Streptococcus
Виды: S.pyogenes, S.pneumoniae
По предложению Ребекки Лэнсфилд (1933), согласно наличию специфических углеводов в клеточной стенке стрептококки делят на 17 серогрупп (наиболее важные - A, B, C, D, G). Такое разделение возможно с помощью серологических (от лат. serum - сыворотка) реакций, т.е. путем определения требуемых антигенов по их взаимодействию с известными антителами стандартных сывороток.
Свойства: Гр +, мелкие, шаровидные клетки, располагаются цепочками или попарно, спор и жгутиков нет, имеют капсулу. Факультативные анаэробы. На простых питательных средах растут плохо. Культивируют в сахарном бульоне и на кровяном агаре, при рН 7,2-7,6, оптимальная температура роста для них 37°С.
Стрептококки группы Б обычно колонизируют носоглотку, ЖКТ и влагалище; подавляющую часть изолятов составляет S. agalactiae. Серологически стрептококки группы В разделяют на серовары la, lb, Ic, II и III. Бактерии сероваров 1а и III тропны к тканям ЦНС и дыхательных путей, они часто вызывают менингиты у новорожденных. Наиболее типичен вертикальный путь заражения — при прохождении плода по родовым путям, инфицированным стрептококками. Подобным образом происходит заражение не менее 50% детей, составляющих группу риска. У детей, родившихся у женщин со значительной колонизацией родовых путей, чаще регистрируют раннее развитие менингита (в течение первых 5 сут), а у детей, инфицированных большим количеством возбудителей, подобные поражения наблюдают позднее (от 6 сут до 3 мес). Горизонтальная передача стрептококков группы В происходит значительно реже. Большинство поражений обусловлено проникновением возбудителя в кровоток (табл. 12-2). Особо необходимо отметить стрептококковые пневмонии, развивающиеся на фоне ОРВИ. «Чистые» бактериальные поражения наблюдают редко, но как осложнения ОРВИ пневмонии отмечают так часто, что создаётся впечатление, что сами стрептококки группы В не способны вызывать поражения лёгких. Подобные пневмонии обусловлены активацией микрофлоры в зеве и носоглотке, реже регистрируют заражение от больного вирусами в ассоциации с высоковирулентными стрептококками.
Патогенез поражений стрептококков группы В (по Поздееву) Гематогенное диссеминирование стрептококков группы В во многом обусловлено дефицитом специфических AT, Clq и С4 компонентов комплемента (небольшое содержание последних коррелирует с низкой бактерицидной активностью в целом). Определенную роль играет полисахаридная капсула, снижающая эффективность фагоцитарных реакций. В отличие от бактерий группы А, капсула стрептококков группы В проявляет иммуногенпые свойства, и AT к её Аг (в достаточном количестве) способны оказывать протективное действие. Как патогенетический фактор следует рассматривать и нейраминидазу, модифицирующую мембрану клеток хозяина, что облегчает адгезию микроорганизмов.
77. Менингококки. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Таксономия: возбудитель Neisseriameningitidis (менингококк) относится к отделу Gracilicutes, семейству Neisseriaceae, роду Neisseria.
Свойства: мелкие диплококки, располагаются в виде кофейных зерен, обращенных вогнутыми поверхностями друг к другу; неподвижны; спор не образуют; Гр-; капсула непостоянна; имеют пили; культивируют на средах, содержащих нормальную сыворотку либо дефибринированную кровь барана или лошади, а также на селективной среде с ристомицином; повышенная концентрация угл.газа стимулирует рост менингококков; малоустойчивы в окр.среде; чувствительны к высушиванию и охлаждению; в теч. нескольких минут погибают при температуре выше 50 и ниже 22; чувствительны к пенициллинам, тетрациклинам, эритромицину; устойчивы к ристомицину и сульфамидам, раствору хлорной извести.
Патогенез: Человек – единственный хозяин менингококков. Носоглотка – входные ворота инфекции. Здесь бактерии могут существовать, не вызывая воспаления, но иногда становятся причиной назофарингита. Из носоглотки они могут попасть в кровяное русло (менингококкемия) с развитием лихорадки и геморрагической сыпью. Наиболее частым осложнением менингококкемии является менингит или менингоэнцефалит (воспаление мозговых оболочек).
Иммунитет. Постинфекционный иммунитет при генерализованных формах болезни стойкий, напряженный.
Антигенная структура: Имеет несколько АГ: родовые, общие для рода нейссерии (белковые и полисахаридные, которые представлены полимерами аминосахаров и сиаловых кислот); видовой (протеиновый); группоспецифические (гликопротеидный комплекс); типоспецифические (белки наружной мембраны), которые разграничивают серотипы внутри серогрупп В и С. По капсульным АГ выделяют девять серогрупп (А, В, С, D, X, Y, Z, W135 и Е). Капсульные АГ некоторых серогрупп иммуногенны для человека. Штаммы серогруппы А вызывают эпидемические вспышки. В, С и Y - спорадические случаи заболевания. На основании различий типоспецифических АГ выделяют серотипы, которые обозначают арабскими цифрами (серотипы выявлены в серогруппах В, С, Y, W135). Наличие АГ серотипа 2 рассматривается как фактор патогенности. Во время эпидемий преобладают менингококки групп А и С, которые являются наиболее патогенными.
Биохимическая активность: низкая. Разлагает мальтозу и глюк. до кислоты, не образует индол и сероводород. Ферментация глюк. и мальтозы – диф.-диагностический признак. Не образует крахмалоподобный полисахарид из сахарозы. Обладает цитохромоксидазой и каталазой. Отсутствие -галактозидазы, наличие -глютаминтрансферазы.
Факторы патогенности: капсула – защищает от фагоцитоза. AT, образующиеся к полисахаридам капсулы, проявляют бактерицидные свойства. Токсические проявления менингококковой инфекции обусловлены высокотоксичным эндотоксином. Для генерализованных форм менингококковой инфекции характерны кожные высыпания, выраженное пирогенное действие, образование AT. Пили, белки наружной мембраны, наличие гиалуронидазы и нейраминидазы. Пили являются фактором адгезии к слизистой оболочке носоглотки и тканях мозговой оболочки. Менингококки выделяют IgA-протеазы, расщепляющие молекулы IgA, что защищает бактерии от действия Ig.
Диагностика: Материал: кровь, спинномозговая жидкость, слизь с носоглоточных тампонов.
Диагностика менингококковой инфекции основана на бактериоскопическом исследовании, выделении культуры и биохимической идентификации возбудителя. Материалы для исследования — СМЖ, кровь и отделяемое носоглотки.
В окрашенных мазках обнаруживают грамотрицательные диплококки или одиночные кокки, что значительно облегчает распознавание возбудителя при характерной клинической картине Следует помнить, что в мазках СМЖ обнаружить менингококки довольно трудно; в этих случаях диагноз подтверждают обнаружением Аг N. meningitidis в реакциях латекс-агглютинации или встречного иммуноэлектрофореза. В период менингококкемии грамотрицательные диплококки могут быть обнаружены в окрашенных мазках из соскобов петехиальных высыпаний, а также в лейкоцитах периферической крови.
Проводят посев материала на твёрдые или полужидкие питательные среды, содержащие сыворотку, кровь или асцитическую жидкость. Культуры инкубируют при 37 °С и повышенном содержанием (8-10%) С02. Оксидаза-положительные колонии предположительно рассматривают как принадлежащие к видам Neisseria.
Менигококки образуют мелкие нежные полупрозрачные колонии диаметром 2-3 мм. Наличие в культуре N. meningitidis подтверждает ферментация глюкозы и мальтозы, но не лактозы, сахарозы и фруктозы. Принадлежность к серогруппам определяют серологически (РА). Выделение возбудителя не всегда удачно; в диагностике менингококковых инфекций большую роль играет обнаружение Аг N. meningitidis и AT к ним.
Аг менингококка распознают в реакции коагглютинации, латекс-агглютинации, встречного электрофореза и ИФА. AT распознают в РПГА и ИФА с использованием группоспецифичных полисахаридных диагностикумов.
Лечение. В качестве этиотропной терапии используют антибиотики - бензилпенициллин (пенициллины, левомицетин, рифампицин), сульфамиды. Профилактика. Специфическую профилактику проводят менингококковой химической полисахаридной вакциной серогруппы А и дивакциной серогрупп А и С по эпидемическим показаниям. Неспецифическая профилактика сводится к соблюдению санитарно-противоэпидемического режима в дошкольных, школьных учреждениях и местах постоянного скопления людей.
78. Гонококки. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Нейссерии – грамотрицательные аэробные кокки, относящиеся к роду Neisseria, включающему 8 видов: Neisseria meningitidis, Neisseriagonorrhoeae, N. flava, N. subflava, N. perflava, N. sicca.Морфология: неподвижные неспорогенные грамотрицательные диплококки, образующие капсулу, полиморфны – встречаются в виде мелких или крупных форм а так же в виде палочек, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями (метиленовым синим, бриллиантовым зелёным и т. д.), под действием пенициллина образуют L-формы, могут менять свойства и превратиться в грамположительную форму.Культуральные свойства: аэробы, хемоорганотрофы; для роста требуют свежеприготовленные влажные среды с добавлением нативных белков крови, сыворотки или асцитической жидкости. Не вызывают гемолиза на средах, содержащих кровь; на средах с добавлением молока, желатина и картофеля не растут. На плотных питательных средах через 24ч, при содержании протеина II образуют слегка мутные бесцветные колонии, не содержащие его образуют круглые прозрачные колонии в виде капель росы, на жидких питательных средах растут диффузно и образуют плёнку, через несколько часов оседающую на дно.Биохимическая активность: крайне низкая – разлагают только глюкозу, продуцируют каталазу и цитохромоксидазу, протеолитическая активность отсутствует, H2S, аммиака, индола не образует.Антигенная структура: Содержит А и К антигены, ЛПС обладают сильной иммуногенностью, основную антигенную нагрузку несут пили и белки мембраны. Наружная мембрана содержит протеины I, II, III классов, проявляющих сильные иммуногеннные свойстваФакторы патогенности: капсула, пили, эндотоксин, белки мембраныКапсула обладает антифагоцитарным действием. Пили обеспечивают адгезию к эпителию. Клеточная стенка содержит эндотоксин. Поверхностный белок  I класса – обеспечивает устойчивость к бактерицидным факторам слизистых оболочек. Класса II – (протеины мутности, ОРА-протеины) обуславливают прикрепление к эпителию, препятствуют фагоцитозу. N. синтезируют IgA протеазу, расщепляющую Ig.Резистентность: очень неустойчивы в окружающей среде, чувствительны к действию антисептиков, высокочувствительны к пенициллинам, тетрациклину, стрептомицину. Способны к утилизации пенициллинов при приобретении бета-лактамаз.Патогенез: Входные ворота – цилиндрический эпителий мочеполовых путей. Гонококки прикрепляются к эпителию посредством поверхностных белков, вызывают гибель и слущивание клеток, захватываются клетками, где размножаются, попадают на БМ, после чего попадают на соед. ткань и вызывают воспаление или попадают в кровь с возможным дессиминированием.Иммунитет – почти отсутствует.
Микробиологическая диагностика: Бактериоскопическое исследование: Материалом для исследования служит гнойное отделяемое из уретры, влагалища, примой кишки, глотки, сыворотки крови. Готовят мазки, окраска по Граму,  При  «+» результате – обнаруживают гонококки – грам- диплококки бобовидной формы., находятся внутри лейкоцитов. Положительный диагноз ставится при острой форме гонореи до применения антибиотиков. Бактериологическое исследование. Материал засевают на чашки Петри со специальными питательными средами — КДС, сывороточным агаром. Среда КДС содержит питательный агар с добавлением в определенной концентрации казеина, дрожжевого экстракта и сыворотки крови. Посевы инкубируют при 37°С в течение 24—72 ч. Гонококки образуют круглые прозрачные колонии, напоминающие капли росы, в отличие от более мутных колоний стрептококков или пигментированных колоний стафилококков, которые также могут расти на этих средах. Подозрительные колонии пересевают в пробирки на соответствующие среды для получения чистых культур, которые идентифицируют по сахаролитическим свойствам на средах «пестрого» ряда (полужидкий агар с сывороткой и углеводом). Гонококк ферментирует только глюкозу с образованием кислоты.Серодиагностика. В некоторых случаях ставят РСК Борде — Жангу. В качестве антигена используют взвесь убитых гонококков. Реакция Борде—Жангу имеет вспомогательное значение при диагностике гонореи. Она положительна при хронической и осложненной гонорее. Лечение и профилактика: антибиотикотерапия (пенициллин, тетрациклин, канамицин), иммунотерапия. Гонококковая вакцина  - взвесь гонококков, убитых нагреванием, используется для вакцинотерапии хронической гонореи. Препарата для плановой иммунизации нет. Для индивидуальной профилактики в порядке экстренной меры рекомендовано использовать 0,05% раствор биглюконата хлоргексидина, который выпускается во флаконах с пипеткой под названием "кожный дигитан". Для предупреждения бленнореи детям сразу после рождения на конъюнктиву глаза накапывают раствор пенициллина, альбуцида или другого антимикробпого препарата.
Для лечения больных гонореей применяют антибиотики, к которым чувствителен гонококк. Эффективный препарат - азитромицин (сумамед).
При хронической гонорее применяют убитую гонококковую вакцину, которая вводится внутрикожно или внутримышечно, дозируется в млн. микробных клеток.
79. Эшерихии. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Эшерихиозы - инфекционные болезни, возбудителем которых является Escherichiacoli.Различают энтеральные (кишечные) и парентеральные эшерихиозы. Энтеральные эшерихиозы — острые инфекционные болезни, характеризующиеся преимущественным поражением ЖКТ. Они протекают в виде вспышек, возбудителями являются диареегенные штаммы E.coli. Парентеральные эшерихиозы — болезни, вызываемые условно-патогенными штаммами E.coli— представителями нормальной микрофлоры толстой кишки. При этих болезнях возможно поражение любых органов.Таксономическое положение. Возбудитель — кишечная палочка — основной представитель рода Escherichia, семейства Enterobacteriaceae, относящегося к отделу Gracilicutes.Морфологические и тинкториальные свойства. E. coli — это мелкие грамотрицательные палочки с закругленными концами. В мазках они располагаются беспорядочно, не образуют спор, перитрихи. Некоторые штаммы имеют микрокапсулу, пили.Культуральные свойства. Кишечная палочка — факультативный анаэроб, оптим. темп. для роста - 37С. E. coliне требовательна к питательным средам и хорошо растет на простых средах, давая диффузное помутнение на жидких и образуя колонии на плотных средах. Для диагностики эшерихиозов используют дифференциально-диагностические среды с лактозой — Эндо, Левина.Ферментативная активность.E. coliобладает большим набором различных ферментов. Наиболее отличительным признаком E. coliявляется ее способность ферментировать лактозу.Антигенная структура. Кишечная палочка обладает соматическим О-, жгутиковым Н- и поверхностным К-антигенами. О-антиген имеет более 170 вариантов, К-антиген — более 100, Н-антиген — более 50. Строение О-антигена определяет принадлежность к серогруппе. Штаммы E. coli, имеющие присущий им набор антигенов (антигенную формулу), называются серологическими вариантами (серовары). По антигенным, токсигенным, свойствам различают два биологических варианта E. coli: 1) условно-патогенные кишечные палочки; 2) «безусловно» патогенные, диареегенные.Факторы патогенности. Образует эндотоксин, обладающий энтеротропным, нейротропным и пирогенным действием. Диареегенные эшерихии продуцируют экзотоксин вызывающий значительное нарушение водно-солевого обмена. Кроме того, у некоторых штаммов, как и возбудителей дизентерии, обнаруживается инвазивный фактор, способствующий проникновению бактерий внутрь клеток. Патогенность диареегенных эшерихий  - в возникновении геморрагии, в нефротоксическом действии. К факторам патогенности всех штаммов E.coliотносятся пили и белки наружной мембраны, способствующие адгезии, а также микрокапсула, препятствующая фагоцитозу.Резистентность.E. coliотличается более высокой устойчивостью к действию различных факторов внешней среды; она чувствительна к дезинфектантам, быстро погибает при кипячении.Роль E. coli. Кишечная палочка — представитель нормальной микрофлоры толстой кишки. Она является антагонистом патогенных кишечных бактерий, гнилостных бактерий и грибов рода Candida. Кроме того, она участвует в синтезе витаминов группы В, Е и К, частично расщепляет клетчатку. Штаммы, обитающие в толстой кишке и являющиеся условно-патогенными, могут попасть за пределы ЖКТ и при снижении иммунитета и их накоплении стать причиной различных неспецифических гнойно-воспалительных болезней (циститов, холециститов) - парентеральных эшерихиозов.Эпидемиология. Источник энтеральных эшерихиозов - больные люди. Механизм заражения — фекально-оральный, пути передачи — алиментарный, контактно-бытовой. Патогенез. Полость рта. Попадает в тонкую кишку, адсорбируется в клетках эпителия с помощью пилей и белков наружной мембраны. Бактерии размножаются, погибают, освобождая эндотоксин, который усиливает перистальтику кишечника, вызывает диарею, повышение температуры тела и другие симптомы общей интоксикации. Выделяет экзотоксин - тяжелая диарея, рвоту и значительное нарушение водно-солевого обмена. Клиника. Инкубационный период составляет 4 дня. Болезнь начинается остро, с повышения температуры тела, болей в животе, поноса, рвоты. Отмечаются нарушение сна и аппетита, головная боль. При геморрагической форме в кале обнаруживают кровь. Иммунитет. После перенесенной болезни иммунитет непрочный и непродолжительный. Микробиологическая диагностика. Основной метод — бактериологический. Определяют вид чистой культуры (грамотрицательные палочки, оксидазоотрицательные, ферментирующие глюкозу и лактозу до кислоты и газа, образующие индол, не образующие сероводород) и принадлежность к серогруппе, что позволяет, отличить условно-патогенные кишечные палочки от диареегенных. Внутривидовая идентификация, имеющая эпидемиологическое значение, заключается в определении серовара с помощью диагностических адсорбированных иммунных сывороток. Микробиологическая диагностика иногда сложна, поэтому (особенно для эпидемиологических исследований) нередко приходится пользоваться ретроспективным диагнозом, т. е. исследовать сыворотку переболевшего с выделенной от него культурой в реакциях агглютинации и реакциях пассивной гемагглютинации (РПГА).
Средств специфической иммунопрофилактики нет. Профилактика коли-инфекции направлена на соблюдение санитарно-гигиенических правил, предупреждение инфицирования продуктов питания и размножения в пище микроорганизмов, уничтожение попавших микробов при помощи термической обработки.
Лечение: Лечение эшерихиозов проводят антибиотиками, действующими на грамотрицательную флору (левомицетин, неомицин и др.).
80. Возбудители брюшного тифа и паратифа. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Брюшной тиф и паратифы А и В — острые кишечные инфекции, характеризующиеся поражением лимфатического аппарата кишечника, выраженной интоксикацией. Их возбудителями являются соответственно Salmonella typhi, Salmonella paratyphi А и Salmonella schottmuelleri.Таксономическое положение. Возбудители брюшного тифа и паратифов А и В относятся к отделу Gracilicutes, семейству Enterobacteriaceae, роду Salmonella.
Морфологические и тинкториальные свойства. Сальмонеллы — мелкие грамотрицательные палочки с закругленными концами. В мазках располагаются беспорядочно. Не образуют спор, имеют микрокапсулу, перитрихи.
Культуральные свойства. Сальмонеллы — факультативные анаэробы. Оптимальными для роста являются температура 37С. Растут на простых питательных средах. Элективной средой для сальмонелл является желчный бульон.Биохимическая активность сальмонелл достаточно высока, но они не сбраживают лактозу. S.typhi менее активна, чем возбудители паратифов.Антигенные свойства и классификация. Сальмонеллы имеют О- и H-антигены, состоящие из ряда фракций. Каждый вид обладает определенным набором антигенов. Все виды сальмонелл, имеющие общую так называемую групповую фракцию О-антигена, объединены в одну группу. Таких групп в настоящее время насчитывается около 65. S.typhi и некоторые другие сальмонеллы имеют Vi-антиген (разновидность К-антигена), с этим антигеном связывают вирулентность бактерий, их устойчивость к фагоцитозу.Факторы патогенности. Сальмонеллы образуют эндотоксин, обладающий энтеротропным, нейротропным и пирогенным действием. С белками наружной мембраны связаны адгезивные свойства, наличие микрокапсулы обусловливает устойчивость к фагоцитозу.
Резистентность. Сальмонеллы довольно устойчивы к низкой т-ре. Очень чувствительны к дезинфицирующим веществам, высокой температуре, ультрафиолетовым лучам. В пищевых продуктах (мясе, молоке) сальмонеллы могут не только долго сохраняться, но и размножаться.Эпидемиология. Брюшной тиф и паратиф А — антропонозные инфекции; источником заболевания являются больные люди и бактерионосители. Источником паратифа В могут быть также сельскохозяйственные животные. Механизм заражения фекально-оральный. Среди путей передачи преобладает водный.Патогенез. Возбудители попадают в организм через рот, достигают тонкой кишки, где в ее лимфатических образованиях размножаются и затем попадают в кровь (стадия бактериемии). С током крови они разносятся по всему организму, внедряясь в паренхиматозные органы (селезенку, печень, почки, костный мозг). При гибели бактерий освобождается эндотоксин, вызывающий интоксикацию. Из желчного пузыря, где С. могут длительно сохраняться, они вновь попадают в те же лимфатические образования тонкой кишки. В результате повторного поступления С. может развиться аллергическая реакция, проявляющаяся в виде воспаления, а затем некроза лимфатических образований. Сальмонеллы выводятся из организма с мочой и калом.Клиника. Клинически брюшной тиф и паратифы неразличимы. Инкубационный период составляет 12 дней. Болезнь начинается остро: с повышения температуры тела, появления слабости, утомляемости; нарушаются сон и аппетит. Для брюшного тифа характерны помутнение сознания, бред, галлюцинации, сыпь. Очень тяжелыми осложнениями являются прободение стенки кишки, перитонит, кишечное кровотечение, возникающие в результате некроза лимфатических образований тонкой кишки.Иммунитет. После перенесенной болезни иммунитет прочный и продолжительный.
Микробиологическая диагностика. Исследуемый материал
Выбор наиболее удачного метода диагностики брюшного тифа и паратифов зависит от того, в какие сроки от начала заболевания обследуется больной. Учитывая патогенез, брюшнотифозные и паратифозные бактерии могут быть выделены из крови (1 и нередко 2 недели заболевания), из испражнений (3 неделя заболевания), из мочи (3 неделя заболевания), из желчи - дуоденальное содержимое (в течение всего заболевания), из костного мозга (1-2 недели заболевания), из розеол (с момента их появления), из трупа (желчный пузырь и селезенка).
Микроскопический метод
Не используется.
2. Бактериологический метод
Ранняя диагностика брюшного тифа и паратифов - выделение и изучение гемокультуры идет по следующим этапам:
1) посев крови на желчный МПБ или среду Раппопорт.
2) изучение посева ( изменение цвета среды Раппопорт и газообразование, помутнение желчного МПБ; мазок, окрашенный по Граму; определение подвижности; если имеется рост чистой культуры Гр-палочек (по мазку) производят высев на скошенный МПА или среду Ресселя (минуя диф.-диагностические среды) для выделения чистой культуры.
3) идентификация чистой культуры проводиться по следующим тестам: морфология, биохимическая активность, антигенные свойства - РА с сальмонеллезными адсорбироваными сыворотками, определение фаготипа (возбудитель брюшного тифа имеет 78 фаготипов, возбудитель паратифа В – 11 фаготипов).
Выделение и изучение копрокультуры, дуоденокультуры, уринокультуры.
Этапы исследованиия:
1) Посев исследуемого материала на дифференциально – диагностические среды (висмут – сультит – агар, Эндо), или на среды обогащения (селинитовая, Мюллера).
2) Высев из сред обогащения на дифференциальные среды.
3) Изучение лактозонегативных колоний.
4) Пересев на скошенный МПА или среду Ресселя для получения чистой культуры.
Идентификация чистой культуры (аналогично идентификации гемокультуры)
3. Серологический метод
Антитела появляются к 4 дню заболевания, резко нарастают к 8 - 10, увеличиваются ко второй, третьей недели заболевания и достигают максимума к началу выздоровления. Обнаруживают антитела по реакции Видаля. Положительный результат – 1/200.
В последние годы получило широкое распространение РНГА для обнаружения в крови обследуемых Vi-антител. Для постановки испытуемую сыворотку разводят от 1/10 до 1/640, в качестве антигена использую эритроцитарный Vi-диагностикум (взвесь эритроцитов 1 группы крови человека, обработанных формалином и сенсибилизированных Vi-антигеном тифозной палочки). Учет реакции через 2 часа инкубирования при +37С. Диагностический титр – 1/40. Чаще всего используется для выявления бактерионосительства.
Лечение: Основу составляет адекватная антимикробная терапия (препараты выбора — ампициллин, аминогликозиды, фторхинолоны и др.). Брюшной тиф и паратифы Этиотропную терапию проводят в течение всего лихорадочного периода, а также 10 дней после его окончания. Патогенетическое лечение включает инфузионно-дезинтоксикационную терапию, экстракорпоральную детоксикацию и др.
Профилактика. Санитарно-гигиенические мероприятия. Вакцинация -  брюшнотифозная химическая и брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном. Для экстренной профилактики  - брюшнотифозный бактериофаг.
Химическая сорбированная брюшнотифозная вакцина. Состав: антиген, полученный методом расщепления бактерий тифа панкреатином, концентрированный этанолом на холоду и адсорбированный на гидроокиси алюминия. Назначение: профилактика у лиц в возрасте от 15 до 55 лет. Способ применения: подкожно в подлопаточную область по эпидпоказаниям.
Брюшнотифозный бактериофаг с кислотоустойчивым покрытием. Состав: стабилизированная субстанция фильтрата фаголиза брюшнотифозных бактерий, упакованная в таблетки с кислоторезистентной оболочкой. Назначение: для профилактики. Способ применения: через рот или в очаг брюшного тифа.
Бактериофаг сальмонеллёзный групп А, В, С, Д, Е, жидкий. Состав: фильтрат фаголизатов нескольких типов наиболее распространённых сальмонелл, относящихся к группам А, В, С, Д, Е. Назначение: для лечения и профилактики. Способ применения: через рот и в клизме.
81)Шигелллы. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Семейство -Enterobacteriaceae. Род: Shigella Вид: S.dysenteriae (серогруппа А), S.flexneri(сероогруппа В), S.boydii(сер-па С), S.sonnei(серогруппа D).
Морфология, физиология:
Грам» -»палочки. Шигеллы – палочки прямые с закругленными концами, не имеют жгутиков и не образуют капсул. Хемоорганотрофы, оксидаза-отрицательные, каталаза-положительные. Хорошо растут на простых питательных средах. Шигеллы на твердых средах зобразуют гладкие(S-) и шероховатые (R) колонии. S-колонии круглые,куполообразные,гладкие,полупрозрачные. R колонии неправильной формы,плоские,тусклые, с неровными краями. В жидких средах S-формы дают равномерное помутнение, R-формы образуют придонный осадок,среда-прозрачная.
Биохимическая активность выражена слабо: шигеллы способны ферментировать глюкозу и некоторые другие углеводы. Не ферментируют лактозу на агаре Клиглера. Образование индола вариабельно (его образуют более половины штаммов S.dysenteriae, S.flexneri, S.boydii).
Факторы патогенности. Антигенная структура.: Известные термостабильные и термолабильные Аг.
Имеют фимбрии общего типа. Плазмиды обеспечивают взаимодействие бактерий с клеточными мембранами, проникновение внутрь клеток. Эндотоксины действуют на слизистую оболочку желудка. Экзотоксины (цитотоксин — токсин Шига) разрушают эпителиальный покров кишечника.Нарушает синтез белка, всасывание Na+ и воды, вызывает гибель клеток.
Эпидемиология: Бактериальная дизентерия распространена повсеместно.
Шигеллы довольно устойчивы во внешней среде. В воде, почве, на пищевых продуктах способны оставаться жизнеспособными от 5 до 14 дней. При кипячении погибают мгновенно. Очень чувствительны к действию дез. Средств, содержащих хлор. Источником является - больной человек и бактерионосители. Период носительства 1-4нед.
Механизмы передачи- контактно-бытовой(через воду,пищу), фекально-оральный.
Патогенез поражений:
Важнейшее свойство — способность проникать в эпителий слизистой оболочки толстой кишки и размножаться в нём. Патогенность шигелл обусловливают факторы адгезии, инвазии и устойчивости к действию защитных механизмов, а также способность к токсинообразованию.
Клинические проявления: Инкубационные период длится 1-7суток. Стул частый, содержит большое количество слизи в крови. Характерно отделение последней порции, состоящей из слизи («ректальный плевок»). Болезни: Дизентирию, дисбактериоз. Выраженная интоксикация.
Лабораторная диагностика:
Материал — испражнения. Цель бактеиологического анализа — определение биохимических признаков и установление антигенной структуры возбудителя заболевания. Выполняют посев на диф-диагностические среды — Эндо и Плоскирева, или на жидкую селенитовую среду накопления с последующим пересевом на диф-диаг. Среды. Выделяют чистые культуры возбудителя и определяют видовую принадлежность(биохимические свойства). Об антигенной структуре судят по способности моно- и поливалентных антисывороток агглютинировать бактерии. Для быстрого распознавания шигелл можно провести посев на агар Клиглера; Для выявления Аг в крови,моче и испражнениях используют РПГА, РСК, ИФА и реакция коагглютинации. Для определения АТ используют РПГА и метод непрямой иммунофлюоресценции.
Профилактика и лечение:
Вакцинацию не проводят. Профилактика дизентерии включает комплексное проведение обще-санитарных мероприятий, соблюдение санитарно-гигиенических правил профилактики кишечных инфекций.
Лечение – антимикробная терапия (препараты-ампициллин, котримоксазол, норфлоксацин и др.). В большинстве случаев необходимы симптоматическая терапия, восполнение потерь жидкости и электролитов.
82)Сальмонеллы-возбудители пищевых токсикоинфекций. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Род: Samonella
Вид: S.typhimurium, S.infatis, S.anatum, S.enteriса
Морфология, культуральные свойства:
Грам «-» палочки,мелкие, вытянутой формы с закругленными концами. Спор, капсул нет. Большинство изолятов подвижно(перитрихи), но существуют и неподвижные. Хемоорганотровы, оксидаза-отрицательные, каталаза-положительные. Температурный оптимум 35-37градусов. На питательных средах образуют мелкие прозрачные S-колонии. На агаре Эндо они розоватые и прозрачные, на агаре Плоскирева — бесцветные и выглядят плотными и мутноватыми, на ВСА — чёрно-коричневые, с металлическим блеском, окружены чёрным «гало», среда окрашивается в чёрный цвет. Исключениями яв-ся — S. paratyphi и некоторые другие, образующие на ВСА коричнево-зеленоватые колонии. На бульоне S—формы дают равномерное помутнение среды,R-формы — осадок.
Биохимические признаки. Характерные свойства — образование сероводорода и отсутствие индолообразования.
Эпидемиология сальмонеллеза. природный резервуар большинства возбудителей — человек и различные животные (включая пресмыкающихся, земноводных, рыб и птиц). Основные пути передачи сальмонелл — водный и пищевой, реже контактный. Сальмонеллы долго сохраняют жизнеспособность во внешней среде. Наиболее устойчива S. Typhimurium. Кипячение убивает сальмонелл мгновенно, но присутствие в воде белковых веществ увеличивает термоустойчивость сальмонелл. При замораживании они могут оставаться жизнеспособными длительное время.Хлорирование снижает загрязнённость сальмонеллами в 6 раз.
Антигены сальмонелл. У сальмонелл выделяют О-, Н- и К-антигены. Их распознавание положено в основу диагностической антигенной схемы Кауфманна-Уайта.
Термостабильные О-антигены. По О-антигенам сальмонеллы разделены на 50 групп от А до Z.
Термолабильные Н-антигены . Состав Н-антигены обусловливает разделение сальмонелл на серовары. Выделяют антигены I(специфические) фазы и II (неспецифические) фазы.
Патогенез поражения сальмонеллами. Патогенность сальмонелл определяют факторы адгезии и колонизации, факторы инвазии и способность к токсинообразованию.
Проникновение сальмонелл в кровь. Адгезию к клеткам эпителия обеспечивают пили. Сальмонеллы не могут самостоятельно проникать в эпителиальные клетки ЖКТ, а попадают в них посредством эндоцитоза. Сальмонеллы проникают далее в базальную мембрану, а затем в кровоток.
Воспаление слизистой оболочки. Проникновение и размножение сальмонелл в базальной мембране вызывает развитие местной воспалительной реакции и приток жидкости в очаг поражения. Появление диареи обусловлено синтезом энтеротоксинов.
Термолабильный LT-токсин сальмонелл увеличивает содержание цАМФ.
Термостабильный ST-токсин сальмонелл напоминает цитотоксин шигелл и нарушает синтез белков и активирует образование простагландинов.
Генерализация процесса. В отличие от прочих сальмонелл, возбудители брюшного тифа и паратифов, проникнув в кровоток, способны выживать и размножаться в фагоцитах, а после гибели последних в большом количестве высвобождаться в кровь. Погибающие сальмонеллы высвобождают эндотоксин. Эндотоксин угнетает деятельность ЦНС, а также может вызвать миокардит, миокардиодистрофию и инфекционно-токсический шок. Бактериемия приводит к инфицированию различных органов (жёлчного пузыря, почек, печени, костного мозга и др.) и вторичной инвазии эпителия кишечника (особенно пёйеровых бляшек). Проникновение сальмонелл в желчный пузырь вызывает длительное носительство с выделением возбудителя.
Клиника сальмонеллезов.
Брюшной тиф и паратифы — острые инфекционные заболевания, сопровождающиеся бактериемией, поражением лимфоидной ткани кишечника, лихорадкой и общей интоксикацией.
Гастроэнтериты — группа полиэтиологичных острых инфекционных болезней человека, животных и птиц с фекально-оральным механизмом передачи. Основные возбудители сальмонеллезного гастроентерита — S. typhimurium, S. heidelberg, S. enteritica, S. derby. Большинство возбудителей выделяют у человека и различных животных (основной резервуар).
Клинически выделяют гастроинтестинальные и генерализованные формы сальмонеллеза. Выделяют острое, хроническое и транзиторное носительство сальмонелл.
Микробиологическая диагностика сальмонелл.
Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, кровь и мочу. При брюшном тифе также проводят забор проб из кожных высыпаний, желчи, содержимого двенадцатиперстной кишки, СМЖ и секционного материала.
Первоначально материал (особенно испражнения) помещают на среды обогащения (например, на селенитовый или 20% жёлчный бульон). Дифференциально-диагностические среды для высевов со сред обогащения бывают высокоселективными (например, висмут-сульфитный агар), среднеселективными (среда Плоскирева) и низкоселективными (среды Эндо и Левина). На висмут-сульфитном агаре возбудитель паратифа А образует зеленоватые колонии. Биохимические и культуральные свойства определяют на минимальном дифференцирующем ряду. На плотных средах возбудитель паратифа Б может давать феномен валообразования.
• Для дальнейшей работы отбирают сальмонеллы, ферментирующие глюкозу, не ферментирующие сахарозу и образующие H2S. Культуры пересевают со среды Олькеницкого на среду Хисса с маннитом, в 1 % пептонную воду для определения образования индола и полужидкий агар для определения подвижности.
• В последнее время широко используют дифференциально-селективные среды, наиболее часто — ксилозо-лизино-дезоксихолатный (XLD) агар и среду для сальмонелл и шигелл (SS-arap). На них сальмонеллы образуют колонии красного цвета с чёрным центром за счёт образования H2S
• Для диагностики брюшного тифа и паратифов наиболее часто применяют линейную РА.
• Для выявления AT в крови больных и реконвалесцентов применяют РПГА с поливалентными эритроцитарными диагностикумами.
Лечение. Основу составляет адекватная антимикробная терапия (препараты выбора — ампициллин, аминогликозиды, фторхинолоны и др.). У больных с гастроинтестинальной формой заболевания основной метод лечения — патогенетическая терапия, направленная на дезинтоксикацию и восстановление водно-электролитного баланса и гемодинамики. В первую очередь следует промыть желудок обычной питьевой водой или раствором соды.
Профилактика сальмонеллеза, брюшного тифа, паратифа. Профилактика основана на проведении ветеринарно-санитарных, санитарно-гигиенических и противоэпидемических мероприятий. Специфическую иммунопрофилактику не проводят; но для предупреждения брюшного тифа разработано три типа вакцин — убитая (эффективность 50-70%), живая аттенуированная (из штамма Ту 21а), проявляющая больший защитный эффект, но дающая побочные эффекты, и вакцина из Vi-Аг S. typhi
83)Лептоспиры. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Грам «-» спиралевидные микроорганизмы.
Род Leptospira; семейства Leptospiraceae. Его образуют тонкие спирохеты, что определило их название.Концы могут быть изогнуты. Спирали лептоспир плотно примыкают друг к другу, что придаёт им вид «нитки жемчуга* при микроскопии в тёмном поле. Движение лептоспир винтообразное; некоторое время могут быть неподвижными, напоминая верёвку или прихотливо изогнутые петли. Единственный вид, Leptospira interrogans.
Лептоспироз — острая природно-очаговая инфекция, характеризующаяся лихорадкой, симптомами общей интоксикации, поражением почек, печени, нервной системы и геморрагическим синдромом.
Эпидемиология лептоспирозов. Основной резервуар инфекции — более 80 видов диких и домашних животных. Источник заражения лептоспирами — загрязнённая вода. Человек заражается при проведении сельскохозяйственных и мелиоративных работ, а также при купании и использовании воды из загрязнённых водоёмов. Реже регистрируют случаи инфицирования при контактах с животными и через пищевые продукты, Лептоспиры чувствительны к действию солнечного света и высоких температур, высушивание вызывает немедленную гибель. Чувствительны к действию дезинфектантов.
Культуральные свойства. Лептоспиры — строгие аэробы, оптимальная температура 28-30 °С. Растут в жидких и полужидких средах, дополненных 10-15% кроличьей сыворотки. Рост наблюдают на 5-8-е сутки инкубирования в виде круглых колоний. Плохо окрашиваются по Граму и Романовскому-Гймзе (в розовый цвет); хорошо различимы при импрегнации серебром (окрашены в коричневый или чёрный цвет). Лептоспиры легко выявляются темнопольной микроскопией и несколько хуже — фазово-контрастной.
Патогенез лептоспирозов В организм человека лептоспиры проникают через слизистые оболочки носа, рта, пищевода, таз, а также через микротравмы кожных покровов. Возбудитель лептоспирозов проникает в кровь и циркулирует в ней. Поражения почек и печени характерны для всех леитоспирозов и особенно для болезни Васильева-Вейля.
Поражения печени обусловлены механическим повреждением гепатоцитов подвижными лептоспирами, а также токсическим действием эндотоксина, выделяющегося при гибели бактерий; могут приводить к развитию желтухи.
После выздоровления лептоспиры длительно сохраняются в почках и выделяются с мочой (до 40-го дня болезни). Менингеальные явления, часто наблюдаемые при лептоспирозах, связаны с непосредственным действием микроорганизмов и продуктов их распада на ЦНС.
Клинические проявления лептоспирозов Клиническая картина лептоспирозов вариабельна — от бессимптомных (субклинических) до тяжёлых желтушных форм. Инкубационный период длится 5-12 сут. Заболевание проявляется ознобом, резким повышением температуры тела до 39-40 °С. Характерны миалгии и головная боль, поражение конъюнктивы, гиперемия склер и лица. На 3-5-е сутки может появляться ярко-розовая сыпь (иногда кореподобная) на конечностях и туловище; продолжительность высыпаний вариабельна (до 10 сут). Летальность может достигать 35%.
Диагностика лептоспирозов. Включают бактериоскопические, бактериологические, серологические и биологические методы. Материал для исследований — кровь, при поражениях ЦНС — СМЖ, на более поздних сроках (10-12-е сутки) — центрифугат мочи.
Микроскопия лептоспир. Эффективна только в первые дни заболевания. Материал исследуют в тёмном поле либо микроскопируют мазки, окрашенные по Романовскому-Гймзе.
Выделение возбудителя лептоспирозов. Проводят в первые 2-4 сут посевом 8-10 мл венозной крови на 6-10 пробирок со средой Ферворта-Вольфа. Пробирки встряхивают для предупреждения сворачивания крови, заливают жидким парафином и инкубируют при температуре 28~30 °С. Через каждые 4-5 сут культуры исследуют, при отсутствии роста в течение 15-20 сут желательно сделать пересевы на свежую среду. Лептоспиры идентифицируют с помощью типовых агглютинирующих антисывороток.
Серологические исследования лептоспир. Исследуют парные сыворотки на 2-3-ю неделю болезни. Сывороточные AT определяют в реакции микроагглютинации и лизиса с сывороткой пациента и стандартным набором микроорганизмов. При положительном результате наблюдают образование клубков из лептоспир (специфичной считают реакцию с титром не ниже 1:400) или возникновение «зернистого» распада бактерий. Можно применять РСК или РПГА с эритроцитами, нагруженными лептоспирами.
Биологическая проба на лептоспиры. Хомячков или кроликов внутрибрюшинно заражают кровью или мочой больного. Через 48-72 ч проводят микроскопию брюшинного экссудата и крови. Кроме того, за животными ведут наблюдение: отмечают повышение температуры тела и появление желтухи. На 10-14-е сутки животные погибают; исследование позволяет обнаружить в тканях множественные геморрагические очаги, содержащие лептоспиры.
Лечение и профилактика лептоспирозов Препараты выбора при лечении лептоспирозов — антибиотики пенипиллинового ряда в сочетании с симптоматическими средствами. Больным предписан постельный режим и молочно-растительная диета.
Профилактика лептоспирозов включает проведение медико-санитарных, санитарно-ветеринарных и мелиоративных мероприятий.
Иммунопрофилактика лептоспирозов. В группах населения, наиболее подверженных заражению, проводят вакцинацию феноловой поливалентной вакциной, содержащей Аг серогрупп icterohaemorragiae, grippotyphosa и ротопа, трёхкратно, с недельными интервалами.
84) Возбудитель дифтерии. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Дифтерия — острое инфекционное заболевание, вызываемое Corynebacterium diphtheriae и её токсином. Дифтерийные палочки вызывают воспаление воздухоносных путей, реже кожных покровов. Токсин палочки Клебса-Лёффлера приводит к дегенерации периферических нервов, сердечной мышцы и других тканей. Эпидемиология дифтерии. Резервуар — человек (больной, реконвалесцент, бактерионоситель).Основной путь передачи — воздушно-капельный; также возможно заражение через предметы и пищевые продукты (обычно молоко). При комнатной температуре во влажной атмосфере палочка сохраняется долго.
Морфология. Дифтерийная палочка (палочка Леффлера) представлена тонкими, слегка изогнутыми или прямыми палочками. Часто они утолщены на концах и напоминают булаву. Для дифтерийной палочки характерен выраженный полиморфизм. На поверхности дифтерийной палочки имеются фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистой оболочки.
• Бактерии биовара дифтерии gravis — короткие неправильной формы, с небольшим количеством мета-хроматических гранул.
• Биовар дифтерии mitis образуют длинные изогнутые полиморфные палочки, содержащие много волютиновых зёрен (тельца Бабеша-Эрнста).
• Бактерии биовара дифтерии inmtermedius наиболее крупные, с бочковидными очертаниями; для них характерны поперечные перегородки, разделяющие клетку на несколько сегментов.
Corynebacterium diphtheriae хорошо окрашивается основными анилиновыми красителями грамположительна (окрашивание не всегда равномерно). Для окраски мазков обычно применяют щелочной метиленовый синий по Лёффлеру либо окрашивают их по Найссеру. Бактерии способны образовывать L- и фильтрующиеся формы. В мазках С. diphtheriae располагаются в виде «растопыренных пальцев», «иероглифов», «паркета», латинских букв V, Y, L и т.д.
Культуральные свойства. Дифтерийная палочка хорошо растёт при 36-37 °С. Питательные среды должны содержать аминокислоты, витамины, ионы металлов (Са2+, Mg2+ Fe2+ и др.). Наибольшее распространение получили среды с теллуритом. На таких средах дифтерийная палочка образует серовато-чёрные колонии в результате восстановления теллурита до металлического теллура, аккумулирующегося внутри бактерий. В жидких средах образуют помутнение и осадок.
Биохимическая активность. Отсутствие способности ферментировать сахарозу и разлагать мочевину — дифференцирующий признак, отличающий дифтерийную палочку от других коринебактерий. Другой дифференцирующий признак — способность разлагать цистин.
Дифтерийная палочка образует бактериоцины (корицины), обладающие узким спектром действия.
Токсинообразование.Corynebacterium diphtheriae продуцирует мощный экзотоксин — основной фактор патогенности. Нетоксигенные штаммы дифтерии не вызывают развитие заболевания.
Антигенная структура. У Corynebacterium diphtheriae выделяют О- и К- антигены ( Аг ).
Патогенез поражений. Входные ворота для возбудителя дифтерии — слизистые оболочки носоглотки, иногда глаз, половых органов (у женшин), повреждённые кожные покровы. Дифтерийная палочка колонизирует ткани в месте внедрения, вызывая развитие местного фибринозного воспаления. При этом тип воспаления зависит от строения слизистых оболочек. Например, в однослойном цилиндрическом эпителии дыхательных путей формируется крупозное воспаление, на многослойном плоском эпителии образуется жёлто-серая фибринозная плёнка, плотно спаянная с прилежащими тканями. Подобный тип поражений известен как дифтеритическое воспаление.
Клинические проявления. В зависимости от локализации дифтерии выделяют поражения ротоглотки (наиболее часто), дыхательных путей, носа и редкой локализации (глаза, наружные половые органы, кожа, раневые поверхности).
Микробиологическая диагностика дифтерии. Материалом для исследования служат дифтеритические плёнки, слизь из носоглотки или отделяемое из подозрительных поражений кожных покровов.
Забор материала на дифтерию проводят двумя стерильными тампонами: один используют для посева, с другого делают мазки и окрашивают их по Граму и Найссеру.
Бактериоскопия. Окраска по Граму не является специфичной, так как дифтерийные палочки сравнительно плохо воспринимают красители. Окраска по Найссеру позволяет выявить характерные зёрна Бабеша-Эрнста
Культивирование. Бактерии дифтерии выделяют посевом на элективные среды с теллуритом (например, Клауберга II). Для выделения чистой культуры дифтерии часть подозрительной колонии засевают на скошенный агар (или среду Ру), вторую часть — на твёрдую питательную среду для определения токсигенности и (не обжигая петли) проводят определение цистиназной активности (проба Пизу). При положительном результате наблюдают образование коричневого облачка вокруг линии укола.
Чистую культуру идентифицируют на средах Хисса, пользуясь укороченным пёстрым рядом (глюкоза, мальтоза, сахароза, мочевина).
Определение токсигенности. Проводят подкожным или внутрикожным заражением 0,5-1,0 мл бактериальной культуры морских свинок. Способность к образованию токсина можно определять заражением куриных эмбрионов или культур клеток с регистрацией последующего цитопатнческого эффекта.
Однако наибольшее распространение получил тест иммунодиффузии Илека. На среду с пониженным содержанием Fe2+ (для более интенсивного токсинообразования) проводят посев исследуемого изолята и эталонных токсигенного и нетоксигенного штаммов параллельными штрихами. На выросшие колонии накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанной дифтерийным антитоксином. Образующийся токсин и антитоксин диффундируют в агар и в месте встречи образуют линии преципитации, так называемые «усы» или стрелы.
Фаготипирование. Для дифференциальной диагностики возбудителей используют набор из 9 коринефагов. С его помощью можно типировать большинство токсигенных и нетоксигенных штаммов биовара gravis.
Лечение. Основу специфической терапии составляет противодифтерийная лошадиная сыворотка (дифтерийный антитоксин. Антитоксин вводят внутримышечно или внутривенно в дозах, соответствующих тяжести заболевания. Параллельно назначают эффективные антимикробные препараты (аминогликозиды, цефалоспорины), а также проводят симптоматическую терапию.
Профилактика. В настоящее время основу профилактики дифтерии составляют плановая или постэкспозиционная вакцинация. Для иммунопрофилактики дифтерии применяют дифтерийный анатоксин. Дифтерийный анатоксин — токсин, лишенный ядовитых свойств, но сохранивший иммуногенность. Очищенный и концентрированный препарат входит в состав комбинированных вакцин — АКДС, АДС, АДСМ.
• Наличие и содержание AT к дифтерийному токсину определяют в РПГА и РНГА.
• При выявлении заболевания в детских коллективах контактировавших с заболевшими детьми лиц следует обследовать бактериологически и изолировать от коллектива на 7 сут.
85. Возбудители туберкулеза.Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Туберкулез—хроническое заболевание человека, сопровождающееся поражением органов дыхания, лимфатических узлов, кишечника, костей и суставов, глаз, кожи, почек и мочевыводящих путей, половых органов, цнс. 3 вида: Mycobacterium tuberculosis — человеческий вид, Mycobacterium bovis — бычий вид, Mycobacterium africanum — промежуточный вид. Отдел Firmicutes, род Mycobacterium.
Родовой признак — кислото, спирто- и щелочеустойчивость.
Морфология, тинкториальные и культуральные свойства. Они имеют форму длинных, тонких (М.tuberculosis) или коротких, толстых (M.bovis), прямых или слегка изогнутых палочек с зернистой цитоплазмой; грамп+, неподвижны, спор не образуют, имеют микрокапсулу. Методом Циля-Нильсена окрашиваются в ярко-красный цвет. Содержат кислотонеустойчивые гранулы (зёрна Муха), располагающиеся в цитоплазме.
Туберкулёзные палочки могут расти как в аэробных, так и факультативно анаэробных условиях. Повышенное содержание СО2 (5-10%) способствует более быстрому росту.Для выращивания бактерий туберкулеза наиболее часто применяются глицериновые, картофельные с жёлчью, яичные, полусинтетические и синтетические среды. Наиболее оптимальна среда Лёвенштайна-Йёнсена. М.tuberculosis относятся к аэробам. На жидких питательных средах дают рост в виде сухой пленки кремового цвета. На плотных средах рост в виде кремового, сухого чешуйчатого налета(R-формы).
Ферментная активность. Высокая каталазная и пероксидазная активность.
Химический состав: Основными химическими компонентами микобактерии являются белки, углеводы и липиды.
Факторы патогенности: основные патогенные свойства обусловлены прямым или иммунологически опосредованным действием липидов и липидсодержащих структур.
Антигенная структура: В ходе заболевания к антигенам образуются антипротеиновые, антифосфатидные и антиполисахаридные антитела, свидетельствующие об активности процесса.
Резистентность. Наличие липидов - устойчивы к действию неблагоприятных факторов. Высушивание мало влияет. Погибают при кипячении.
Эпидемиология. Основной источник инфекции — человек, больной туберкулезом органов дыхания, выделяющий микробы в окружающую среду с мокротой. Основные пути передачи инфекции — воздушно-капельный и воздушно-пылевой.
Патогенез и клиника. В развитии болезни выделяют первичный, диссеминированный и вторичный туберкулез, который является результатом эндогенной реактивации старых очагов.
Различают 3 клинические формы: первичная туберкулезная интоксикация у детей и подростков, туберкулез органов дыхания, туберкулез других органов и систем. Основными симптомами легочного туберкулеза являются субфебрильная температура тела, кашель с мокротой, кровохарканье, одышка.
Иммунитет. Противотуберкулезный иммунитет нестерильный инфекционный.
Микробиологическая диагностика. Материалом для исследований служат мокрота, отделяемое свищей, моча, СМЖ, испражнения
Микроскопия возбудителя туберкулеза в патологическом материале. В мазках, окрашенных по Цилю-Нильсену, обнаруживают кислотоустойчивые палочки возбудителя туберкулеза. Наиболее результативна люминесцентная микросколия возбудителя туберкулеза. Материал обрабатывают аурамин-родамином и бактерии окрашиваются в бело-жёлтый цвет. Для выявления L-форм применяют AT, меченные флюорохромами.
Один из распространённых методов выделения возбудителя туберкулеза, метод Прайса. Материал помещают на предметное стекло, обрабатывают серной кислотой, отмывают физиологическим раствором и вносят в питательную среду, дополненную цитратной лизированной кровью. Стекло вынимают через 3-4 сут и окрашивают но Цилю-Нильсену. При микроскопии обнаруживают микроколонии микобактерии возбудителя туберкулеза. Вирулентные бактерии образуют змеевидные (рис. 22-2), а невирулентные — аморфные микроколонии. Культуры L-форм выделяют посевом в столбик полужидкой среды и инкубируют при 37 °С 1-2 мес. Рост проявляется в виде облачка помутнения с мелкими вкраплениями. Вирулентность выделенной культуры возбудителя туберкулеза определяют заражением лабораторных животных и по наличию корд-фактора. Последний легко идентифицируют по способности микобактерии связывать нейтральный красный и нильский голубой и удерживать их после добавления щелочи. Вирулентные штаммы возбудителя туберкулеза удерживают красители, авирулентные — нет.
Биологическая проба. Морским свинкам подкожно или внутрибрюшинно вводят 1 мл исследуемого материала (например, мокрота, отделяемое свищей и т.д.).
Серологические исследования. Для выявления Аг туберкулеза и AT к ним применяются РСК, РА, РПГА, агрегатагглютинации и др.
Лечение. По степени эффективности противотуберкулезные препараты делят на группы: группа А — изониазид, рифампицин; группа В — пиразинамид, стрептомицин, флоримицин; группа С – ПАСК, тиоацетозон. При наличии сопутствующей микрофлоры и множественной лекарственной устойчивости микобактерий применяют фторхинолоны и альдозон.
Профилактика. Включает соблюдение элементарных правил гигиены.
При положительной кожной пробе и отсутствии признаков активного туберкулеза назначают изониазид курсом до года.
Специфическую профилактику проводят путем введения живой вакцины — BCG(БЦЖ)- бацилла Жерена. Предварительно ставят пробу Манту для выявления туберкулиннегативных лиц, подлежащих ревакцинации.
86) Холерный вибрион. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Холера — острое инфекционное заболевание, характеризующееся профузной водянистой диареей, крайней слабостью, выраженной потерей жидкости и электролитов.
Природный резервуар холеры — больные и бактерионосители; основной механизм передачи холеры — фекально-оральный, редко контактный.
Факторы передачи холеры — пищевые продукты, вода, объекты окружающей среды. Определённую роль играют мухи, способные переносить возбудитель с испражнений на пищевые продукты.
Холерный вибрион мало устойчив во внешней среде и плохо переносит инсоляцию, высушивание и конкуренцию со стороны другой микрофлоры.
Морфология холеры. Клетки холерного вибриона имеют один полярный жгутик, снабжённый чехликом и продольным выростом, напоминающим ундулирующую мембрану. Подвижность бактерий холеры весьма выражена, и её наличие (выявляют методом висячей или раздавленной капли) — важный диагностический признак холеры. Для бактерий холеры характерен полиморфизм. Под действием пенициллина холерные вибрионы способны образовывать L-формы. Вибрионы холеры хорошо окрашиваются анилиновыми красителями; обычно используют водный фуксин Пфайффера и карболовый фуксин Шля.
Культуральные свойства. Холерный вибрион предпочитают аэробные условия и быстро погибает в анаэробных. Вибрион хорошо растёт на простых питательных средах с высоким рН. На твёрдых средах возбудитель холеры образует небольшие круглые дисковидные прозрачные S-колонии с ровными краями, голубоватые в проходящем свете.
На агаре с тиосульфатом, цитратом, солями жёлчных кислот и сахарозой (TCBS-arap) V. cholerae ферментирует последнюю и образует жёлтые колонии.
Холерный вибрион также образует неровные мутные R-колонии.
В жидких средах вибрион холеры вызывает помутнение и образование нежной голубоватой плёнки на поверхности, её края приподняты вдоль стенок пробирки.
Пептонная вода с добавлением 0,5-1% NaCl — наилучшая среда накопления для возбудителя холеры.
Биохимические свойства. Ферментация маннозы, сахарозы и арабинозы (так называемая триада Хёйберга) имеет диагностическое значение. Холерные вибрионы разлагают только маннозу и сахарозу и принадлежат к 1-й группе Хейберга. На основании биохимических и биологических различий холерные вибрионы разделяют на два биовара — классический (V. cholerae биовар asiaticae) и Эль-Тор (V. cholerae биовар eltor).
Антигены. У холерных вибрионов выделяют термостабильные О- и термолабильные Н-Аг.
Патогенез поражений. Способность холерного вибриона быстро колонизировать эпителий кишечника обусловливают жгутики, муциназа и нейраминидаза. Основной фактор патогенности — способность к токсинообразованию. Холерные вибрионы образуют эндо-и экзотоксины. Эндотоксин холеры — термостабильный ЛПС. Однако этот токсин холеры не играет существенной роли в развитии характерных проявлений. Экзотоксин холеры (холероген) — термолабильный белок; его образование кодируют как хромосомные, так и плазмидные гены.
Клинические проявления. Для клинически выраженных случаев холеры продолжительность инкубационного периода составляет в среднем 2-3 дня. Характерно выделение значительного количества (до 10л/сут) водянистых бесцветных испражнений («рисовый отвар»). Ведущие патогенетические факторы холеры — гиповолемия и выраженные нарушения электролитного баланса, вследствие чего развиваются артериальная гипотензия, сердечная недостаточность, нарушение сознания и гипотермия. Подобное состояние определяют как холерный алгид. При отсутствии лечения летальность больных в алгидной стадии холеры достигает 60%.
Микробиологическая диагностика. Цели исследований на холеру — выявление больных и вибрионосителей. Материал для исследований — испражнения, рвотные массы, жёлчь, фрагменты тонкой кишки и жёлчного пузыря, постельное и нательное бельё, вода, сточные воды, пищевые продукты, мухи и др.
Посев холеры проводят на жидкие среды обогащения, щелочной МПА, элективные и дифференциально-диагностические среды (например, TCBS-arap). Изучают рост на первой среде накопления и выполняют высев на щелочной агар и вторую среду накопления (что повышает высевае-мость возбудителя). Подозрительные колонии пересевают для выделения чистых культур.
Затем определяют морфологические, биохимические свойства и антигенную структуру холеры с помощью агглютинирующих О-, OR-, Инаба- и Огава-антисывороток. Важное диагностическое значение имеет типирование с помощью холерных диагностических бактериофагов.
• Для ускоренной диагностики холеры применяют иммунолюминесцептный и иммобилизационный методы и РПГА с диагностикумом. Нецелесообразно проводить бактериоскопию мазков и препаратов методом «висячей капли» из нативного материала.
• Для ускоренной биохимической идентификации возбудителя холеры предложен набор СИБ из 13 тестов.
• Определение AT в крови больных холерой носит вспомогательный характер. Их выявляют в РА, а также путём обнаружения вибриоцидных AT и антитоксинов.
Лечение. Восполняют потерю жидкости и электролитов, проводят антибактериальную терапию холеры препаратами тетрациклинового ряда. Альтернативные антибактериальные препараты — левомицетин, ко-тримоксазол и фуразолидон.
Профилактика холеры включает организацию санитарно-гигиенических мероприятий, предупреждающих занос заболевания; проведение санитарно-просветительной работы среди населения; раннее выявление больных и носителей; массовое профилактическое назначение тетрациклинов в районах эпидемической опасности.
Для специфической иммунопрофилактики холеры разработаны убитая вакцина из штаммов Огава и Инаба, холероген-анатоксин для подкожного введения и бивалентная вакцина из анатоксина и О-Аг Огава и Инаба.
87) Возбудитель урогенитального хламидиоза.Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Семейство Chlamydaceae, род Chlamydia. Виды- С.trachomatis, C.psittaci, C.pneumoniae.
Болезни, вызываемые хламидиями, называют хламидиозами. Заболевания, вызываемые C. Trachomatis u C.pneumoniae, — антропонозы.
Морфология: мелкие, грам «-» бактерии, шаровидной формы. Не образуют спор, нет жгутиков и капсулы. Клеточная стенка: 2-х слойная мембрана. Имеют гликолипиды. По Граму – красный цвет. Основной метод окраски – по Романовскому – Гимзе.
Патогенез поражений. Патогенез хламидиоза включает гибель заражённых клеток и развитие местных воспалительных реакций. Воспаление нередко приводит к формированию очагов некротического гранулематозного поражения с множественными кровоизлияниями. Тропность хламидий к тканям (воздухоносные пути, мочеполовой тракт, кожные покровы) определяет специфичность клинической картины. В зависимости от вида возбудитель может размножаться местно, вызывая локальные поражения, либо диссеминировать с кровотоком в различные ткани.
Антигены. У хламидии выделяют поверхностный родоспецифический антиген хламидий (ЛВС), главный белок наружной мембраны (включает детерминанты, распознаваемые видо-, типо- и серовароспецифически-ми нейтрализующими AT).
Культивирование:Можно размножать только в живых клетках.
Ферментативная активность: небольшая. Ферментируют пировиноградную кислоту, синтезируют липиды.
Факторы патогенности.Хламидии образуют эндотоксин. У некоторых хламидий обнаружен белок теплового шока.
Резистентность. Высокая чувствительность к различным факторам внешней среды. Устойчивы к низким температурам, высушиванию. Чувствительны к нагреванию.
Урогенитальный хламидиоз. Их вызывают С. trachomatis сероваров D-K. Осложнения урогенитального хламидиоза включают поражения мочеполовой сферы (эпидидимиты, орхиты, воспаления органов малого таза и др.) и экстрагенитальные поражения. Среди последних наиболее значим синдром Райтера, включающий последовательно появляющиеся уретрит, конъюнктивит (иридоциклит или увеит) и реактивный артрит. Урогенитальный хламидиоз новорождённых развиваются как следствие заражения при физиологических родах.
Могут быть бессимптомными (возбудитель локализуется в носоглотке) или вызывать клинически проявления.
Диагностика. Материал для исследований урогенитального хламидиоза — соскобы (но не мазки!) с конъюнктивы, стенок мочеиспускательного канала, шеечного канала (и его отделяемое), содержимое бубонов, мокрота и др. Материал микроскопируют, применяя фазово-контрастную технику либо окрашивая мазки по Романовскому-Гимзе. Более информативно определение Аг в РИФ с AT, меченными флюорохромами.
Методы экспресс-диагностики Аг: ИФА (выявляет липополисахаридные Аг), гибридизация ДНК и ПЦР. Выделение С. trachomatis обычно не проводят, однако исследуемым материалом можно заражать культуры клеток человека или куриные эмбрионы. Выявление AT к возбудителю урогенитального хламидиоза в сыворотке крови проводят в РСК. Большей чувствительностью обладает РНГА; высокие титры AT обычно совпадают с яркими клиническими проявлениями, средние и низкие титры наблюдают на фоне проведения адекватной терапии. Особую ценность представляет ИФА, выявляющий сывороточные IgM и IgG, и позволяющий тем самым распознавать урогенитальный хламидиоз на начальных стадиях либо на стадии обострения.
Лечение. Основа лечения урогенитального хламидиоза — курс антибиотикотерапии. Препараты выбора — тетрациклины и макролиды.
Профилактика. Для предупреждения хламидийных уретритов и вагинитов следует соблюдать правила профилактики заболеваний, передающихся половым путём. Для профилактики урогенитального хламидиоза у новорождённых следует выявлять и адекватно лечить беременных. При развитии «конъюнктивита телец включений» ребёнка изолируют и назначают эритромицин внутрь в течение 10-14 сут. Закапывание сульфацил натрия и назначение глазных мазей с эритромицином или тетрациклином обычно малоэффективно.
88) Возбудитель сибирской язвы. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
7) Сибирская язва
Род: Bacillus Вид: B.antracis
Морфология. Грам+палочка. Образуют споры. В препаратах распологаются цепочками, выглядят обрубленными на концах. Цепи похожи на бамбуковую трость. Отсутствие подвижности — абсолютный дифференцирующий признак сибиреязвенной палочки, отличающий её от других бацилл.
Для защиты от действия факторов резистентности возбудитель сибирской язвы образует капсулы.
Аэроб или факультативный анаэроб. Другой характерный признак возбудителя сибирской язвы — высокая чувствительность сибиреязвенной палочки к пенициллину.
Эпидемиология. Сибирская язва — типичный зооноз. Возбудитель проникает через микротравмы полости рта или стенку кишечника. Больные животные выделяют сибирскую язву с мочой и испражнениями. Человек заражается при контакте с инфицированным материалом (уход за больными животными, переработка шерсти, шкур, щетины, кож и костей) либо при употреблении в пищу мяса больных животных. Наиболее характерно проникновение спор В. anthracis через дыхательный и желудочно-кишечный тракт, а также через порезы и ссадины кожи. В отличие от спор, палочки сибирской язвы неустойчивы во внешней среде и быстро погибают при высыхании.
Культуральные свойства. Вacillus anthracis хорошо растёт на обычных питательных средах.
В жидких средах растёт в виде ватных хлопьев, не вызывая помутнения среды. При посеве уколом в желатину даёт характерный рост в виде «перевёрнутой ёлочки».
На твёрдых средах сибирская язва образует шероховатые, неровные, серовато-белые, волокнистые R-колонии диаметром 2-3 мм. При малом увеличении колонии напоминают «голову Медузы» или «львиную гриву».
В аэробных условияхпалочка сибирской язвы образует центрально расположенные споры. Споры отличает высокая устойчивость к внешним воздействиям
Биохимические свойства. Сибирская язва образует кислоту без газа на средах с глюкозой, фруктозой, мальтозой и декстрином. Гидролизует крахмал; образует ацетоин и лецитиназу.
Антигенная структура. Выделяют три группы основных антигена ( Аг ) bacillus anthracis, две из них (капсульные Аг и токсин) кодируются плазмидами. Отсутствие одной или обеих групп делает бактерии авирулентными.
Токсин состоит из трёх термолабильных компонентов и включает протективный Аг; летальный фактор и отёчный фактор. По отдельности компоненты не способны проявлять токсическое действие.
Патогенность: рямо зависит от капсуло- и токсинообразования; штаммы, непроявляющие подобные свойства, обычно авирулентны. Капсула защищает возбудителя сибирской язвы от действия вне- и внутриклеточных продуктов фагоцитов и препятствует поглощению бактерий. Токсин возбудителя сибирской язвы опосредует проявление признаков и симптомов сибирской язвы. Аккумуляция токсина сибирской язвы в тканях и его воздействие на ЦНС приводят к летальному исходу на фоне лёгочной недостаточности и гипоксии.
Клинические проявления. Продолжительность инкубационного периода сибирской язвы составляет 2-6 сут. Клинические проявления сибирской язвы зависят от пути заражения. Выделяют кожную, лёгочную и желудочно-кишечную формы сибирской язвы.
Микробиологическая диагностика. Для микробиологической диагностики сибирской язвы берут содержимое пустулы, гнойное отделяемое из карбункула, кровь, мочу, мокроту, испражнения и рвотные массы. При патологоанатомическом исследовании забирают кусочки органов или целые органы.
Выделение возбудителя. Проводят окраску материала по Граму и посев на обычные питательные среды. Затем определяют подвижность микроорганизмов из выросших колоний, изучают их биохимические и культуральные свойства.
Серологические исследования проводят для распознавания больных и реконвалесцентов. Возбудитель можно выявлять AT, меченными флюоресцеинами (особенно в смешанных культурах), диффузией в геле, в РСК, РИГА и ИФА.
Кожные пробы применяют для ретроспективной диагностики при эпидемиологических исследованиях. Проводят внутрикожное введение 0,1 мл бактериального аллергена (антраксина).
Реакция термопреципитации по Асколи позволяет идентифицировать возбудителей сибирской язвы при отрицательных результатах бактериологических исследований.
Фаготипирование. Для дифференциальной диагностики предложены высокоспецифические литические сибиреязвенные бактериофаги «ВА-9» и «Саратов».
Биологическая проба. Заражение лабораторных животных проводят одномоментно с посевом на питательные среды. Материал можно вводить белым мышам, кроликам и морским свинкам. У павших животных исследуют печень, селезёнку, лимфатические узлы, почки, кровь из полостей сердца и места введения заразного материала. Затем проводят посев исследуемого материала на питательные среды.
Лечение. Основа антибактериальной терапии сибирской язвы — пенициллин (при непереносимости — тетрациклин); внутривенные вливания больших доз антибиотиков дают хороший терапевтический эффект. Профилактика. Иммунопрофилактика. Для профилактики зоонозов животных иммунизируют живой вакциной СТИ, приготовленной из некапсулированного штамма В. anthracis, или протективным Аг, преципитированным гидроокисью алюминия.
Ветеринарно-санитарные меры профилактики сибирской язвы. • Изоляция больных и подозрительных животных • Сжигание трупов погибших животных, заражённых объектов (подстилка, навоз) и обеззараживание мест стоянок больных животных и водопоев.
Санитарный надзор.. Важен санитарный надзор за предприятиями, занятыми переработкой животного сырья. Всё поступающее сырьё проверяют в реакции термопреципитации по Асколи.
89) Возбудитель столбняка. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Столбняк — тяжелое заболевание, опосредованное нейротоксическим действием бактериального экзотоксина. Источник инфекции — почва. Заражение человека — следствие бытовых и производственных травм.
Грам+палочки с закругленными концами. Подвижны. В мазках располагаются одиночно или цепочками. Образуют споры, круглой формы, расположенные терминально,поэтому напоминают «теннисные ракетки».
Культуральные свойства. Clostridium tetani — строгий анаэроб, отличается высокой чувствительностью к кислороду. На МПА и желатине возбудитель столбняка растёт медленно и образует тонкие прозрачные колонии двух типов: гладкие, прозрачные S-колонии и серовато-жёлтые, шероховатые R-колонии.
S-колонии столбняка образуют отростки, придающие им паукообразную форму. Позднее отростки сливаются, образуя «сеточку» на поверхности среды. При посеве столбиком в полужидкий агар через 24-48 ч S-колонии столбняка имеют вид пушинок с плотным коричневым центром; R-колонии столбняка имеют вид чечевичек. Антигенная структура столбняка У С. tetani выявляют О- и Н-Аг. Все серовары столбняка продуцируют идентичные по своим антигенным свойствам тетаноспазмин и тетанолизин.
Биохимические свойства. Большинство штаммов инертно к углеводам. С. tetani проявляет слабые протеолитические свойства и медленно расщепляет белки и пептоны до аминокислот. Бактерии столбняка образуют желатиназу и рениноподобный фермент, опосредующий появление затемнённых зон вокруг колоний С. tetani на молочном агаре.
Патогенез поражений. Основные факторы патогенности — тетаноспазмин и тетанолизин.
Тетаноспазмин — полипептид с дистантным механизмом действия, так как бактерии редко покидают пределы первичного очага инфицирования. Токсин фиксируется на поверхности отростков нервных клеток, проникает в них (за счёт лигандопосредованного эндоцитоза) и посредством ретроградного аксонного транспорта попадает в ЦНС.
• Механизм действия тетаноспазмина связан с подавлением высвобождения тормозных нейромедиаторов в синапсах.
• Первоначально тетаноспазмин действует на периферические нервы, вызывая местные тетанические сокращения мышц.
Тетанолизин (тетаногемолизин) проявляет гемолитическое, кардиотоксическое и летальное действие. В патогенезе заболевания играет менее важную роль.
Клинические проявления столбняка. Ведущие проявления — судорожный синдром, включающий болезненные сокращения мышц (тетанус) и длительное напряжение мышц. К характерным признакам столбняка относят опистотонус — тетанический спазм, когда позвоночник и конечности согнуты, больной лежит на спине и опирается на затылок и пятки.
Микробиологическая диагностика. Бактерии столбняка обычно обнаруживают в месте проникновения в организм больного. В некоторых случаях исследуют слизистое отделяемое из носа, бронхов, глотки, налёт с миндалин, а также выделения из влагалища и матки (при послеродовом столбняке или аборте). При бактериологическом исследовании трупов для анализа забирают кровь и кусочки печени и селезёнки.
Выделение возбудителя.Исследованию подлежит материал от больного или трупа, перевязочный и шовный хирургический материал, а также почва, пыль и воздух.
Биологическая проба. вместе с проведением бактериологического анализа проводят обнаружение столбнячного анатоксина в биологической пробе на мышах. Для этого материал измельчают, добавляют двойной объём физиологического раствора, инкубируют в течение часа при комнатной температуре, фильтруют; часть фильтрата смешивают с противостолбнячной сывороткой из расчёта 0,5 мл сыворотки на 1 мл экстракта и инкубируют в течение 40 мин. Затем одной группе животных - вводят экстракт без предварительной инкубации с сывороткой, а другой группе — проинкубированную смесь; при наличии С. tetani у животных первой группы развиваются симптомы столбняка.
Лечение столбняка. Для специфической терапии столбняка используют иммуноглобулин противостолбнячный человека либо противостолбнячную лошадиную очищенную сыворотку,перед введением проводят десенсибилизацию (внутримышечно или внутривенно). Введение начинают при появлении первых симптомов и продолжают до исчезновения судорог. Одновременно проводят антибиотикотерапию (пенициллин, цефласпорин).
Профилактика. Иммунопрофилактика: Проводят плановые и экстренные мероприятия.
Плановая иммунизация. Начинают с 3-5-месячного возраста столбнячным анатоксином, чаще всего в комбинации с другими микробными Аг — в составе АКДС-вакцины (содержит столбнячный и дифтерийный анатоксины и коклюшные палочки).
Экстренная иммунизация . Проводят при травмах, ранениях. В зависимости от предшествующей вакцинации проводится либо пассивная иммунизация (однократное введение 3000 ME антитоксической сыворотки) либо активно-пассивная иммунизация (вводят столбнячный анатоксин и через 30 мин в другое место вводят 3000 ME антисыворотки или 950 ME иммуноглобулина).
90)Возбудители газовой анаэробной инфекции.Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Газовая гангрена — раневая инфекция, характеризующаяся крепитацией окружающих тканей из-за пузырьков газа, некрозом тканей в результате уменьшения или полного отсутствия кровоснабжения и общими септическими проявлениями.
Род Clostridium. Вид C. perfringens, C. novyi, C. Septicum. C.histolyticum, C. Sordellii, C. Fallax, C. Bifermentans.
Морфология:
Грам+палочки, крупные. Неподвижные. In vivo образуют капсулы. Бактерии возбудителя газовой гангрены хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. Споры крупные, овальные, расположены центрально (у С. perfringens типа А — также субтерминально). Спорообразование обычно происходит в почве и кишечнике организма-хозяина.
Свойства. По способности образовывать четыре главных токсина (а-, р-, e- и i-) микроорганизмы Clostridium perfringens разделяют на шесть сероваров — А, В, С, D, Е и F. Основной возбудитель заболеваний человека — бактерии типа А.
Эпидемиология. бактерии выделяют из воды, почвы и сточных вод. Также они колонизируют кишечник животных и человека (выделяют у 25-35% здоровых лиц). У человека возбудитель газовой гангрены вызывает два типа поражений — газовую гангрену и пищевые токсикоинфекции.
Культуральные свойства. На плотных средах бактерии возбудителя газовой гангрены образуют S- и R-колонии. На агаре Цейсслера через 12-18 ч образуют гладкие сероватые колонии с ровными краями и плотным возвышением в центре. Колонии окружены зоной гемолиза.
На желточном агаре бактерии возбудителя газовой гангрены образуют колонии, окружённые зоной перламутрового преципитата (фосфорилхолин).
На средах, содержащих глюкозу, рост происходит очень бурно с образованием Н, и СО. Первые признаки роста на среде Китта-Тароцци могут проявляться уже через 1—2 ч и проявляются помутнением и появлением пузырьков газа из-под кусочков печени при встряхивании.
Антигенная структура. Выделяют 6 сероваров (A-F) clostridium perfringens, различающихся по антигенным свойствам продуцируемых экзотоксинов.
Биохимические свойства. Бактерии возбудителя газовой гангрены ферментируют углеводы с образованием кислоты и газа. От прочих клостридий clostridium perfringens отличает способность восстанавливать нитраты, расщеплять лактозу, образовывать лецитиназу. Протеолитическая активность слабая. Интенсивно створаживают молоко с образованием крупноячеистого губчатого сгустка, напоминающего пену на волнах. Это феномен известен как «штормовая реакция».
Патогенность. Clostridium perfringens типов А, С и D вызывают газовую гангрену, некротический энтерит и пищевые токсикоинфекции у человека и животных. Бактерии типов В, С, D и Е вызывают аналогичные заболевания только у животных.
Токсины. Clostridium perfringens образуют как минимум 12 идентифицированных токсинов (ферментов) и энтеротоксин.
Клинические проявления. Развивается при попадании С. perfringens на раневые поверхности, где бактерии активно размножаются в условиях пониженного содержания кислорода. Микроорганизмы, а чаще их споры могут быть занесены в рану из внешней среды, а также с кожи или из ЖКТ пациента. Для поражений характерны некроз тканей и образование газа с гнилостным запахом.
Диагностика газовой гангрены. Материалом для исследований служат биоптаты поражённых тканей (включая участки, примыкающие к очагам некроза, и отёчную жидкость), перевязочный и шовный материал, одежда, образцы почвы; при пищевых токсикоинфекциях — испражнения и продукты. Основу диагностических мероприятий составляют выделение и идентификация возбудителей и их токсинов. Микроскопия материала позволяет обнаружить крупные грамположительные палочки.
Выделение и идентификация возбудителей. Для выделения используют жидкие и плотные среды. Идентификацию микроорганизма осуществляют набором стандартных тестов (подвижность, серологические реакции и др.).
Жидкие среды (обычно Китта-Тароцци). Используют для накопления возбудителей газовой гангрены. С жидких сред проводят пересев на плотные среды.
Плотные среды. Наибольшее распространение нашли агар Цейсслера, КА с бензидином и среда Уйлсона-Блэра.
Токсинообразование. Для обнаружения токсинов проводят заражение белых мышей вытяжкой из исследуемого материала, фильтратами бульонных культур или кровью больных. Идентификацию токсинов проводят в РН со специфическими антитоксическими антисыворотками.
Профилактика анаэробной инфекции (газовой гангрены) заключается в своевременной и полноценной первичной хирургической обработке ран. При этом должны неукоснительно соблюдаться принципы первичной хирургической обработки: полное удаление всех инородных тел, размозженных и нежизнеспособных тканей, рассечение или дренирование глубоких карманов.
Лечение анаэробной инфекции оперативное: рассечение и иссечение пораженных тканей, часто ампутация. Во время операции и в послеоперационном периоде проводят интенсивную инфузионную терапию с введением больших доз антибиотиков, чаще из группы пенициллина( + канамицин и сульфаниламиды).
91. Возбудитель ботулизма- тяжелая, часто фатально заканчивающаяся пищевая токсикоинфекция.
Таксономия: отдел firmicutes, род Clostridium, вид C.botulinum.
Морфология: подвижная грам+ палочка с закругленными концами, имеются перитрихи, хорошо окрашивается анилиновыми красителями, капсулу не образует, при неблагоприятных условиях образует эндоспоры, располагающиеся терминально или субтерминально. В мазках одиночно или в виде коротких цепочек располагаются.
Культуральные свойства: строгий анаэроб. На кровяномагаре с глюкозой палочки образуют очень мелкие колонии сероватые или желтоватые, окруженные с зонами гемолиза. На печеночномагаре образуют звездчатые колонии, на желатине-сероватые с зоной гемолиза. Хорошо растут на жидких средах(Китта-Тароцци), вызывая помутнение среды и газообразование, иногда запах прогорклого масла, но этот признак не постоянен.
Антигенные свойства:H-,O-антигены. Выделяют 7 сероваров:A,B,C,D,E,F,G. Наиболее распространены A,B,E.
Биохимические свойства: выделяют 4 группы по активности:
I группа: проявляют протеолитические свойства, гидролизуют желатину, ферментируют мальтозу и лактозу, проявляют липазную активность на яичном агаре.
II группа: проявляют сахаролитическую активность но лишены протеолитической.
III группа: липазная активность и гидролизуют желатину.
IVгруппа: гидролизуют желатину, не проявляя сахаролитической активности.
Факторы патогенности: главный фактор патогенности- экзотоксин. Смертельная доза 0,3мкг.Оказывает нейротоксическое, гемагглютинирующее действие.
Резистентность: высокая устойчивость к высоким температурам, кислой реакции, повышенной концетрации поваренной соли, замораживанию, пищевым ферментам.
Эпидемиология: распространена инфекция повсеместно, но больше всего в странах с умеренным и теплым климатом. Источник инфекции-почва и животные. Путь заражения- алиментарный.
Патогенез:попадает в пищевой тракт, всасывается токсин через стенку кишечника в кровь, происходит длительная токсинемия. Токсин связывается с нервными клетками и блокирует передачу импульсов через нервно-мышечные синапсы. В результате развивается паралич гортани, глотки, дыхательных мышц, нарушение дыхания, зрения, как следствие.
Иммунитет не формируется.
Диагностика:материал для исследования-промывные воды желудка, кровь, испражения, рвотные массы, остатки пищи.
Биологическая проба на мышах. Заражают 5 мышей. Проводят реакцию нейтрализации, выживает только то животное, которое получило антитоксическую сыворотку. Идентификация- РПГА с антительнымдиагностикумом.
Испражнения засевают на питательные среды- кровяной агар при температуре 25-35 градусов. Среда для накопления-Китта-Тароцци. Идентификация- среды Гисса. Серологических реакций не проводят.
Лечение: соответствующая антитоксическая сыворотка. Для установления типа-поливалентная лошадиная сыворотка. Вводят ежедневно до появления клинического эффекта. После выявления типа вводят сыворотку против данного типа.
Профилактика:специфическая профилактика-полианатоксин. Соблюдение санитарно-гигиенических правил, не употреблять консервы домашнего приготовления и вздувшиеся консервы.
92. возбудитель коклюша-острое инфекционное заболевание, сопровождающееся воспалением гортани, трахеи и бронхов.
Таксономия:отдел Gracilicutes, семейство Brucellaceae, род Bordetella, виды B,pertussis, B.parapertussis.
Морфология:мелкая овоидная палочка, неподвижна, образует капсулу, плохо окрашивается по Граму. Строгий аэроб, каталаза+, оксидазо+. Углеводы практически не ферментирует, требовательна к питательным средам.
Культуральные свойства: культивируют на казеиново-угольном агаре(КУА), так как росту препятствует накопление в среде жирные кислоты-вносят адсорбенты-активированный уголь, крахмал. Колонии блестящие, серовато-кремового цвета при 35-36 гр.
На жидких средах –помутнение, пленка. При изменении состава питательно среды или условий, бордетеллы быстро меняют тип роста и антигенные свойства! От S-колоний переходят в R- колонии.
Антигенная структура:O-,K-антигены, 16 агглютиногенов.
Резистентность:мало устойчив во внешней среде, чувствителен к инсоляции, при кипячении-мгновенно погибают, очень чевств.к действию дезинф.в-тв.
Эпидемиология: патогенна только для человека, передается воздушно-капельным, у детей-контактно-бытовым путем. Болеют в основном дети от 1-10 лет.
Факторы патогенности: микроворсинки, экзотоксин, эндотоксин, аденилатциклаза, фимбрии, цитотоксин.
Клиника: гриппоподобные симптомы, кашель слабый но упорный. Затем кашель усиливается до рвоты, судорог и остановки дыхания. После приступа возникает шум при дыхании.
Диагностика: материал-слизь из зева, мокрота. Применяют метод кашлевых пластинок( подносят чашку со средой ко рту больного во время кашля, избегая контаминации с рвотными массами и мокротой). Материал высевают на твердые среды, соблюдая температурный режим 10-37 гр. Среди выросших колоний отбирают подозрительные и пересевают на отд.чашки.
Идентификация по морфологическим и культуральным признакам, также РА для выявления АТ со спецефическими видовыми сыворотками или парной сывороткой.
Лечение: ампициллин, аминогликозиды, эритромицин, иммуноглобулин.
Профилактика: изоляция, карантин до 14 дней.
Спецефическая- введение вакцины из убитых бактерий в составе АКДС вакцины. Вакцинация в 3, 4, 5, 18 месяцев и при поступлении в школу.
93. возбудитель чумы-инфекционное заболевание, характеризующееся сильной интоксикацией, лихорадкой, поражением лимфатических узлов, с образованием бубонов.
Таксономия: род Yersinia, вид Y.pestis/
Морфология:грам -, овоидная палочка, неподвижная, спор не образует,имеется капсула, окрашивается биполярно, характерно обособленное ядро. В мазках клинического материала-цепочками располагается, из бульонных культур-беспорядочно.
Культуральные свойства: при 30 гр.становится подвижной. Не требовательна к питательным средам, на бульоне через 48 часов-нежная пленка на пов-ти со спускающимися вниз нитями и хлопьевидный осадок. Хорошо растут в желатине, не вызывая разжижения. На плотных средах при 37гр.-сероватые слизистые S-,R- колонии. Стадии роста: через 10-12ч-бесцветные колонии с неровными краями «битое стекло», через 18-24ч-«кружевные платочки», 40-48ч-«ромашка».
Антигенная структура: О-антиген(липидный и белковый), К-антиген(полисахаридный).
Резистентность:в мокроте до 10 суток, на одежде-неск.недель, в трупах при низких температурах-неопределенно долгое время. Быстро погибают при высоких температурах, высыхании и инсоляции, чувств.кдезинфектантам.
Передача-крысы, трансмиссионно, воздушно-капельным, алиментарно, контактно.
Патогенез:механизм состоит из 3 стадий:
Лимфогенный перенос
Распространение бактерий кровотоком
Распространение микробов до забарьерных клеточных систем(генерализованная септицемия)
Клиника: налет на языке, галлюцинации, болезненный бубон в подмышечной и паховой области, развитие септицемии.
Диагностика: материал-мокрота, СМЖ, фекалии,кровь, отделяемое бубонов. Засевают на тв.пит.среды и жидкие для накопления. Делают мазки из изолированных колоний. РИФ с меченными АТ. По способности ферментировать глицерин и углеводы различают биовары.
Антигенная идентификация в РА,РНГА,РП.
Ускоренная диагностика-чумный бактериофаг.
Биологическая проба-заражение морских свинок подкожно, внутрибрюшинно. После смерти-РНГА, ИФА с использованием АТ, меченыхфлюоресценами.
Серология: РНГА,ИФА
Аллергическая проба с пестином(белковый аллерген из культур воздудителя)
Лечение:стрептомицин, тетрациклин, антисыворотки.
Профилактика: живая аттенуированная вакцина из штамаEV. Невосприимчивость сохраняется до года.
Дератизация, дезинсекция, дезифнекция.
94. возбудитель трахомы-инфекционный, эндемический кератоконъюктивит, начинающийся с острого воспаления конъюктивы и роговицы и приводящий к формированию грубых рубцов и слепоте.
Таксономия: отдел Gracilicutes, семейство Chlamydiaceae, род Chlamydia, вид C.trachomatis.
Морфология:грам-, кокки, окрашиваются в синий цвет по Романовскому-Гимзе. Жизненный цикл состоит из двух основных форм:
-элементарное тельце-внеклеточная структура с трехслойной клеточной стенкой. Инфекционные единицы, заражающие клетки. По р-г окрашиваются в пурпурный цвет.
-ретикулярное тельце-репродукционная внутриклеточная форма. Первоначально-вегетативная форма, которая превращается в ретикулярное, которое начинает делиться бинарно, образуя тельца включений. Трахома образует одно большое тельце.
Резистентность: лабильны к действию высоких температур, но длительно сохраняются при низких температурах.чувствительны к действию антисептиков и дезинфектантов. При неблагоприятных условиях образуют L-формы.
Факторы патогенности: компоненты поверхности клетки, белок теплового шока, экзо-,эндотоксины.
Антигенная структура: поверхностный родоспецефический АГ(ЛПС), главный белок наружной мембраны.
Патогенез: гибель зараженных клеток, местные воспалительные реакции, формирование гранулематозного поражения со множественными кровоизлияниями.
Клиника:заболевание протекает хронически. Выделяют 4 стадии:1-начало воспалительного процесса, 2-начало регрессивных изменений, 3.4-начало рубцевания роговицы.
Диагностика: соскобы с конъюктивы, микроскопия фазово-контрастная, Аг в РИФ с АТ с меченымифлюорохромами. Заражение куриных эмбрионов, выявление АТ-в РСК. ИФА. Большей чквствительностью обладает РНГА.
Лечение:с трудом поддается лекарственной терапии-сульфаниламиды, тетрациклины внутрь и местно.
95. возбудитель сифилиса-хроническое венерическое заболевание, затрагивающее все органы и ткани.
Таксономия: отдел Gracilicutes, семейство Spirochaetales, род Treponema, вид T.pallidum
Морфология: туго закрученные в правильные и неправильные спирали подвижные грам – бактерии,воспринимающие плохо аналиновые красители. Способны образовывать L-формы. По романовскому-гимезе-розовый цвет. Основной способ размножение-поперечное деление.
Культуральные свойства:требовательна к питательным средам, плохо растет на искусственных питательных средах, растет на печеночных средах. Факультативный анаэроб.
Биохимические свойства: некоторые штамы разлагают глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу и маннит с образованием газов, образуют индол и сероводород.
Антигенная структура:белковые, полисахаридные и липидные АГ.
Резистентность: малоустойчивы во внеш.среде и гибнет при высыхании, на холоде сохр.до 50 суток. Чувств.к солнечным лучам, дезинфецирующим средствам.
Факторы патогенности:адгезины, липопротеины, протеины.
Заражение происходит контактно-половым путем, трансплацентарно. Не способны проникать через плаценту в первые 4 месяца беременности.
Клиника:Инкуб.период от 10-90 дней. Выделяют 4 стадии: 1-тв.шанкр-безболезненная язва, 2-с 6-7 недели-розовато-красные папулезные высыпания на коже(латентный период). При отсутствии лечения переходит в 3 стадию- на костях и нервной системе формируются гранулемы(гуммы). Склонны к распаду, рубцеваннию. Нейросифилис-тяжелое нарушение ЦНС, приводящее к параличу.
Диагностика: материал- отделяемое шанкра, кровь, СМЖ. Проводят темнопольную и фазовую микроскопию, серебрение по Морозову(черные спирали). Ранняя диагностика(1,2 стадии) РНИФ с адсорбированной сывороткой. Серология: спецефические тесты-микроагглютинация, иммобилизация бледной спирохеты. Неспецефические:без участия трепонем- РСК предложенная Вассерманом-специализированная флоккуляционная проба на предметных стеклах с использованием кардиолипин-лецитин-холестеринового АГ.\
Лечение:висмутсодержащие препараты и антибиотики пенициллинового ряда.
96. возбудитель сыпного тифа-острая инфекция, сопровождающаяся лихорадкой, сильной интоксикацией и поражением капилляров с появлением популезной сыпью.
Таксономия: отдел Gracilicutes, семейство Rickettsiaceae, род Rickettsia, вид R.prowazekii.
Морфология: мелкие палочки, спор и жгутиков нет, имеются жгутикоподобные образования-«актиновые хвосты». Имеют фимбрии. Грам -, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями.
Культуральные свойства: облигатные внутриклеточные паразиты, требовательны к пит.средам, культивируются в желточном мешке куриного эмбриона. Размножаются бинарным делением.
Резистентность:малоустойчивы во внешней среде, чувствительны к действию высоких температур и дезинфектантов.
Антигенная структура: ЛПС клеточной стенки, проявляющие свойства эндотоксинов.
Факторы патогенности:специфический набор жирных кислот, фосфолипидные фракции, липополисахариды, аллергенные субстанции.
Патогенез: размножается в эндотелии кровеносных сосудов, инкуб период 7-14 дней.
Клиника: лихорадка, сильная головная боль, сыпь. Гиперемия кожи лица, поражения ЦНС и сердечно-сосудистой системы. В составе сыпнотифозных гранулем риккетсии могут десятилетиями сохраняться в организме реконвалесцентов, а при нарушении иммунитета-рецидивы. Иммунитет стойкий, невосприимчивый.
Эпидемиология: распространено повсеместно, резервуар-больной человек, переносчик-плотянаявошь,трансмиссивно.
Диагностика: микроскопия по Романовскому-Гимзе в синий цвет, засевают на желточный агар, при обнаружении колоний засевают на МПА для выделения чистой культуры, проводят серологию-РНГА, РСК. Экспресс-диагностика-РИФ, ИФА.
Лечение и Профилактика: тетрациклины, макролиды.
Неспецифическая:Борьба с педикулезом, специфическая: живая аттенуированная вакцина, комбинированная вакцина.
97. возбудитель бруцеллеза-
Таксономия: отдел Gracilicutes, семейство Brucellaceae, РОД Brucella, вид B.melitensis, abortus, suis/
Морфология: неподвижные мелкие палочки или коккобациллы, грам-, спор не образуют, при росте на среде с 10% имунной сывороткой образует капсулу. В мазках располагаются беспорядочно. Легко окрашиваются анилиновыми красителями. Аэробы.
Культуральные свойства: строгие аэробы, требовательны к питательным средам. Растут на кровяном агаре и сывороточном. Растут медленно 2-3 недели. На тв.средах образуют гладкие мутноватые перламутровые колонии. В жидких средах дают равномерное помутнение.
Биохимические свойства: ферментируют глюкозу и арабинозу с образованием кислоты. Восстанавливают нитраты, образуют сероводород.
Антигенная структура: выделяют 15 антигенных фракций, имеют родовой и видовые поверхностные АГ.
Факторы патогенности: обладают высокой инвазивностью, образуют фермент агрессии-гиалуронидазу, эндотоксин, капсула.
Резистентность: устойчивы во внешней среде, при кипячении погибают мгновенно, чувствительны к дезинфектантам, сохраняются в воде при 10-13гр, в почве до 5 мес, в молоке до 9мес, в сыре до года.
Источник инфекции-крупный рогатый скот, свиньи, домашние животные. Больной человек не заразен. Пути- алиментарный, контактный.
Патогенез: проникает через слизистые оболочки, попадают в лимфатические узлы, затем в кровь. Током крови разносятся по всему организму и попадают в органя ретикулоэндотелиальной системы(печень, селезенка). Длительной время сохраняются и вновь попадают в кровь. При гибели выделяют эндотоксин приводящий к интоксикации. Могут возникнуть аллергические реакции. Иммунитет 6-9 месяцев.
Клиника:инкуб.период 1-6 недель, поражают опорно-двигательный аппарат, нервную систему, половую систему. Характерны полиартриты, полиневриты. Все формы сопровождаются увеличением печени и селезенки.
Диагностика: материал-кровь, моча,биопсийный материал печени. Исследуют кровь. Засевают на МПБ при 37 гр. Создают повешенную концентрацию СО2. Через 4-5суток наблюдается рост бруцелл. Среда мутная или слегка прозрачная. Пересевают на тв.среду КА, отмечают образование колоний, отсеивают для выделения чистой культуры. Идентификация по биохимическим свойствам: образование сероводорода, генерация СО2. Для выявления АГ применяют РПГА с эритроцитарнымдиагностикумом с АТ к родовому АГ, а также РП и ИФА. Для выявления АТ применяют РПГА, РНИФ, ИФА. При отрицательных результатах ставят кожные пробы и бруцеллином, положительная выявляется и у привытых тоже.
Лечение: тетрациклины, аминогликозиды(стрептомицин), в тяжелых случаях-рифампицин.
Профилактика: соблюдение правил личной гигиены, правильная обработка с/х продукции. Специфическая: химическая вакцина из АГ клеточной стенки. Вакцина не защищает на 100%.
98.клебсиеллы-
Таксономия: отдел Gracilicutes, семейство Enterobacteriaceae, род Klebsiella, вид K.pneumoniae
Морфология: прямые неподвижные палочки, имеющие капсулу, в мазках – одиночно, парами, короткими цепочками. Грам-. Спор не образуют. Под действием антибиотиков могут образовывать L-формы.
Культуральные свойства: факультативные анаэробы, не требовательны к питательным средам. На плотных средах образуют пышные слизистые колонии. На жидких средах-равномерное помутнение и пленка. На средах Эндо и Плоскирева образуют красные колонии с металлическим блеском, т.к.расщепляют лактозу.
Биохимические свойства: расщепляют лактозу, мочевину, оксидазоотрицательны. Не продуцируют сероводород.
Антигенная структура: К-О-антиген.
Факторы патогенности: полисахаридная капсули и фимбрии и токсинообразование(эндотоксин).
Резистентность:кстойчивы к высушиванию благодаря капсуле, сохр.длит.время в почве, воде. Чувств.к кипячению и дезинфектантам. Обладают природной и приобретенной устойчивостью к антибиотикам.
Источний инфекции-больной человек. Передается аэрогенно, контактно. Механизм-фекально-оральный. Иммунитет не формируется.
Клиника: вызывает долевые пневмонии, бронхиты, поражения мочевыводящих путей, глаз, мозговых оболочек. Также атрофический зловонный насморк, который может распространяться на глотку, гортань, трахею. Риносклерома- хроническое гранулематозное заболевание дыхательных путей. На слизистой оболочке носа, гортани образуются белые узелки с возбудителем, покрытые вязкой мокротой. Появляются множественные инфильтраты.
Диагностика: материал-кровь, СМЖ, гнойное отделяемое. Засевают на селективно-дифференциальную среду с мочевиной, рафинозой. Колонии сочные и блестящие, цвет от желто-зеленого до голубого. Идентификация по биохимическому ряду. Антигенная структура по реакции РА диагностическими К-сыворотками. Для выявления АТ_РСК.
Лечение:аминогликозиди и бета-лактамные широкого спектра действия.
Профилактика: санитарно-гигиенические правила, правила асептики и антисептики соблюдать.
99. синегнойная палочка
Таксономия: отдел Gracilicutes, семейство Pseudomonaceae, род Pseudomonas, виды P,aeruginosa, p.mallei.P.pseudomallei.
Морфология: прямые или изогнутые палочки средних размеров, подвижны, в мазках расположены одиночно, либо в виде коротких цепочек, поверхность покрыта микроворсинками, синтезирует слизистое вещество, покрывающее тонким слоем микробную клетку. Грам-.
Культуральные свойства: строгий аэроб. Растет при температуре 4-42гр. Отличительная способность-ограниченная потребность в пит.средах. образует триметиламин, придающий запах жасмина, карамели. В жидких средах- серовато-серебристая пленка. На плотных-небольшие маргаритки. Также феномен радужного лизиса-пленка, переливающаяся всеми цветами радуги.
Биохимические свойства: каталаза и оксидаза +, протеолитическая способность высока:разжижает желатину, свертывает сыворотку крови, утилизирует гемоглобин, расщепляет белки и аминокислоты. Сахаролитическая активность низкая-окисляет глюкозу только до глюконовой кислоты. Синтезирует пиоцины, угнетающие жизнедеятельность грам-,+, бактерий. Синтезирует пигмент-пиоциан, окрашивает пит.среды в сине-зеленый цвет.
Факторы патогенности: образует комплекс экзои эндотоксинов. Экзотоксин А самый токсичный. Подавляет синтез белка-отек, некроз. Действие эндотоксина приводит к развитию пирогенной реакции и стимулирует воспаление.
Антигенная структура: О-Н- антигены
Механизм передачи: фекально-оральный, путь-контактный, респираторный, кровяной.
Патогенез: оппортунистический патоген, низкаяинвазивность характерна. Основной возбудитель раневых инфекций и многих осложнений при сниженном иммунитете.
Диагностика: гнойное отделяемое. Засевают на среду МПА и смотрят по окраске культуры. Идентификация- пестрый ряд с повышенным содержанием углеводов, аоложителен только с глюкозой.
Лечение: плохо поддаются антибиотикотерапии из-за резистентности. Бета-лактамные:цефалоспорины, нейропенем, тетрациклины, фторхинолоны, аминогликозиды. Профилактика сложна: устойчив к антисептикам, однако, чувствителен к дезинфектантам содержащих хлор, погибают под действием высоких температур и давления.
100. кишечныйиерсинеоз-инфекционное заболевание, сопровождающееся диареей, узловатой эритемой, артритом.
Таксономия: семейство Enterobacteriaceae, род Yersinia, видY.enterocolitica,
Морфология:грам- палочки с закругленными концами, подвижны:перитрих. Спор и капсул не образует. При 37гр неподвижен.
Культуральные свойства: факультативный анаэроб, не прихотлив к пит.средам. на пл.средах образуют мелкие колонии с голубоватым оттенком. На среде Эндо вырастают розовые колонии. Проявляют пектиназную активность. На пектиновом агаре-разжижение. На жидких средах-помутнение.
Биохимические свойства: продуцирует индол, разлагает сахарозу, расщепляет мочевину.
Антигенные свойства: О,Н антигены.
Факторы патогенности: эндотоксин, ивазивныйбелок,токсины.
Резистентность:чувств.к высоким температурам, инсоляции, дезинфецирующим средствам, устойчив к низким температурам.
Источник инфекции: вода, с/х животные, птица. Основной резервуар-свиньи. Механизм-фекально-оральный. Путь-водный, пищевой.
Иммунитет непрочный.
Патогенез: попадает в тонкую кишку через эпителий, поражает лимфатические узлы, где возникает воспаление. У ослабленных людей-септикоемия, сепсис.
Клиника: имитирует аппендицит. Вызывает гастроэнтериты.
Диагностика:материалы:кровь, продукты питания, вода, испражнения. Засевают на среды Плоскирева и Эндо при 22-29 гр. И жидкие среды для обогащения. После выделения чистых культур смотрят по биохимическим свойствам. Для выявления АТ используют развернутую РА с диагностикумом или РПГА с эритроцитарнымдиагностикумом. Результат считают положительным при титрах 1:400 и выше.
Лечение: левомицетин, тетрациклины, гентамицин, доксициклин.
Профилактика: соблюдение правил при приготовлении пищи и ее правильной термической обработки.
№101. ВОЗБУДИТЕЛИ ГРИППА
1.Грипп— острое респираторное заболевание ,характеризующееся поражением слизистых оболочек верхних дыхательных путей, лихорадкой, общей интоксикацией, нарушением деятельности сердегно-сосудистой и нервной системы. Таксономия. Семейства Orthmyxoviridae. Род Influenzavirus представлен вирусами А,В; Influenz вирус С. Наибольшим антигенным разнообразием и эпидемиологической опасностью обладают вирусы гриппа А.Это РНК-содержащие сложноорганизованные вирусы. Строение( морфология). Вирион имеет сферическую форму с диаметром- 80-120 нм и представляет собои нуклеокапсид (имеющий спиральный тип симметрии). На поверхности суперкасидов оболочки имеются шипы гликопротеидной природы, одни из которых являются гемагглютинином, а другой- нейраминидазой. Культивирование- для культивирования используют куриные эмбрионы,культуры клеток , иногда лабораторных животных.
Антигенная структура. Вирусы гриппа имеют внутренние и поверхностные антигены. Внутренние типоспецифические антигены представлены нуклеопротеином (NР-белком) и М-белками. Поверхностные антигены — гемагглютинин и нейраминидаза, от человека стабильно выделяются только Н1, Н2, НЗ и N1, N2.
Резистентность-Возбудители гриппа чувствительны к действию УФ-лучей, многие дезинфицирующим средствам,жирорастворителям; в жидкой среде инактивируются при t=50-60 в течение несколько минут. Длительное время сохраняются в замороженном состоянии и в глицерине.
Эпидемиология. Основной механизм передачи вирусов гриппа — аэрогенный, путь — воздушно-капельный (при кашле, чиханьи и т.п.). Возможна также контактная передача. Грипп часто протекает в виде эпидемий и даже пандемий.
Патогенез. Обычно входные ворота инфекции — это верхние дыхательные пути, но вирус может проникнуть сразу в альвеолы, что вызывает развитие пневмонии. Инфицированные клетки начинают вырабатывать интерферон, оказывающий неспецифическое противовирусное действие. Развиваются воспаление, отек, набухание базальной мембраны.
Клиническая картина. Инкубационный период длится 1-2 дня, клинические проявления — 3-7 дне. При гриппе А начало болезни острое: у больного обычно наблюдается интоксикация (высокая температура тела с ознобом, суставные и мышечные боли, сильная головная боль). Вирус гриппа А нейротропен, поэтому возможно развитие нейротоксикоза, в результате чего может наступить смерть (чаще у детей). Развивается катар верхних дыхательных путей («саднящий» сухой кашель, боли за грудиной, нарушение фонации, ринит и ринорея).Грипп А также может осложняться нарушениями функций нервной, сердечнососудистой систем, печени, почек и др. Грипп В обычно протекает легче и сопровождаться симптомами, как конъюнктивит, глазная боль или фотофобия. В не обладает нейротропностью. Заболевание, вызванное вирусами гриппа С, чаще протекает легко. Иммунитет После перенесенного заболеваня формируется стойкий типо-, подтипо-, вариантоспецефический иммунитет.
2.Микробиологическая диагностика.
Материалом служат: носоглоточное отделяемое, мазки-отпечатки со слизистой оболочки носа,сыворотки крови больного.При летальных исходах-кусочки легочной ткани или мозга.
Экспресс-диагностика. Обнаруживают вирусные антигены в исследуемом материале с помощью РИФ (прямой и непрямой варианты) и ИФА. Можно обнаружить в материале РНК вирусов с помощью ПЦР.
Вирусологигеский метод. Вирусы гриппа можно выделять в курином эмбрионе, в культуре клеток,а также в организме лабораторных животных. Индикацию вирусов проводят в зависимости от лабораторной модели. Идентифицируют вирусы по антигенной структуре. Применяют РСК, РТГА, ИФА, РБН вирусов. Серологигеский метод. Диагноз подтверждают при 4-кратном увеличении титра антител в парных сыворотках от больного, полученных с интервалом 10-14 дней. Применяют РТГА, РСК, ИФА, РБН вирусов. Метод часто используют для ретроспективной диагностики.
3.Лечение.
Применяют жаропонижающие, сосудосуживающие, антигистаминные препараты, витамины, детоксикацию, иммуномодуляторы, ангиопротекторы, ингибиторы протеолиза и т.д.Препараты интерферона и имунномодуляторы-дибазол,левамизол. Применяют химиотерапевтические препараты: римантадин — препятствует репродукции только вирусов гриппа А; арбидол — препарат, который действует на вирусы гриппа А и В,виразол.
Профилактика.
Неспецифической профилактики гриппа проводят противоэпидемические мероприятия, ограничивающие распространение вирусов гриппа аэрогенно и контактно. Для экстренной химиопрофилактики во время эпидемии гриппа можно применять ингибиторы нейраминидазы, а также арбидол и римантадин. Для неспецифической противовирусной профилактики используют интраназально препараты аинтерферона и оксолина. Специфическая плановая профилактика состоит в применении живые и инактивированные вакцины. Вакцинацию проводят не менее чем за 1 мес до начала эпидемического сезона (сентябрь-октябрь), чтобы успел сформироваться активный иммунитет. Вакцинация рекомендована прежде всего детям, лицам из группы высокого риска, персоналу лечебных учреждений и т.п. Разработано несколько разновидностей вакцин для профилактики гриппа А и В.
№102. Возбудители ВИЧ-инфекции
Семейство – Retroviridae
Род – Lentivirus
Морфология. Вирус шарообразной формы, капсид имеет форму усеченного конуса. В капсиде хранятся +РНК, ферменты обратная транскриптаза, интеграза и протеаза, нуклеопротеины. Суперкапсид окружен липопротеиновой оболочкой с гликопротеиновыми шипами.Выделяют 2 типа: ВИЧ-1 и ВИЧ-2,кот. отличаются по структурным и антигенным характеристикам.
Антигенная структура. Есть поверхностные (gp160,gp41, gp 120) и сердцевинные(p24, p18) антигенов.
Резистентность. Вирус неустойчив в окр. среде, чувствителен к многим антисептикам, спирту, эфиру, УФ-лучам.
Культивирование. Культивируется только в специальных культурах клеток( в культурах лимфоцитов).
Эпидемиология. Источник инфекции-больной и носитель. Заражение происходит при половом контакте и при переливании крови. Группа риска:наркоманы,реципиенты трансплантов органов и тканей ,новорожденные от инфицированных матерей.
Патогенез. Вирус попадает в кровь, проникает в клетки, размножается в них, выходит из клеток и распр-ся по всему организму.Его можно обнаружить в крови,лимфе, слюне, слезах, коже.В рез-те взаимодействия с ВИЧ гибнут Т-лимфоциты.
Клиническая картина. ВИЧ-инфекция харак-ся несколькими стадиями:
Лихорадочная:
Бессимптомная:человек внешне здоров,однако организм вырабатывает антитела к ВИЧ
Стадия вторичных заболеваний,протекающих с поражением ЦНС, легких,пищеварит. тракта и возникновением опухолей;
Терминальная :проявляются необратимые течения вторичн. заболеваний (СПИД)
Летальность при СПИДе 100%.
Иммунитет. Защитный иммунитет не формируется.
Микробиологическая диагностика. Материал для исследования:слюна,кровь, выделения половых органов.Вирус выделяют в культуре клеток лимфоцитов. Вирусологич. и серологич. диагностика направлена на определение в жидкостях и тканях организма(сыворотка крови, лимфоциты) вируса и его антиген. Антитела к ВИЧ определяют с помощью ИФА.
Лечение. Используют 5 групп антиретровирусных препаратов:азидотимидин, невирапин, индинавир,ралтегравир,энфувиртид. Полного излечения эти препараты не дают, позволяют продлить жизнь больных.
Профилактика. Специф. проф. не разработана. Неспециф. проф-ка сводится к социальным и противоэпидемическим мероприятиям:использование одноразовых шприцев и мед.инструментов,контролю крови. Своевременное выявление ВИЧ-инфицированных, борьба с наркоманией, просветительная работа среди населения.
№103.
ВОЗБУДИТЕЛЬ ГЕПАТИТА Е
Таксономия. Ранее относился к семейству Caliciviridae, теперь переведен в отдельный род Hepevirus.
Морфология. Вирус не имеет липидной оболочки. Нуклеокапсид, построенный по кубическому типу симметрии, сферической формы, размером 27-34 нм. Геном вируса представлен однонитевой плюс-РНК, которая кодирует РНК-зависимую РНК-полимеразу, папаинподобную протеазу и трансмембранный белок, обеспечивающий проникновение вируса в клетку.
Эпидемиология и клиническая картина. Источник инфекции — больные люди. Главный путь передачи инфекции — водный. Также существуют алиментарный и контактно-бытовой путь передачи. Инкубационный период длится от 2 до 6 нед. Заболевание сопровождается умеренным поражением печени, интоксикацией и желтухой. Прогноз, как правило, благоприятный, за исключением беременных, у которых возникают геморрагический синдром, острая почечная недостаточность. Смертность от гепатита Е составляет 16-20%. В последнее время вирус гепатита Е был выделен у некоторых животных (свиньи, олени, крупный рогатый скот, птицы и др.), что предполагает возможность передачи вируса от животных человеку.
Механизм передачи – фекально-оральный.
Патогенез. Размножаются в эпителии слизистой оболочки тонкой кишки. Затем попадают в кровь (вирусемия).
Иммунитет. После перенесенного заболевания формируется стойкий иммунитет.
Микробиологическая диагностика. Применяют серологический метод. В сыворотке и плазме крови определяют антитела к вирусу. Кроме того, методом ПЦР определяют вирусную РНК в сыворотке крови в острую фазу инфекции. Существуют диагностические методы, основанные на применении иммунофлюоресцирующих антител (МФА) для определения антигена ВГЕ в фекалиях и иммуноферментного анализа (ИФА) для определения антител к ВГЕ - анти-ВГЕ класса IgM и IgG.
Лечение и профилактика. Симптоматическое. Беременным рекомендуется введение специфического иммуноглобулина.
Неспецифическая профилактика направлена на улучшение санитарно-гигиенических условий и снабжение качественной питьевой водой. Создана неживая цельновирионная вакцина. Испытываются живая и генно-инженерная вакцины.
Гепатит А-инфекц.болезнь с лихорадкой,поражением печени.
Таксономия, морфология, антигенная структура: Семейство Picornaviridae род Hepatovirus. Типовой вид —имеет один серотип. Это РНК-содержащий вирус, просто организованный, имеет один вирусоспецифический антиген.
Культивирование: Вирус выращивают в культурах клеток. Цикл репродукции более длительный, чем у энтеровирусов, цитопатический эффект не выражен.
Резистентность: Устойчивостью к нагреванию; инактивируется при кипячении в течение 5 мин. Относительно устойчив во внешней среде (воде).
Эпидемиология. Источник-больные. Механизм заражения — фекально-оральный. Вирусы выделяются с фекалиями в начале клинических проявлений. С появлением желтухи интенсивность выделения вирусов снижается. Вирусы передаются через воду, пищевые продукты, руки.
Болеют преимущественно дети в возрасте от 4 до 15 лет.
Патогенез: Обладает гепатотропизмом. После заражения репликация вирусов происходит в кишечнике, а оттуда через портальную вену они проникают в печень и реплицируются в цитоплазме гепатоцитов. Повреждение гепатоцитов возникает в результате иммунопатологических механизмов.
Клиника. Инкубационный период - от 15 до 50 дней. Начало острое, с повышением т-ры и тошнотой, рвотой). Возможно появление желтухи на 5-й день. Клиническое течение заболевания легкое, без особых осложнений. Продолжительность заболевания 2 нед. Хронические формы не развиваются.
Иммунитет. После инфекции - стойкий пожизненный иммунитет, связанный с IgG. В начале заболевания в крови IgM, которые сохраняются в организме в течение 4 месяцев и имеют диагностическое значение. Помимо гуморального, развивается и местный иммунитет в кишечнике.
Микробиологическая диагностика. Материал для исследования - сыворотка и испражнения. Диагностика основана главным образом на определении в крови IgM с помощью ИФА, РИА и иммунной электронной микроскопии. Этими же методами можно обнаружить вирусный антиген в фекалиях. Вирусологическое исследование не проводят.
№104. ВОЗБУДИТЕЛЬ КРАСНУХИ
Вирус краснухи
Семейство: Togoviridae
Род: Rubivirus
Покраснение кожи в связи с появление на ней пятнисто-папулезной сыпи. Опасность вируса краснухи для плода при заболевании беременных.
Морфология и химический состав вируса. Вирион вируса краснухи сферической формы. Геном вируса состоит из однонитчатойгтлюс-нитевой РНК, окруженной капсидом с кубическим типом симметрии и внешней липидсодержащей оболочкой, на поверхности которой находятся шипы. В структуре вириона 3 белка.
Устоичивость к действию физических и химических факторов-чувствительны к эфиру и детергентам. Малоустойчивы к действию физ и хим фактором, неустойчив в окружающей среде. Разрушение вируса происходит под действием орг растворителей,хлорактивных соединений, формалин,УФ-лучей,солнечного света.Активность сохраняется годами при низ. тем.в замороженном состоянии.
Культивирование и репродукция.
Вирус краснухи репродуцируется в первичных культурах клеток человеческого эмбриона, а также в ряде перевиваемых линий клеток с выраженным ЦПД. К вирусу чувствительны куриные и утиные эмбрионы. Вирус краснухи способен размножаться в организме разных лабараторных животных,протекает бессимтомно.
Антигенная структура -представлены одним серотипом.Он имеет внутреннии нуклеокапсидный антиген С, выявленяемый в РСК, внешние антигены Е1 ,Е2.
Эпидемиология,патогенез, заболеваний человека.
Различают 2 формы болезни: приобретенную и врожденную краснуху.
Приобретеннная-После заражения вирус попадает в лимфатические клетки шейных, затылочных и заушных желез. Затем проникает в лимфу и кровь. Вирусемия быстро прекращается после появления сыпи. У детей протекаеn легко.
Врожденная-это факультативная медленная вирусная инфекция, развивающаяся в результате внутриутропного трансплацентарного заражения плода, персистенции вируса в его тканях, где он оказывает тератогенное действие. Эта форма заболевания характеризуется развитием катаракты, глухоты и порока сердце.Слепота с сочетанием с глухотой и поражение ЦНС приводит к умственной отсталости.
Иммунитет. Независимо от формы заболевания у переболевших остается стойкий, напряженный иммунитет. Антигемагглютинины и вируснейтрализующие антитела сохраняются на протяжении всей жизни
(Врожденная краснуха —развивающаяся в результате внутриутробного трансплацентарного заражения плода, персистенции вируса в его тканях, где он оказывает тератогенное действие. Характеризуется развитием катаракты, глухоты и пороков сердца, а также других аномалий развития. Слепота в сочетании с глухотой и поражением ЦНС приводит к умственной отсталости. Вызывает внутриутробные поражения плода.
Распростронение. Краснухой чаще всего болеют дети в возрасте от 1-7 лет, возможно заболевание и взрослых. Источником инфекции являются больные, а также лица с бессимптомными формами инфекции. Основные пути передачи – аэрозольный и контактный через инфицированные предметы. Имуннитет после врожденной краснухи менее стоек.
2.Лабораторная диагностика.
Материал: выделяют из носоглоточных смывов, крови, мочи, кала, в культуре клеток. Экспресс- диагностика заключается в обнаружении под световым микроскопом гигантских многоядерных клеток- симластов с внутриядерными включениями в мазках- опечатках из высыпаний, окрашенных по Романовскому- Гимзе, а также специфического антигена в РИФ с моноклональными антителами. Выделяют вирус в культуре клеток, идентифицируют с помощью РН (при положельном результате культура клеток выживает) и РИФ. Для серодиагнстики используют РН, ИФА, РСК (при положительном результате образуются иммунные комплексы)
3.Специфическое лечение и профилактика. Первоочередной задачей профилактики является защита беременных от внутриутробного инфицирования плода. Наиболее эффективный метод профилактики приобретенной и врожденной краснухи — применение живых вакцин из аттенуированных штаммов. Вероятность заболевания во время беременности высока в группах риска — у медицинских работников, педагогов, работников детских дошкольных учреждений. В национальный календарь профилактических прививок включена вакцинация против краснухи детей в возрасте 12-15 мес, ревакцинация детей в 6 лет и иммунизация девочек в 13 лет. Иммунитет у привитых сохраняется в течение 20 лет. Лечение симптоматическое.
№ 105. Вирус простого герпеса
Семейство – Herpesviridae
Морфология. Вирус овальной формы. Покрыты оболочкой с гликопротеиновыми шипами.Вирион содержит ДНК. Двунитевая ДНК состоит из двух фрагментов-короткого и длинного.Капсид икосаэдрической формы. Между капсидом и оболочкой содержатся вирусные белки.
Резистентность. Вирус чувствителен к УФ-лучам, жирорастворителям, детергентам.Длительно сохраняется при низких t.
Культивирование. При культивировании на курином эмбрионе на оболочке образуются мелкие плотные бляшки. В культуре клеток ВПГ вызывает цитопатический эффект-появление гигантских многоядерных клеток с внутриядерными включениями.
Эпидемиология. Источник инфекции-больной и носитель. Вирусы передаются контактным путем (ВПГ-1)(с везикулярной жидкостью, при поцелуях – со солюной) половых контактах(ВПГ-2) ,через предметы обихода, при рождении ребенка. Возможна реактивация вируса при снижении иммунитета.
Патогенез. Входные ворота-кожа и слизистые оболочки.Чаще вирус вызывает бессимптомную инфекцию.Различают первичный и рецидивирующий ПГ. При первичной инфекции появ-ся везикулы с дегенерацией эпителиальных клеток. Пораженные ядра клеток содержат тельца Каудри.Верхушка везикулы вскрывается,образуется язвочка, кот. покрывается корочкой, наступает заживление. После этого инфекция переходит в латентную форму. Реактивация вызывается различными факторами, снижающими иммунитет (переохлаждение,лихорадка, травма)
Клиническая картина. Болезнь начинается с появления на пораженных участках зуда,отека и пузырьков,заполненных жидкостью. После подсыхания пузырьков и отторжения корочек рубцы не образуются. ВПГ поражает кожу,слизист.обол. рта , глотки(стоматит), печень, глаз(кератит), ЦНС(энцефалит).
Иммунитет. В основном клеточный. Организм человека реагирует на гликопротеины вируса, продуцируя цитотоксические Т-лимфоциты.
Микробиологическая диагностика. Материал для исследования:содержимое везикул,слюна, соскобы с роовой оболочки глаз,кровь,СМЖ. В мазках окрашенных по Романовскому-Гимзе,наблюдают гигантские многоядерные клетки,клетки с увеличенной цитоплазмой. Для идентификации вируса исп-ют ПЦР.Вирус выделяют заражая культуры клеток.Цитопатический эффект виден через 1 сутку. Заражают также куриные эмбрионы.Вирус идентифицируют в РИФ и ИФА. Серологич. диагностику проводят с помощью ИФА,РН по нарастанию титра с парными сыворотками.
Лечение. Используют противовирусные химиотерапевтич. препараты (ацикловир, фамцикловир,видаробин, теброфеновую и флореналевую мазь),препараты ИФН
Профилактика. Специф. проф. осуществляется многократным введением инактивированной культуральной герпетической вакцины из штаммов ВПГ-1 и ВПГ-2.
№106. Возбудитель клещевого энцефалита.
Таксономия. Сем. Flaviviride, род Flavivirus/
Морфология. Сложноорганизованый вирус сферической формы. Геном состоит из однонитевой плюс — РНК, окруженный капсидом с кубическимтипом симметрии.
Культивирование. Вирусы культивируют во многих первичных перевиваемых культурах клеток, а так же путем заражения куриных эмбрионов на ХАО и в желточный мешок. Универсльной моделью вируса является интрацеребральное заражение новорождённых белых мышей, вызывающие у них развитие паралича.
Устойчивость. Небольшая устойчивость вируса к действию физических и химических факторов, в организме переносчиков он сохраняет жизнеспособность в широком диапазоне температур от 150 до 30, что способствует его широкому распространению. Вирус проявляет высокую резистентность к действию кислых значений рН, что важно при алиментарном пути заражении.
Эпидемиология. Клещевой энцефалит вызывает нейротропный вирус клещевого энцефалита, основными переносчиками и резервуаром которого являются иксодовые клещи (Ixodes persulcatus и Ixodes ricinus). Во всех природных очагах вирус циркулирует между клещами и дикими животными (главным образом грызунами и птицами), которые являются дополнительным резервуаром. В антропургических очагах резервуаром могут служить и домашние животные— козы и коровы. Вирус клещевого энцефалита может передаваться клещами трансовариально— через яйцеклетки их потомству.
Заражение человека происходит трансмиссивным путём через укусы клеща. Возможна алиментарная передача инфекции при употреблении в пищу сырого молока и молочных продуктов инфицированных коз и коров. Риск возникновения клинически выраженных форм болезни возрастает при длительном кровососании клещом. Возбудитель хорошо сохраняется при низких температурах и легко разрушается принагревании выше 70 °C. Клещевой энцефалит имеет сезонный характер, соответствующий активности клещей.
Патогенез и клиническая картина.
Вирус проникает в кровь при укусе клеща и поражает клетки мозга. Заболевание начинается остро, после инкубационного периода около 2 нед, с подъема температуры до 40°С и менингеальных явлений: судорог, рвоты, головной боли, гиперестезий. Состояние тяжелое в течение 5—12 дней. Затем появляются вялые параличи, чаще верхних конечностей. Летальность высокая — до 25%. После выздоровления могут оставаться стойкие параличи мышц шеи и плечевого пояса. Иногда течение клещевого энцефалита может быть легким, в виде стертых и абортивных форм.
Иммунитет. Стойкий.
Диагностика. Материал. Кровь, цереброспинальная жидкостью, Идентификацию вируса в суспензиях мозга мышей и культурально жидкости проводят в РТГА, РСК, а в монослое культур клеток — РИФ. Генотипирование проводят с помощью реакции ПЦР.
Проводится путем выделения вируса. Белым мышам или обезьянам вводят кровь больных (на 1-й неделе заболевания) или кусочки мозга умерших. Антитела в крови переболевших можно обнаружить в РНА на мышах или в РСК.
Лечение.
Организационно-режимные мероприятия: госпитализация в инфекционный стационар всех больных, постельный режим на весь период лихорадки и 7 дней нормальной температуры.2) Этиотропное лечение (направленное на вирус) включает в себя введение специфического противоклещевого иммуноглобулина. Иммуноглобулин вводится в лихорадочный период, при возникновении второй волны вводится повторно в той же дозе. Можно назначать йодантипирин, препараты интерферона (роферон, интрон А, реаферон и другие), индукторы интерферона (циклоферон, амиксин, неовир).3) Патогенетическое лечение включает дезинтоксикационную терапию, дегидратацию, посиндромальную терапию (жаропонижающие, противовоспалительные, препараты, улучшающие микроциркуляцию, мозговое кровообращение и другие).
Прфилактика.
1) Специфическая профилактика включает в себя вакцинацию от клещевого энцефалита. Существуют насколько вакцин: культуральная инактивированная (Россия), Энцевир (Россия), Энцепур взрослый и детский (Германия), ФСМЕ-иммун-инжект (Австрия). Это плановая профилактика, прививаться нужно с осени (сентябрь-октябрь
2)Неспецифическая профилактика – использование репеллентов, акарицидов, ношение специальной защитной одежды (или как минимум штаны заправить в носки плюс длинный рукав с плотной резинкой на конце), самоосмотр во время и после посещения лесов, употребление в пищу кипяченого молока.
№107.ВОЗБУДИТЕЛЬ ГЕПАТИТА В
Таксономия. Вирус гепатита В (ВГВ) относится к семейству Нерadnaviridae, роду Оrthohaepadnavirus.
Морфология. ВГВ — сложноорганизованный, ДНК-содержащий вирус сферической формы, диаметром 42-47 нм. Он состоит из сердцевины (соге), построенной по кубическому типу симметрии, включающей 180 белковых частиц (сердцевинный НВс-антиген, диаметром 28 нм), и липидной оболочки. Внутри сердцевины находятся ДНК-полимераза, протеинкиназа и концевой белок НВе-антигена. ДНК-полимераза является полифункциональным ферментом, она вовлекается во многие функции жизненного цикла вируса: способна синтезировать новые цепи ДНК, на матрице как ДНК, так и РНК, обладая как полимеразной, так и ревертазной активностью. Нуклеазная активность деградирует РНК цепь в гибриде РНК-ДНК.
Антигенная структура. ВГВ обладает сложной антигенной структурой. В оболочке вируса находится НВs-антиген, в формировании которого участвуют 3 полипептида в гликированной форме. HВs-антиген обнаруживается в крови не только в составе вириона, но и в виде самостоятельных пустых фрагментов сферической или филаментозной формы, которые неинфекционны, но высокоим-муногенны и индуцируют анти-HВs-нейтрализующие антитела. Присутствие НВs-антигена в крови свидетельствует об инфицированности организма вирусом. HВs-антиген обладает гетерогенностью, подразделяясь на 4 антигенных подтипа. Защита против одного подтипа обеспечивает защиту и против других, за счет наличия общей детерминанты. Сердцевинный HВс-антиген никогда не присутствует в свободной форме в крови, являясь внутренним компонентом вирусной частицы. Его можно обнаружить в зараженных вирусом гепатоцитах.. HВе-антиген также является сердцевинным антигеном, производным HВс-антигена; его также называют растворимым антигеном. Появление НВе-антигена в крови связано с репликацией вируса. Геном представлен двунитевой ДНК кольцевой формы.
Культуральные свойства. ВГВ не культивируется на куриных эмбрионах, не обладает гемолитической и гемагглютинирующей активностью. Культивируется только в культуре клеток, полученной из ткани первичного рака печени без оказания цитопатического и цитолитического эффектов и с малым накоплением вирионов. К вирусу чувствительны приматы: гориллы, шимпанзе, африканские зеленые мартышки.
Эпидемиология. Гепатит В — антропонозная инфекция. Заболевание поддерживается стабильной циркуляцией ВГВ в человеческой популяции. Резервуаром вируса в природе являются носители. Заражение происходит при попадании вируса в кровь различными путями: при парентеральном вмешательстве, гемотрансфузии, половым (через поврежденные слизистые оболочки и кожные покровы), через плаценту, материнское молоко, при трансплантации органов, укусах клопов.
Источником инфекции являются больные всеми формами инфекции и носители. Риск заражения от матери-носителя ребенку составляет 60%, а в случае свежего заболевания — 90%.
Вирус устойчив к факторам окружающей среды. Сохраняет инфекционность при 0-20 °С в течение 15 лет, при комнатной температуре — 1ч, при 100 °С — 20 мин, при сухом жаре 160 °С — 1 ч. В высушенной плазме 25 лет. Устойчив к фенолу, УФ-облучению, спирту. Чувствителен к формалину, эфиру. 1-2% раствор хлорамина Б действует 2 ч.
Патогенез. Вирусы проникают в кровь парентерально, с кровью переносятся в печень и размножаются в клетках печени – гепатоцитах. Проникнув в клетку, вирусный нуклеокапсид достигает ядра, где вирусный геном высвобождается. В ядре ДНК-полимераза достраивает брешь плюс-цепи ДНК, в результате формируется двунитчатая, суперспирализованная циркулярная молекула ДНК, после чего возможно развитие 2 типов инфекции: продуктивной и интегративной.
Клиническая картина. Инкубационный период составляет 2-6 мес. Клиническая картина характеризуется симптомами поражения печени, в большинстве случаев сопровождающимися желтухой. Острый гепатит переходит в хронический в 5-10% случаев с последующим развитием цирроза и носительства ВГВ.
Иммунитет. Инфекционный процесс сопровождается развитием иммунитета, выработкой антител. Свыше 5% случаев гепатита В заканчивается носительством HBs-антигена, являющегося основным показателем перенесенной хронической инфекции и носительства.
Диагностика. Материал для исследования – кровь больного, в которой определяются антигены вируса и антитела против них – анти-НВs, анти-НВс и анти-НВе классов IgM и IgG. Для этого применяют серологические реакции: ИФА, РИА, РНГА. В будущем важное место займет метод ДНК-гибридизации, позволяющий определять ДНК вируса в крови и клетках печени. Также применяют ПЦР.
Профилактика и лечение. Для профилактики гепатита В введена рекомбинантная вакцина. Она состоит из НВs-антигена ВГВ, главным образом 5-белка, синтезированного генно-инженерным путем в дрожжевых клетках, который после очистки сорбируется на гидроокиси алюминия или фосфате алюминия в качестве адъювантов. Вакцинации в первую очередь должны подвергаться новорожденные, дети и лица, составляющие группу риска заражения вирусом ВГВ (в первую очередь работники здравоохранения). Предложенная схема иммунизации состоит из 3 инъекций, с интервалом между 1-ми 2-м введением — 1 мес, а между 2-м и 3-м — 4-6 мес (т.е. 0-1-4-6). Третья инъекция очень существенна, так как она вызывает возрастание титра антител от 10 до 100 раз. Продолжительность иммунитета — 5-7 лет. Большое значение имеет неспецифическая профилактика, направленная на предупреждение попадания вируса при парентеральных манипуляциях и переливании крови.
Лечение. Современный метод лечения сводится к применению иммуномодуляторов, в частности интерферона-реаферона, полученного методом генной инженерии.
Вирус гепатита D
Таксономия. Вирус гепатита D не классифицирован; является сателлитом ВГВ и представляет собой дефектный вирус, не имеющий собственной оболочки. Относится к семейству Deltavirus.
Морфология. Вирион имеет сферическую форму (диаметр 36 нм), состоит из однонитчатой негативной цепи РНК кольцевой формы и нуклеокапсидного НD-антигена. В качестве внешней оболочки для защиты генома ВГО использует HВs-антиген ВГВ. Дельта-антиген представлен в нуклеокапсиде в виде 60 копий и является единственным белком, синтез которого кодируется вирусной РНК. Репликация вирусного генома выполняется клеточной РНК-полимеразой-П без помощи ВГВ. Различают 3 генотипа вируса. Все генотипы относятся к одному серотипу.
Культивирование. Вирус не культивируется на известных клеточных линиях. Экспериментальной моделью являются шимпанзе и лесные сурки, которые заражаются ВГО соответственно вместе с ВГВ и вирусом гепатита лесных сурков.
Эпидемиология. Резервуаром ВГО в природе являются носители ВГВ. Заражение ВГО аналогично инфицированию ВГВ. Одновременное инфицирование ВГВ и ВГО (коинфекция) приводит к развитию умеренной формы болезни. Инфицирование ВГБ больных хронической формой гепатита В утяжеляет течение инфекции, приводя к развитию острой печеночной недостаточности и цирроза печени.
Микробиологическая диагностика. Осуществляется серологическим методом путем определения антител к ВГО методом ИФА. В биоптатах печени с помощью ПЦР в гепатоцитах можно обнаружить РНК вируса.
Профилактика и лечение. Для профилактики гепатита D введена рекомбинантная вакцина. Она состоит из НВs-антигена ВГВ, главным образом 5-белка, синтезированного генно-инженерным путем в дрожжевых клетках, который после очистки сорбируется на гидроокиси алюминия или фосфате алюминия в качестве адъювантов. Вакцинации в первую очередь должны подвергаться новорожденные, дети и лица, составляющие группу риска заражения вирусом ВГВ (в первую очередь работники здравоохранения). Предложенная схема иммунизации состоит из 3 инъекций, с интервалом между 1-ми 2-м введением — 1 мес, а между 2-м и 3-м — 4-6 мес (т.е. 0-1-4-6). Третья инъекция очень существенна, так как она вызывает возрастание титра антител от 10 до 100 раз. Продолжительность иммунитета — 5-7 лет. Большое значение имеет неспецифическая профилактика, направленная на предупреждение попадания вируса при парентеральных манипуляциях и переливании крови.
Для лечения используют препараты ИФН. Вакцина против гепатита В защищает и от гепатита D.
№108. Возбудитель бешенства(рабдовирус)
Бешенство-вирусное зоонозное заболевание с контактным механизмом передачи через слюну зараженного животного,поражение ЦНС с летальным исходом.
Таксономия семейство Rhabdoviridae,род Lyssavirus.Существуют уличные и вакцинные штаммы вируса.Поражает всех теплокровных животных.
Морфология и антигенные свойства сложно устроенный вирус,в форме пули или палочки.Состоит из сердцевины и оболочки липопротеиновой с гликопротеиновыми шипами.Геном- 1 нить -РНК.Репродукция просиходит в цитоплазме клетки,где образуют тельца Бабеша-Негри.Фиксированный штамм не патогенен для человека.
Культивирование внутримозговое заражение лабораторных животных.В кудьтурах клеток под агаровым покрытием вирус образует бляшки.Обладает геммаглютинирующим свойством.
Резистентность сравнительночувствителен к физико-хим воздействиям,но сохраняется пр и низкой температуре(-60)
ЭпидемиологияИсточник инфекции в природе-дикие животные,также кошки и собаки,которые заражаются от диких.Механизм передачи-контактный,через слюну больного животного.Заражение при укусах или аэрогенно,при пересадки донорных органов.От человека к человеку не передаётся.
Патогенез и клиническая картинаПосле укуса вирус попадает в рану-поперечнополосатые мышцы-нервные окончания-ЦНС,где поражает нейроны.После их поражения проходит обратный путь до слюны,где и обнаруживается в конце инкубационного периода(1-3 мес).Продромальный период 1-3 дня(лихорадка,раздражительность,неприятные ощущения в области укуса).Возникают галлюцинации,буйство,судороги мышц,слюнотечение и появление пены изо рта.на 3-7 день-паролич-смерть.
Иммунитет неизучен,так как больные погибают
Лабораторная диагностика Исследования подлежит ткань мозга.Гистологический метод экспресс-диагностики основан на обнаружении телец Бабеша-Негри в мазках-отпечатках и гистологических срезах.Тельца окрашиваются кислотными красителями,а их зернистость-основными.Для обнаружениявирусов и их антигенов используют РИФ и биологическую пробу на мышах.Окончательную идентификацию проводят в РН,РИФ и BAF/GWH-для обнаружения РНК в биоптате мозга.Для прижизненной диагностики используют отпечатки роговицы с помощью РИФ.Возможно опреденение антител у больных в сыворотке крови с помощью ИФА,РИФ,РНГА.
Лечение и спец профилактика Эффективного лечения нет. Профилактика: антирабическая культуральная концентрированная очищенная инактивированная сухая вакцина(кокав),в состав её входит вакцинный штамм вирусаВнуково.Предупреждение инфицирование-контрольчисленности основных носителей и их иммунизация для создания для человека зоны свободной от вируса.Иммунизацию проводят при контакте и укусах больных животных.Помощь включает обработку раны и немедленное введение вакцины или применения Ig и вакцины.
№109.
ВОЗБУДИТЕЛЬ КОРИ
Корь — острая антропонозная инфекционная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, катаральным воспалением слизистых обологек верхних дыхательных путей и глаз, а также пятнисто-папулезной сыпью на коже.
Семейство: Paramyxovirida
Род: Morbillivirus
Структура(морфология) и антигенные свойства. Диаметр вириона 150-250 нм.Вирионы имеют специфическую форму. В центре вириона расположен нуклеокапсид со спиральным типом симметрии, окруженный внешней оболочкой с шиповидными отростками. Геном вируса — однонитевая, нефрагмантированная минус-РНК. Вирус обладает гемагглютинирующей и гемолитической активностью; нейраминидазы нет.
Имеет общие антигены с вирусом чумы собак и крупного рогатого скота. . Вирус содержит два самостоятельных антигенных компонента, один – гемагглютинин (Н-антиген), другой нейрамилаза (N-антиген).
КультивированиеДля культивирования вируса используется первичные культуры клеток почек обезьян и эмбриона человека.
Культивируется на первично-трипсинизированных культурах клеток почек обезьян и человека. Белок Р вызывает слияние клеток.
Резистентность. нестоек в окружающей среде; чувствителен к детергентам и дезинфектантам. При комнатной температуре он инактивируется через 3-4 ч и быстро гибнет от солнечного света, УФ-лучей.
Эпидемиология. Восприимчивость человека к вирусу кори чрезвычайно высока. Болеют в основном дети в возрасте 4-5 лет, значительно реже — взрослые, не переболевшие корью в детском возрасте. Источник инфекции — больной человек, Основной путь инфицирования воздушно-капельный, реже — контактный.
Патогенез. Входные ворота для возбудителя — слизистые оболочки верхних дыхательных путей и глаз. После репродукции в эпителиальных клетках и региональных лимфатических узлах он поступает в кровь (вирусемия) и поражает эндотелий кровеносных капилляров, что сопровождается появлением сыпи. Развиваются отек и некротические изменения тканей.
Клиническая картина. Инкубационный период составляет 8-17 сут. Вначале отмечаются интоксикация, ринит, фарингит, конъюнктивит, фотофобия и повышение температуры тела (38-39 °С). За сутки до возникновения сыпи на слизистой оболочке щек появляются мелкие пятна Бельского-Филатова-Коплика, окруженные красной каймой. Через 4-5 сут болезни на слизистых оболочках и коже появляется пятнисто-папулезная сыпь ярко-розового цвета, распространяющаяся сверху вниз: сначала на лице, шее, за ушами, на следующий день — на туловище, затем — на конечностях. Сыпь исчезает постепенно, приобретает коричневый оттенок, и шелушится. Возбудитель подавляет иммунитет, в частности активность Т-лимфоцитов, что способствует появлению осложнений в виде пневмонии, воспаления среднего уха и др.
Иммунитет. После перенесенной кори развивается стойкий пожизненный иммунитет. 2.Лабораторная диагностика кори
Материале смыв с носоглотки, соскобы с элементов сыпи, кровь, моча и в летальных случаях-мозговая ткань.
Экспресс-диагностик основана на обнаружении спецефического антигена в РИФ, а также антител класса lgM с помоәҗю ИФА. Зараженных культурах клеток с помощью РИФ, РТГА, РН и ОТ-ПЦР.
Серологической диагностики применяют РСК, РТГА, РН.
3.Лечение. Применяют иммуномодуляторы и рибавирин.
Специфическая профилактика. Детям 1-го года жизни подкожно вводят живую вакцину из аттенуированных штаммов вируса или ассоциированную вакцину (против кори, паротита, краснухи). В очагах кори ослабленным детям вводят нормальный lg человека, который эффективен при введении не позднее 7-го дня инкубационного периода.
№110.
Возбудитель полиомиелита. Таксономия и характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
Таксономия.: семейство Picornaviridae, род Enterovims, вид Poliovirus.
Структура. По структуре полиовирусы — типичные представители рода Enterovirus. РНК-содержащие вирусы.
Морфология: мелкие, просто организованные вирусы, сферической формы, состоят из одноцепочечной РНК и капсида.
Культивирование: Хорошо репродуцируются в первичных и перевариваемых культурах клеток из тканей человека и сопровождается цитопатическим эффектом. В культуре клеток под агаровым покрытием энтеровирусы образуют бляшки.
Антигенные свойства: Различают 3 серотипа внутри вида: 1, 2, 3, не вызывающие перекрестного иммунитета. Все серотипы патогенны дл человека.
Патогенез и клиника. Естественная восприимчивость человека к вирусам полиомиелита высокая. Входными воротами служат слизистые оболочки верхних дыхательных путей и пищеварительного тракта. Первичная репродукция вирусов происходит в лимфатических узлах глоточного кольца и тонкой кишки. Из лимфатической системы вирусы проникают в кровь, а затем в ЦНС, где избирательно поражают клетки передних рогов спинного мозга (двигательные нейроны). Инкубационный период продолжается в среднем 7—14 дней. Различают 3 клинические формы полиомиелита: паралитическую, менингеальную (без параличей), абортивную (легкая форма). Заболевание начинается с повышения температуры тела, общего недомогания, головных болей, рвоты, болей в горле.
Иммунитет. После перенесенной болезни остается пожизненный типоспецифический иммунитет. Иммунитет определяется наличием вируснейтрализующих антител, среди которых важная роль принадлежит местным секреторным антителам слизистой оболочки глотки и кишечника (местный иммунитет). Пассивный естественный иммунитет сохраняется в течение 3—5 недель после рождения ребенка.
Микробиологическая диагностика. Материал для исследования - кал, отделяемое носоглотки, при летальных исходах — кусочки головного и спинного мозга, лимфатические узлы.
Вирусы полиомиелита выделяют путем заражения исследуемым материалом первичных и перевиваемых культур клеток. О репродукции вирусов судят по цитопатическому действию. Идентифицируют выделенный вирус с помощью типоспецифических сывороток в реакции нейтрализации в культуре клеток. Важное значение имеет внутривидовая дифференциация вирусов, которая позволяет отличить патогенные штаммы от вакцинных штаммов, выделяющихся от людей, иммунизированных живой полиомиелитной вакциной. Различия между штаммами выявляют с помощью ИФА, реакции нейтрализации цитопатического действия вируса в культуре клеток со штаммоспецифической иммунной сывороткой, а также в ПЦР.
Серодиагностика основана на использовании парных сывороток больных с применением эталонных штаммов вируса в качестве диагностикума. Содержание сывороточных иммуноглобулинов классов IgG, IgA, IgM определяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини.
Лечение. Патогенетическое. Применение гомологичного иммуноглобулина для предупреждения развития паралитических форм ограничено. В качестве зтиотропной терапии возможно применение рекомбинантных ин-терферонов (реаферон, реальдирон, вифе-рон). Патогенетическая терапия включает дегидратацию (лазикс, диакарб); применение нестероидных противовоспалительных средств (ибупрофен, индомета-цин), сосудистых препаратов (трентал), вазоактивных нейрометаболитов (инстенон, актовегин), поливитаминов. В тяжелых случаях используют глю-кокортикоиды (дексаметазон, преднизолон). С целью купирования болевого синдрома применяют лечение по Кеньи (теплые влажные обертывания пораженных конечностей до 8 раз в день), УВЧ на пораженные сегменты спинного мозга, электрофорез с новокаином или димексидом.
Профилактика. Основной мерой профилактики полиомиелита является иммунизация. Первая инактивированная вакцина для профилактики – создавала общий гуморальный иммунитет, не формировала местной резистентности слизистых оболочек ЖКТ, не обеспечивала надежную защиту.
Пероральная живая культуральная вакцина из трех серотипов штаммов. Используют для массовой иммунизации детей, она создает стойкий общий и местный иммунитет.
Неспецифическая профилактика сводится к санитарно-гигиеническим мероприятиям.
111. Вирус гепатита С относится к семейству Flaviviridae роду Hepacivirus.
Морфология. Сложноорганизованный РНК-содержащим вирус сферической формы. Геном представлен одной линейной «+» цепью РНК, обладает большой вариабельностью.
Антигенная структура. Вирус обладает сложной антигенной структурой. Антигенами являются:
1. Гликопротеины оболочки
2. Сердцевинный антиген НСс-антиген
3. Неструктурные белки.
Культуральные свойства. ВГС не культивируется на куриных эмбрионах, не обладает гемолитической и гемагглютинирующей активностью. Резистентность. чувствителен к эфиру, УФ-лучам, нагреванию до 50С.
Эпидемиология. Заражение ВГС аналогично заражению ВГВ. Наиболее часто ВГС передается при переливаниях крови, трансплацентарно, половым путем.
Клиника: Часто встречаются безжелтушные формы, течение инфекции в острой форме, в 50 % случаев процесс переходит в хроническое течение с развитием цирроза и первичного рака печени.
Микробиологическая диагностика: Используются ПЦР и серологическое исследование. Подтверждением активного инфекционного процесса является обнаружение в крои вирусной РНК ПЦР. Серологическое исследование направлено на определение антител к NS3 методом ИФА.
Профилактика и лечение. Профилактика как при гепатите B. Используют серологический метод и ПЦР. Методами ИФА и РНГА в крови определяют маркеры гепатита В: антигены и антитела. ПЦР определяют наличие вирусной ДНК в крови и биоптатах печени. Для острого гепатита характерно обнаружение HBs антигена, НВе антигена и анти-HBc-IgM антитела.
Лечение в основном симптоматическое. Для лечения применяют интерферон и рибовирин. Специфическая профилактика – нет.
Вирус гепатита G.
Таксономическое положение вируса гепатита G остается невыясненным. Его условно относят к семейству Flaviviridae. Геном образован несегментированной молекулой +РНК. Нуклеокапсид образован по типу кубической симметрии. По набору Аг вирионов высказывают предположение о наличие, как минимум, 3 подтипов вирусов. Предположительно, вирус гепатита G является дефектным вирусом, и для его репродукции необходимо присутствие вируса гепатита С. Резервуар возбудителя – больные острым и хроническим гепатитом G и носители вируса гепатита G. Частота регистрации заболевания сравнительно невелика. В РФ частота выявления РНК вируса гепатита G колеблется от 2% в Москве до 8% в Якутии. В то же время в сыворотке крови доноров частота выявления РНК вируса гепатита G составила 1,4%. Чаще маркеры инфицирования вирусом гепатита G выявляют у лиц, получающих множественные переливания цельной крови или ее препараты, а также среди пациентов с трансплантатами. Особую группу риска составляют наркоманы (среди лиц, вводящих наркотики внутривенно, частота выявления РНК вируса гепатита G достигает 33-35%). Нарушения иммунного статуса способствует развитию длительного носительства вируса. Доказана возможность вертикального пути передачи вируса гепатита G от инфицированной матери к плоду. Гепатит G в большинстве случает протекает как микст-инфекция с вирусным гепатитом С, существенно не влияя на характер развития основного процесса. Принципы микробиологической диагностики.Маркеры репликации вируса – АТ (IgM) к Аг вируса гепатита G и вирусная РНК. Вирус-специфические IgM выявляют методом ИФА,начиная с 10-12-х суток после инфицирования; диагностические титры сохраняются в течение 1-2 мес. АТ класса IgG к Аг вируса гепатита Е появляются через месяц после перенесенного заболевания. РНК вируса выявляют в реакциях ПЦР и молекулярной гибридизации. РНК вируса можно выявлять с первых суток инфицирования; однако, в желтушном периоде обнаружить ее невозможно.
112. Аденовирусы.
Респираторные аденовирусы впервые выделены У. Роу из тканей миндалин и аденоидов у детей, в связи, с чем вирусы и получили свое название. Патогенные для человека вирусы включены в состав рода Mastadenovirus (аденовирусы млекопитающих) семейство Adenoviridae. Аденовирусы организованы по принципу кубической симметрии и не имеют суперкапсида. Геном представлен линейной молекулой двухнитевой ДНК. ДНК, связываясь с белками, формирует плотную сердцевину вируса, видимую при электронной микроскопии. Средний диаметр вириона равен 60-90 нм. Капсид состоит из 252 капсомеров, 240 из них (гексоны) образуют его грани, 12 (пентоны) – полигональные основания и прикрепленные к нему нити. Гексоны определяют токсическую активность; пентоны и нити – гемагглютинирующие свойства. Транскрипция и репликация происходят в ядре, трансляция – в цитоплазме. Эпидемиология.
Аденовирусные инфекции человека составляют 5-10% всех вирусных заболеваний, большая часть поражений приходится на детский возраст (около 75%); при этом 35-40% случаев регистрируют у детей до 5 лет, остальные – в возрасте до 14 лет. Резервуар инфекции – больной человек, вирус передается воздушно-капельным и контактным путем.
Антигенная структура.
В настоящее время насчитывается около 80 сероваров. Каждый вирион имеет не менее 7 антигенных детерминант. Гексоны содержат группоспецифические А-Аг. Пентоны содержат В-Аг, по структуре которых все аденовирусы разделяют на 3 подгруппы. Нити содержат типоспецифический С-Аг; по его структуре выделяют 41 серовар. Нуклеокапсид является комплементсвязывающим Аг, идентичным для различных сероваров.
Патогенез поражения.
Размножение вирусов происходит в клетках слизистых оболочек верхних отделов воздухоносных путей и конъюнктивы. Затем они проникают в кровоток, циркулируют в нем в течение нескольких суток, а затем мигрируют в нижние отделы дыхательного тракта. Клинические проявления.Продолжительность инкубационного периода составляет 6-9 суток. Наиболее часто отмечают ОРВИ, протекающие по типу гриппоподобных поражений. Основные возбудители – вирусы 3-го, 4-го и 7-го сероваров. Инфекции нижних отделов дыхательных путей у новорожденных сопровождаются поражениями, клинически не отличимыми от инфекций, вызываемых вирусом парагриппа 3-го типа и РС-вирусом. Основные возбудители – вирусы сероваров 1,2,3,5,6,7 и 21; более тяжелые поражения вызывают серовары 1,2 и 5.
Принципы микробиологической диагностики.
Проводят вирусоскопические и серологические методы. Материалом для исследования служат слизь из зева, отделяемое носа и конъюнктивы, кровь. Для экспресс-диагностики используют РИФ, позволяющую выявить Аг вирусов в носовом отделяемом и клетках слизистых оболочек. Выделение возбудителя проводят заражением культур первично-трипсинизированных клеток эмбриона человека. Идентификацию аденовирусов проводят по цитопатическому эффекту и в РСК, позволяющей вывить общий комплементсвязывающий Аг. Серологическую принадлежность определяют в РТГА и РН с помощью типоспецифических антисывороток. Нарастание титров вирусспецифических АТ в парных сыворотках определяют в РСК. Титры типоспецифических АТопределяют в РТГА и РН с эталонными штаммами различных сероваров в культурах клеток.
Лечение и профилактика.
Лечение симптоматическое; средства специфической лекарственной терапии отсутствуют. Для профилактики дыхательных поражений разработаны эффективные живые вакцины, включающие ослабленные вирусы доминирующих сероваров. Их широкое применение ограничено сложившимся представлением о способности аденовирусов вызывать злокачественные трансформации клеток у человека.
113. Вирус эпидимического паротита.
Эпидемический паротит, или «свинка», - острая инфекция с преимущественным поражением околоушных слюнных желез, часто сопровождающаяся эпидемическими вспышками. Возбудитель (вирус эпидемичекского паротита) выявили К.Джонсон и Р.Гудпасчер. Морфологически вирус сходен с прочими парамиксовирусами, содержит внутренний белок NP и поверхностные гликопротеины NH и F. Вирусы проявляют гемадсорбирующую, гемолитическую, нейраминидазную и симпластообразующую активность.Эпидемиология.
Основной резервуар вируса эпидемического паротита – больной человек, также известны случаи заболевания собак, заразившихся от хозяев. Возможно экспериментальное воспроизведение инфекции у приматов. Возбудитель передается воздушно-капельным путем. Заболевание регистрируют в течение всего года с увеличением заболеваемости в осеннее-зимние месяцы. Наиболее подвержены заболеванию дети в возрасте 5-10 лет, мальчики болеют чаще, чем девочки. Вирус эпидемического паротита чувствителен к действию высоких температур, инсоляции и дезинфектантов.
Антигенная структура.
Иммуногенные свойства проявляют белок NP (цитоплазматический S-Аг) и поверхностные NH – и F- гликопротеины. Антигенная структура стабильна; известен 1 серовар вируса эпидемического паротита.
Патогенез поражений.
Первоначально возбудитель размножается в эпителии носоглотки, затем проникает в кровоток и в период вирусемии проникает в различные органы – околоушные железы, яички, яичники, поджелудочную, щитовидную железы, головной мозг и другие органы.
Клинические проявления.Инкубационный период эпидемического паротита составляет 14-21 суток; типичная форма заболевания проявляется как одно- или двухсторонний паротит, сопровождающийся лихорадкой. Инфицирование слюнных желез происходит путем гематогенного распространения вируса (вирусемии), возникающего через 3-5 суток после проявления симптомов. Вирусемия приводит к диссеминированию вируса по всему организму; возможны серозные менингиты, эпидидимоорхиты (регистрируют у 20-35% мальчиков постнубератном периоде) и др. Выздоровление сопровождается развитием стойкой невосприимчивости к повторным заражениям.
Принципы микробиологической диагностики.
Применяют вирусологические и серологические методы. Материалы для исследования – слюна, СМЖ, пунктаты околоушных желез и моча. Возбудитель выделяют заражением 7-8-суточных куриных эмбрионов и культур клеток фибробластов кур. Идентификацию вируса эпидемического паротита проводят в РТГА (агглютинирует эритроциты кур, уток, морских свинок и собак), РН, РСК и РИФ. Сывороточные АТ определяют в парных сыворотках в РСК или РТГА.
Лечение и профилактика.
Средства специфической химиотерапии отсутствуют. Симптоматическое лечение оказывает благоприятный эффект. Для специфической профилактики применяют живые вакцины; иммунизацию проводят однократным подкожным введением. Для лечения и поздней профилактики используют специфический γ-глобулин, но он малоэффективен при лечении орхитов.
114. Возбудитель ветряной оспы.
Такcономия. Сем. Herpesviridae Род Varicelljvirus
Морфология. Вирус — овальной формы. Содержит ДНК, окруженную икосаэдрическим капсидом, и покрыт оболочкой с гликопротеиновыми шипами. Оболочка сформирована из внутреннего слоя ядерной мембраны клетки. Между капсидом и оболочкой находиться тегумент, содержащий вирусные белки для инициации репликации. Двунитева ДНК вирионв состоит из 2 фрагментов: Короткого S, и длинyого L.
Культивирование. Размножается в человеческих диплоидных фибробластах с образованием внутриядерных включений. Вызывает цитопатический эффект, образует гигантские многоядерные клетки — симпласты.
Резистентность. Малоустойчив в окружающей среде, термолабилен, чувствителен к жирорастворителям и дезинфицирующим средствам.
Эпидемиология.
Источник инфекции — больной человек, представляющий эпидемическую опасность с конца инкубационного периода и до отпадения корочек. Возбудитель распространяется воздушно-капельным путём. Заболевают в основном дети в возрасте от 6 месяцев до 7 лет. Взрослые болеют ветряной оспой редко, поскольку обычно переносят её ещё в детском возрасте. У лиц с тяжелым иммунодефицитом различной этиологии (в редком случае при ВИЧ-инфекции и у пациентов после пересадки органов; часто при акклиматизации, снижении иммунитета, вызванном сильным стрессом) возможно повторное заражение.
Патогенез.
Из зева вирус проникает в кровяное русло и фиксируется в эпителиальных клетках кожи и слизистых оболочек, вызывая воспалительные изменения с вакуолизацией и дискомплексацией шиловидного слоя, гиперплазией и образованием внутриэпидермальных пузырьков. Различие стадий их развития обуславливает полиморфизм сыпи. В редких случаях наблюдаются специфические поражения легких, печени, почек, костного мозга, коркового вещества, надпочечников, поджелудочной и вилочковой желез. Обратное развитие пузырьков происходит путем всасывания жидкости и образования сухой корочки Поврежденный эпидермис в большинстве случаев восстанавливается без образования рубцов.
Иммунитет. Пожизненный клеточный гуморальный иммунитет.
Диагностика.
Материал: отделяемое носоглотки и кровь. Вирус можно выявит в мазках отпечатках, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Его культивируют на культуре клеток эибриона человека. Идентификацию вируса и определение антител в сыворотке крови больных проводят с помощью РИФ, ИФА, и РН.
Лечение. Элементы сыпи смазывают 1- 2 % водным раствором марганцовки или зеленки. Применияю ацикловир, видаробин, имуномодуляторы.
Детям, контактировавшим с больными, вводят гамма-глобулин. Их не допускают в детские учреждения в течение 3 недель. С профилактической целью больного изолируют на период до дня подсыхания везикул. Дети, не болевшие ветряной оспой, не допускаются в детские учреждения с 11 по 21-й день после последнего контакта с больным ветряной оспой. Детям, ослабленным тяжелыми болезнями, бывшим в контакте с больным ветряной оспой, вводят иммуноглобулин (по 3 мл внутримышечно).
115. Возбудитель геморрагической лихорадки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
Таксономия. Сем. Bunyaviridae род. Nairovirus.
Морфология. Высокоорганизованный вирус сферической формы. Геном состоит из однонитевой плюс — РНК, окруженный капсидом с кубическим типом симметрии.
Культивирование. Вирусы культивируют во многих первичных перевиваемых культурах клеток, а так же путем заражения куриных эмбрионов на ХАО и в желточный мешок. Универсльной моделью вируса является интрацеребральное заражение новорождённых белых мышей, вызывающие у них развитие паралича.
Устойчивость. Небольшая устойчивость вируса к действию физических и химических факторов, в организме переносчиков он сохраняет жизнеспособность в широком диапазоне температур от 150 до 30, что способствует его широкому распространению. Вирус проявляет высокую резистентность к действию кислых значений рН, что важно при алиментарном пути заражении.
Эпидемиология.
Резервуаром вируса являются дикие мелкие млекопитающие: лесная мышь, малый суслик, заяц-русак, ушастый еж. Переносчиком и хранителем являются клещи, преимущественно из рода Hyalomma. Заболеваемость характеризуется сезонностью с максимумом с мая по август (в нашей стране).
Патогенез. Воротами инфекции является кожа в месте укуса клеща или мелкие травмы при контакте с кровью больных людей. На месте ворот инфекции выраженных изменений не наблюдается. Вирус проникает в кровь и накапливается в клетках ретикулоэндотелиальной системы. При вторичной более массивной вирусемии появляются признаки общей интоксикации, поражение эндотелия сосудов и развивается разной выраженности тромбогеморрагический синдром. Патологоанатомические изменения характеризуются множественными геморрагиями в слизистые оболочки желудка и кишечника, наличием крови в просвете, однако воспалительные изменения отсутствуют. Головной мозг и его оболочки гиперемированы, в них обнаруживаются кровоизлияния диаметром 1-1,5 см с разрушением мозгового вещества. По всему веществу мозга выявляют мелкие кровоизлияния. Кровоизлияния также наблюдаются в легких, почках и др.
Клиника.
Инкубационный период от одного до 14 дней. Чаще 2-9 дней. Болезнь развивается остро. На первой стадии резко, за короткое время повышается температура до 39-40 градусов , начинается головная боль, озноб, иногда очень сильный, покраснение лица, слизистых оболочек. Возникают признаки общей интоксикации организма (сильная слабость, боли в мышцах, суставах, тошнота, рвота). Через 2-4 дня начинается вторая, геморрагическая стадия заболевания. Состояние больного резко ухудшается. Появляются кровоизлияния на коже и слизистых оболочках в виде сыпи, пятен, гематом. Наблюдается повышенная кровоточивость десен, мест инъекций. Возможны носовые, маточные кровотечения. Начинаются боли в животе, печени, понос, рвота, возможна желтуха, олигурия. Заболевание длится 10-12 дней, но больные остаются сильно истощенными еще на протяжении 1-2 месяцев. Иногда вторая стадия менее выражена, и заболевание остается не выявленным, так как начальные симптомы сходны с таковыми при острых респираторных инфекциях. Как осложнения могут наблюдаться сепсис, отек легкого, очаговая пневмония, острая почечная недостаточность, отит, тромбофлебиты. Летальность составляет от 2 до 50 %.
Диагностика основана на выделении вируса из крови больных и внутренних органов погибших путем заражения новорожденных белых мышей культур клеток с идентификацией в РИФ, а так же на обнаружении антител в парных сыворотках с помощью серологических реакций. Применяется ПЦР. Экспресс — диагностика вируса в крови, аутопсийном материале и переносчиках осуществляется с помощью РИФ.
Лечение и профилактика.
Больных обязательно изолируют в инфекционном отделении стационара. Лечение симптоматическое и этиотропное. Назначают противовоспалительные препараты, мочегонные. Исключают применение препаратов, усиливающих поражение почек, например, сульфаниламиды. Также назначают противовирусные препараты (рибавирин). В первые 3 дня вводят гетерогенный специфический лошадиный иммуноглобулин, иммунную сыворотку, плазму или специфический иммуноглобулин, полученные из сыворотки крови переболевших или привитых лиц. Специфический иммуноглобулин используется для экстренной профилактики у лиц, соприкасающихся с кровью больного.
Для предотвращения заражения основные усилия направляют на борьбу с переносчиком заболевания. Проводят дезинсекцию помещений для содержания скота, предотвращают выпас на пастбищах, находящихся на территории природного очага. Людям в индивидуальном порядке следует использовать защитную одежду. Обрабатывать одежду, спальные мешки и палатки репеллентами. При укусах клеща в зоне обитания немедленно обратиться в медицинское учреждение за помощью. Для лиц, которые собираются въехать на территорию Юга России рекомендуется профилактическая вакцинация. В лечебных учреждениях следует учитывать высокую контагиозность вируса, а также его высокую концентрацию в крови больных. Поэтому больных необходимо помещать в отдельный бокс, а обслуживание доверять только специально обученному персоналу.
116. Возбудители глубоких (системных) микозов: Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum, Criptococcus neoformans, Blastomyces dermatitidis.
Свойства.Все эти грибы являются диморфными. Имеют вид крупных толстостенных клеток сферической формы, в некоторых. случаях почкующихся (возбудитель криптококкоза, гистоплазмоза, бластомикоза) или имеющих капсулу(возбудитель криптококкоза). При выращивании на агаре Сабуро при 20-250С через 7-10 дней образуют нитчатый мицелий с артроспорами(C. Immitis), микро- и макроконидии (H. Capsulatum), базидноспорами (C. Neoformans), круглым конидиями( B.dermatitidis), хламидиоспорами(P.Brasilensis). При культивировании на кровяном агаре при 370С могут расти в тканевой форме. Проявляют различную биохимич. активность:ферментирует углеводы(C. Immitis), восстанавливают нитраты в нитриты (H. Capsulatum), образуют уреазу (Cr. Neoformans).
Антигенные свойства. Вещества, входящие в состав клеток грибов, являются антигенами. Вызывают выработку антител.
Патогенез. Поражаются внутренние органы.
Пути передачи. Основной путь – аэрогенный. Возбудитель попадает в легкие, где развивается первичный очаг воспаления.
Микробиологическая. диагностика. Патологический материал (гной, мокрота, моча, промывные воды бронхов, пунктат лимфатических узлов, костного мозга, кожи печени, селезенки)исследуют микроскопическим методом. Микроскопируют нативные препараты (для выявления C. Immitis, Cr. Neoformans), мазки, окрашенные фуксином, по Граму, Романовскому-Гимзе, методом серебрения (для выявления H. Capsulatum); нативные препараты по Бурри (для выявления капсулы Cr. Neoformans). Гистологич. срезы окрашивают фаз-методом. Идентификацию в мазках и гистологич. срезах проводят с помощью ИФА.
Чистую культуру выделяют засевая материал на кровяной агар и глюкозный агар Сабуро. Инкубируют при 350С и 20 0С неск-ко недель. Идентифицируют по биохимич, морфологич,культуральным свойствам. Чистую культуру выделяют и биологич. методом ,заражая лабораторных животных(белых мышей,кроликов,морских свинок).Через 2 месяца при вскрытии животных исследуют мазки-отпечатки из пораженных органов(печень,селезенка) и производят посев этих органов на питат. среды. Серологич. Метод диагностики применяется для выявления антител в сыворотке крови. Они определяются с помощью РСК,РНА с частицами латекса и в реакции иммунодиффузии(реакции преципитации в геле).Для постановки реакций применяют антигены,выделенные из соответствующих грибов-гистоплазмин, бластомицин и др. Аллергические реакции проявляются в виде чувствительности замедленного типа(проявляются в кожно-аллергических пробах).
Профилактика .Вакцинопрофилактика не проводится. Профилактика глубоких микозов заключается в предупреждении и своевременной санации микротравм. Некот. эффект могут давать снижение запыленности воздуха, увеличение площади зеленых газонов. Опрыскивание инфицированной почвы раствором формальдегида может привести к гибели грибов рода Histoplasma.
Лечение.Применяется амфотерицин В, кетоконазол, при поражении ЦНС – флуконазол.
117.Возбудители дерматомикозов (эпидермомикозы).
Более распространенными являются дерматомикозы-эпидермофития,трихофотия,фавус. Они развиваются после заражения грибами – дерматофитами. Они широко распространены в природе. Паразитирует на коже, волосах, в ногтях, реже во внутренних органах человека и животных. Наиболее распространенной является эпидермофития(воз-ль Epidermophyton floccosum).Поражаются кожа стоп, межпальцевые и крупные складки тела, ногти, никогда не поражаются волосы.
Трихофития или «стригующий лишай» (возб-ль Trichophyton tonsurans,T..rubrum)- поражаются волосы (с образованием плешин), ногти и верхние слои кожи. Больного беспокоит зуд.
При микроспории (возб-ли Microsporum ferrugineum, М. canis)-поражаются волосы, кожа, реже ногти, волосы обламываются и покрываются беловатыми чехлами.
При фавусе (возб-ль Тг. Schonleinii) – поражаются волосы, кожа головы (с выпадением волос),ногти. На коже головы образуются желтого цвета щитки, которые сливаются корку, издающую нередко мышиный запах.
Свойства. Не относятся к диморфным грибам. В кератинизированных тканях образуют только гифы и артроспоры. На глюкозном агаре Сабуро при культивировании при 200С в течении 1-3 недель образует септированный мицелий со спиралями, артроспорами, хламидоспорами, макро- и микроконидиями. Виды различаются по пигментации и форме колоний. Дерматофиты образуют пушистые колонии с зеленовато-желтым, оранжевым пигментом. Они содержат эндотоксины. Антигенные свойства выражены слабо. Гликопротеиды клеточной стенки дерматофитов является аллергенами.
Микробиологическая диагностика. Материал для исследования: соскобы с кожи и ногтей, пораженные волосы).Исследуемый материал помещают в каплю 10-20% раствора КОН на предметном стекле, закрывают покровным стеклом и микроскопируют. В кожных и ногтевых пластинках обнаруживаются ветвящиеся гифы или цепочки артроспор. Возб-ли микроспории образуют плотный чехол вокруг волоса из мозаично располагающихся спор; возб-ли трихофитии обр-ют параллельные ряды спор снаружи; При фавусе в волосе обнаруживают тонкие и широкие гифы, споры круглой формы, пузырьки воздуха. Идентификация дерматофитов основана на изучении культур, полученных на среде Сабуро по морфологическим особенностям мицелия и спор. При ультрафиолетовом облучении пораженных волос наблюдается светло-зеленое свечение.
Профилактика: Специфическая: отсутствует. Неспецифическая профилактика заключается в соблюдении правил личной гиены, стерилизации инструментов, эффективном лечении больных и уменьшении контактов с инфицированным материалом.
Лечение. Заключается в удалении инфицированных и омертвевших структур эпителия (выщипывание, стрижка) и местной обработки головы противогрибковыми препаратами. Эффективны микозолоновая мазь, ундециновая кислоа, салициловая и бензойная мазь.
118.Возбудители подкожных микозов(субкутанные): Sportrichum schenckii (возб-ль споротрихоза), Fonsecaea compacta, Fonsecaea pedrosoi, Fonsecaea dermatitidis(возб-ль хромомикоза), Pseudoallescheria boydii(возб-ль мадуромикоа). Они широко распространены в природе,обитают в почве, на растениях, древесине.
Свойства. Характеризуются диморфизмом. В патологическом материале от больного возбудители споротрихоза и хромомикоза обнаруживаются в дрожжевой форме в виде округлых клеток, делящихся почкованием. Клетки возбудителя хромомикоза характеризуются наличием темно-коричневого пигмента. При мадуромикозе в гное обнаруживаются белые, красные или черные гранулы, состоящие из переплетения септированных гиф. При культивировании на среде Сабуро при 200С через 3-5 дней(возб. споротрихоза) и через 5-12 дней (возб хромомикоза) грибы образуют колонии, состоящие из нитей несущих конидии или аскоспоры. Токсины у них не обнаружены.
Микробиологическая диагностика. при лабораторной диагностике применяют микроскопический, микологический. и серологический. (только споротрихозы) методы. Материал для исследования: гной и биопекрованные ткани из очага поражения. При споротрихозе мазки исследуют по реакции иммунофлюоресценции, при хромомикозе патологический материал помещают в 10% раствор едкого калия и исследуют под покровным стеклом для выявления темных округлых грибковых клеток. При мадуромикозе используют микроскопический метод. Обнаружение гранул помогает дифференцировать возбудителя. Исследуемый материал засевают на среду Сабуро и культивируют при 20 и 370С. Идентифицируют по биохимическим, морфологическим, культуральным свойствам. При споротрихозе выявляют антитела в сыворотке крови по реакции агглютинации и непрямой агглютинации с частицами латекса, нагруженных антигеном.
Профилактика и лечение: Для профилактики нужно носить обувь, предупреждать травмы и тщательно обрабатывать раны. Спец. профилактика не разработана.При подкожно – лимфатических. формах споротрихоза применяют йодид калия в течение нескольких недель. При системных поражениях применяют внутривенно амфотерицин В. Для лечения хромомикоза применяют флуцитозим. При мадуромикозе хирургическое удаление свежих органов поражения может предупредить распространение патологический процесса. Эффективных химиопрепаратов нет.
119.Возбудители кандидоза: Candida albicans, С. Krusei, С.parasiloses.Грибы рода Candida вызывает в соответствующих условиях различные острые или хронические инфекции, протекающие локально или в генерализованной форме. Заболевание может возникнуть эндогенным путем. Основными факторами появления кандидозных поражений, являются различные эндокринные нарушения, общее истощение организма, антибиотиков и др. противомикробных препаратов.
Свойства: Это диморфные грибы. В патологическом материале и в культурах образуют овальные почкующиеся дрожжевые клетки и псевдомицелий. C. Albicans хорошо растет на обычных питательных средах при 20 и 350С с образованием гладких кремовых колоний, с возрастом они становятся шероховатыми. При выращивании C. Albicans на кукурузном, рисовом, картофельном агаре стимулируется образование терминальных хламидоспор. C. Albicans ферментирует глюкозу, мальтозу и сахарозу. Имеет 3 серогруппы: А,В,С. Факторами патогенности являются полисахаридные и липидные компоненты, эндотоксин, плазмокоагулаза, гемолизины. Различают: 1)кандидозы слизистых оболочек и кожи;2)висцеральные формы кандидоза;3)кандидозный сепсис. Чаще всего встречаются поражения слизистых оболочек (ротовой полости, желудочно-кишечного тракта).Среди висцеральных кандидозов чаще встречаются поражения легких. Кандидозный сепсис протекает всегда тяжело и нередко заканчивается смертью больных.
Лабораторная диагностика. Применяют микроскопический, микологический и серологический методы. Для выявления псевдомицелия и почкующихся клеток исследуют окрашенные по Граму мазки, приготовленные из экксудатов, мокроты, тромбов. Культивируют на агаре Сабуро, сусло-агаре при 20 и 370С. Идентификацию культуру проводят на основании особенностей роста мицелия, образования хламидоспор, ферментами углеводов. Серодиагностику проводят с помощью реакций агглютинации, преципитации,РСК и иммунофлюоресценции. Для установления диагноза кандидоза многократно высевают патологический материал на питательные среды. Нарастающее количество колоний, антител в сыворотке крови, подтверждают диагноз. Для кожно-аллергичесих проб применяют различные аллергены.
Профилактика и лечение. Предупреждение нарушения состава нормальной микрофлоры и нормальных механизмов защиты. В качестве специфических профилактических средств иногда используют убитые вакцины и аутовакцины. Из химиотерапевтических средств применяют полиеновые антибиотики: нистатин, амфотерицин В, некоторые антисептики.
120.Возбудитель токсоплазмоза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
Таксономия: Возбудитель — Toxoplasma gondii, относится к типу Apicomplexa, классу Sporozoa, отряду Eucoccidiida.
Характеристика возбудителя. Toxoplasma gondii — облигатный внутриклеточный паразит. В жизненном цикле токсоплазм различают несколько морфологических форм: ооцисты, псевдоцисты, цисты, тахизоиты.
Ооцисты формируются в результате полового размножения паразита в клетках слизистой оболочки кишечника кошки— окончательных хозяев токсоплазм: разнополые гаметоциты сливаются с образованием ооцисты. Ооцисты выделяются с фекалиями кошки. Попав в кишечник человека, они освобождают спорозоиты, которые распространяются по лимфатическим сосудам, размножаются внутриклеточно бесполым путем. Размножившиеся паразиты (тахизоиты) внедряются затем в другие клетки. Они обнаруживаются при острой стадии инфекции.
Тахизоиты имеют характерную форму апельсиновой дольк, при окраске по Романовскому—Гимзе цитоплазма голубого цвета, а ядро — рубиново-красного.
Псевдоцисты не имеют оболочки; они образуются в пораженных клетках, макрофагах.
Цисты образуются внутри клеток хозяина. Они имеют плотную оболочку.
Культивирование: в куриных эмбрионах и на культурах тканей, а также путем заражения мышей и других животных.
Резистентность: Ооцисты могут в течение года сохранять жизнеспособность в окружающей среде. Токсоплазмы быстро погибают при высокой температуре.
Эпидемиология. Источники инвазии виды домашних и диких млекопитающих, птицы. Заражение человека происходит алиментарным путем в результате употребления в пищу термически слабо обработанных продуктов, содержащих в псевдоцистах и цистах трофозоиты паразита.
Патогенез и клиника. Токсоплазмы, проникшие в организм, достигают с током лимфы регионарных лимфоузлов, размножаются в них (тахизоиты), проникают в кровь, разносятся по организму, попадая в клетки ретикулоэндотелиальной системы всех внутренних органов, где образуют псевдоцисты и цисты. Токсоплазмы поражают нервные клетки, печень, почки, легкие, сердце, мышцы, глаза. Клиническая картина разнообразна: от умеренной лимфоаденопатии до лихорадки, сыпи, гепатоспленомегалии, фарингита, менингоэнцефалита, пневмонии и др.
Иммунитет: клеточный и гуморальный иммунитет. Развивается ГЗТ.
Микробиологическая диагностика: Проводится микроскопия мазка (из биоптатов крови, ликвора, пунктатов лимфоузлов), окрашенного по Романовскому—Гимзе. Реже применяется биологический метод: мыши погибают через 7—10 дней после парентерального введения им инфицированного материала (крови, ликвора) больных людей. Возможно культивирование токсоплазм на куриных эмбрионах.
Основным в диагностике токсоплазмоза является серологический метод: выявление IgM-антител свидетельствует о ранних сроках заболевания. IgG-антитела достигают максимума на 4—8й неделе болезни. Применяются РИФ, РИГА, РСК. Используют также аллергический метод — внутрикожную пробу с токсоплазмином, которая положительна с 4-й недели заболевания и далее в течение многих лет.
Лечение: комбинация пириметамина с сульфаниламидами.
Профилактика: неспецифическая - гигиенические требования (мытье рук перед едой; термическая обработка мяса).
Вопрос 121
МАЛЯРИЙНЫЙ ПЛАЗМОДИЙ – PLASMODIUMMALARIAE
Включает более 100 видов, 4 из которых патогенны – vivax(трехдневная малярия), malariae (четырёхдневной), falciparum (тропическая малярия), ovale(возбудитель малярии овале).
Возбудители паразитируют в эритроцитах и других клетках. По Романовскому-Гимзе цитоплазма окрашивается в голубой цвет, ядро - в красно-фиолетовый.
Жизненный цикл
В организме человека происходит бесполая стадия – шизогония, в организме комаров – половая стадия (спорогония).
Спорогония происходит в клетках эпителия ЖКТ комара, её продолжительность 1-3 недели. Происходит многократное деление ооцист с образованием веретенообразных спорозоитов – подвижных клеток, диссеминирующих по всему организму насекомого.
Тканевая шизогония происходит в гепатоцитах и продолжается 1-2,5 нед. Уже через час после укуса комара спорозойты проникают с кровотоком в клетки печени, где происходит их размножение и деление. В рез-те деления образуются мерозойты, разрушающие гепатоциты и проникающие в кровоток.
Эритроцитарная шизогония происходит после проникновения мерозоитов в эритроциты путём эндоцитоза, где образуется псевдовакуоль. Затем мерозоиты превращаются в трофозоиты (бесполые формы), утилизирующие гемоглобин. Юныетрофозоиты содержат ядро с одним хроматиновым зерном и внешне напоминают кольцо. Незрелыетрофозоиты имеют амёбовидную форму, а трофозоитыvivax способны передвигаться внутри эритроцитов. У зрелыхтрофозоитов ядра делятся, образуются многоядерные шизонты, дающие новое поколение мерозоитов. Выход мерозоитов из эритроцита сопровождается его разрушением. Цикл развития для вида malariae – 72 часа, для других видов – 48 часов.
Vivax–полувзрослый трофозоит подвижен, имеет в эритроците форму амёбы с псевдоподиями. Содержит мелкую кирпично-красную зернистость. На 3-4 день болезни в крови больных появляются гамонты.
Ovale– эритроциты увеличиваются в размерах, деформированы. Слабее воспринимают окраску. Один конец вытягивается и становится бахромчатым. Такие эритроциты имеют крупную и редкую зернистость Джеймса.
Malariae– в эритроците 1 трофозоит в стадии кольца. Полувзрослыйтрофозоит имеет лентовидную форму. 6-12 мерозоитовраспологаются упорядоченно вокруг пигмента, обычно в виде розетки.
Falciparum– в пораженных эритроцитах единичные крупные розово-фиолетовые пятна (Мауэра).В периферической крови – кольцевидные трофозоиты в виде полулуний.
Факторы патогенности: Апикальный комплекс, способствующие инвазии; поверхностные антигены для адгезии; специфическая протеаза гемоглобина.
Эпидемиология
Основной механизм – трансмиссвный, через укусы самки комаров рода Anopheles. Человек - промежуточный, а комар – окончательный хозяин паразита. Восприимчивость высокая. Тропический и субтропический климат.
Иммунитет – нестойкий видоспецифический, нестерильный. Возможны повторные заболевания.
Патогенез, клиника
Массовая гибель эритроцитов. Ведущий симптом заболевания – лихорадка. Главные патогенетические механизмы – гемолиз, анемия, гиперкоагуляция. Длительность инкубационного периода – от 6-40 суток до 6 месяцев и даже нескольких лет. Продромальный период – недомогание, слабость, головная боль - 2-3 дня. Лихорадка характеризуется повышением температуры тела до 38-41 гр. Злокачественные формы малярии: церебральная форма, черноводная лихорадка, алгидная форма. Частое осложнение – разрыв селезёнки.
Микробиологическая диагностика
Основа диагностики – микроскопия препаратов тослтой капли и мазков из крови, окарешенных по Романовскому-Гимзе или по Райту. При этом эритроциты разрушаются. Если паразиты не обнаружены в крови, через каждые 8 часов исследования мазков крови повторяют. Серологический метод используют лишь со второй недели заболевания – непрямая РИФ, ИФА, РПГА. Для обнаружения ДНК паразита – ДНК-гибридизация и ПЦР. Экспресс-диагностика – исследование препаратов толстой капли (препараты окрашивают без фиксации).
Лечение
Антибиотики и химиопрепараты. Производные 4-аминохинолина (хлорохин, гидроксихлорохин), 8-аминохинолина (примахин), хинин, сульфаниламиды.
Профилактика
Эффективные средства вакцинопрофилактики отсутствуют. Их замещают химиопрофилактикоймефлохин, саварин, хлорохин, примахин. Применяют до въезда в очаг и в течение 4 недель после выезда из него.
Использование средств индивидуальной защиты – репелленты, сетки и др.
Вопрос 122
АМЁБИАЗ – ENTAMOEBAHYSTOLYTICA
Выделяют инвазивные (большая вегетативная и тканевая) и неинвазивные формы.
Неинвазивная просветная форма – основная форма существования паразита, выделяемая у больных хроническим амебиазом. У больных острой формой её не выделяют. Движение замедленное, ложноножки мелкие. Для идентификации возбудителя необходимо исследование образцов, полученных после глубоких промываний, или обследование последней порции испражнений после приёма слабительных средств.
Инвазивная большая вегетативная форма (патогенная) – проникает в стенку в стенку толстой кишки, вызывая специфические поражения. Форма представлена крупными клетками с чётко различимыми экто- и эндоплазмой. Имеет псевдоподии, может фагоцитировать эритроциты. Обычно возбудитель выделяют в свежих испражнениях при остром амебиазе.
Цисты – неподвижные круглые прозрачные образования. Иногда в них заметны палочковидные или хроматойдные тельца. Цисты окрашивают раствором Люголя., выявляя 4 окрашенных ядра в виде колец.
Жизненный цикл
Пассивно передвигаясь с кишечным содержимым, организмы при определенных условиях образуют цисты. Цисты попадают в воду и с ней проникают в организм человека. В тонкой кишке оболочка цист растворяется, каждое ядро делится и образуется восьмиядерная амёба, дающая начало дочерним особям.
Внекишечный амебиаз развивается при проникновении амёб с током крови в печень, лёгкие, головной мозг и др. органы.
Эпидемиология
Ист инфекции – человек. Болеют люди старше 5 лет. Механизм – фекально-оральный. Пути – алиментарный, водный, контактно-бытовой. Распространению цист способствуют мухи и тараканы.
Иммунитет нестойкий. Антитела образуются только к тканевым формам.
Патогенез
Вирулентность возбудителя нестабильна. Выделяют некротоксин, вызывающий коагуляционный некроз прилежащих тканей. Некротизированные ткани распадаются, образуя язвы с подрытыми краями. Из лимфо- и кровотока возбудитель может проникать в печень и др. органы.
Характерны сильные боли в животе, лихорадка и диарея с примесью крови и слизи. Характерный признак – жидкий стул, полностью окрашенный кровью.
Микробиологическая диагностика
Материал - испражнения, содержимое абсцессов. Препараты окрашивают по Хайденхайну. При выявлении цист – раствором Люголя. Специфические антитела выявляются в РИФ, РГА, ИФА. ПЦР позволяет определить в фекалиях участки ДНК.
Лечение
Метронидазол, тинидазол, хлорохин, эметин, мексаформ. В тяжёлых случаях проводят коррекцию водно-электролитного баланса и переливание донорской крови.
Профилактика
Выявление цистовыделителей и носителей амёб. Общесанитарные мероприятия.
125. Исследование воздуха аптек
Пробы воздуха отбирают в следующих помещениях:
в асептическом блоке, стерилизационной;
в ассистентской, фасовочной, комнате дефектара и материальной;
в моечной;
в зале обслуживания.
Методика исследования воздуха.
Доставленные чашки с посевами на питательном агаре и желточно-солевом агаре инкубируют при 37°С в течение 24 часов, посевы на среде Сабуро инкубируют при 22 - 28°С в течение 4 суток.
Для определения:
общей бактериологической обсеменённости – посевы просматривают через 48 часов, подсчитывают количество выросших колоний, производят пересчет на 1 м³.
количественного содержания золотистого стафилококка – посевы просматривают на желточно-солевом агаре после 48-ми часовой инкубации. Подозрительные колонии подвергают идентификации. После чего производят пересчет полученных результатов на 1 м³ воздуха.
количества плесневых и дрожжевых грибов – посевы инкубируют 96 часов, затем подсчитывают количество выросших колони, производят пересчет на 1 м³
Наименование помещения Условия работы Общее количество колоний микроорганизмов в 1 м³ воздуха Количество золотистого стафилококка в 1 м³ воздуха Количество плесневых и дрожжевых грибов в 1 м³ воздуха
Асептический блок, стерилизационная (чистая половина) До работы Не выше 500 Не должно быть в 250 л Не должно быть в 250 л
После работы Не выше 1000 Не должно быть в 250 л Не должно быть в 250 л
Асептическая, фасовочная, дефектарная, материальная До работы Не выше 750 Не должно быть в 250 л Не должно быть в 250 л
После работы Не выше 1000 Не должно быть в 250 л Не должно быть в 250 л
Моечная Во время работы Не выше 1000 Не должно быть в 250 л До 12
Зал обслуживания Во время работы Не выше 1500 До 100 До 12
126. Исследование посуды, пробок, прокладок
Аптечную посуду для розлива инъекционных растворов и глазных капель отбирают в момент приготовления их, в количестве трех штук одинаковой ёмкости. Флаконы доставляют в лабораторию в укупоренном виде, используя при этом пробки и прокладки, для отпуска лекарственных средств.
Пробки (корковые, полиэтиленовые) и прокладки отбирают в момент приготовления инъекционных растворов и глазных капель пинцетом и помещают по пять штук в широкогорлые стерильные колбы или банки с последующим закрытием стерильными ватно-марлевыми пробками и бумажными колпачками.
Фильтровальные воронки, пипетки, мерные колбы, цилиндры, используемые для приготовления инъекционных растворов, контролируют путём ополаскивания их 10 см³ стерильной водопроводной воды.
Подготовка к исследованию: три одноимённых флакона ополаскивают в 10 см³ стерильной водопроводной воде. (Воду из флакона во флакон переливают над пламенем горелки).
Определение в смывной жидкости:
Количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных бактерий (число колоний, установленное в 1 см³ смывной жидкости, умножают на 10, что соответствует содержанию бактерий на всей смывной поверхности 3-х одноименных предметов).
Наличие бактерий группы кишечных палочек: 8 см³ оставшейся смывной жидкости засевают в 1 см³ при 37°С 188 – 24 часов.
Интерпретация результатов бактериологических исследований:
количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных бактерий не должно превышать 150 колоний с 3-х флаконов, 5-ти пробок, 5-ти прокладок (или в 10 см³ смывной жидкости);
бактерий группы кишечной палочки не допускается.
127. Исследование воды для приготовления лек средств
Отбирают в количестве 500 см³ в стерильные бутылки, с последующим закрытием ватными пробками и бумажными колпачками. Пробы отбирают из бюретки, конец которой предварительно обжигают ватой, смоченной спиртом. При неудовлетворительных результатах анализа пробы проводят из приёмника.
При наличии в аптеке трубопровода для дистиллированной воды, отбор проб осуществляют из бюретки над столом ассистента и дефектара.
Определение количества мезофильных аэробных и факультативных анаэробных бактерий в 1 см³: исследуемую воду вносят по 1 см³ в две параллельные чашки Петри, которые затем заливают питательным агаром и выдерживают 24 часа при температуре 37°С и 24 часа при комнатной температуре. Затем подсчитывают число выросших колоний как на поверхности, так и внутри питательного агара. (При вычислении результатов анализа выводят среднее арифметическое из числа колоний, выросших на обеих чашках.);
Определение количества колоний плесневых и дрожжевых грибов: исследуемую воду засевают на поверхность двух чашек Петри по 0,5 см³ со средой Сабуро. Инкубируют при температуре 20 - 22°С в течение 3 – 4 суток. Затем подсчитывают число колоний плесневых и дрожжевых грибов на обеих чашках.
Результаты оценивают по общему количеству непатогенных микроорганизмов, путём суммирования числа бактерий, выросших на чашках с питательным агаром и на среде Сабуро.
128.Источники и пути загрязнения лек.средств.
Объектами фарм анализа являются не только медикаменты, но и лекарственное сырье,используемое для изготовления различных фармаевтических препаратов, от степени чистоты которого зависит качество лек. Средств.
Погчти все лек.вещества содержат те или иные примеси посторонних веществ. Загрязнение лекарственных веществ различными примесями может не только снижать его терапевтический эффект, но и вызывать Нежелательное побочное действие лекарства. Особенно опасны ядовитые примеси которые могут вызывать отравление организма.
Причины возникновения примесей в лек.веществах могут быть различныи носят вполне закономерный характер. Это и плохая очистка исходного сырья и побочные продукты синтеза, и механическипе загрязнения(остатки фильтрующих материалов – ткань, фильтровальная бумага, асбет и т.д.), остатки растворителей (спирт, вода и др.). источником загрязнения лек.веществ могут быть примеси материалов, из которых сделана аппаратура, применяемая для изготовления препарата. Металлическая аппаратура может служить источником таких опасных примесей в лекарственном веществе, как свинец (из посуды), железо, медь, иногда цинк и самая опасная примесь – мышьяк. Примеси могут возникнуть и при нарушении необходимых условий хранения лекарств. Так, например, при нарушении правил хранения хлороформа для наркоза(на свету, с доступом воздуха) происходит его окисление; продукты окисления – фосген и хлороводородная кислота – не только снижают его наркотическое действие, но могут привести к отравлению больного фосгеном.
Некоторые препараты требуют таких условий хранения, при которых исключалась бы возможность появления влажности , так как влажность может привести к гидролитическому распаду или к появлению микроорганизмов. Например, препараты, представляющие по структуре сложные эфиры, в условиях влаги могут гидролизоваться, при этом не только снижается лечебный эффект препарата, но иногда продукты гидролиза могут быть токсичны.
Например, есть препараты в которых для проявления необходимого действия должна обязательно содержаться влага, например сульфат магния Mg2SO4(слабительное средство)
Очень важно соблюдать определенные условия хранения для тех препаратов , которые содержат кристаллизационную воду, особенно для препаратов, в состав которых входят ядовитые вещества (мышьяк, ртуть и др.) так, если в препарате мышьяка натрия арсенате Na2HAsO4*7H2O выветрится кристаллизационная вода, а дозировка делается в расчете на 7 молекул в оды в молекуле препарата, то при той же дозировке больной получит большее количество мышьяка, чем это нужно для лечебного эффекта в результате чего может произойтиотравление организма.
Многие из перечисленных источников загрязненных лекартсвенных веществ могут обусловить наличие в них нелетучих примесей с большим содержанием неорганических веществ (зольный остаток). Так как зола в большинстве случаев не содержат таких вредных примесей, как тяжелое металлы, мышьяк, которые рекомендуется проверять при анализе лекарственного вещества. Государственной фармакопеей допускается для каждого лекарственного вещества определенной предел зольности. Для определениядопустимого предела примесей в препарате в ГФ введены так называемые эталонные растворы.
129. санитарно-показательные микробы почвы и их определение
Основные характеристики санитарно-показательных микроорганизмов. СПМ должен постоянно обитать в организме чселовека или животных и постоянно выделяться во внешнюю среду.
СПМ не должен размножаться на объектах окружающей среды.
Длительность выживания СПМ во внешней среде должна соответствовать длительности выживания патогенных микроорганизмов.
Методы идентификации и дифференциации СПМ должны быть просты и удобны.
Для выявления общей микробной обсемененности определяют общее микробное число (ОМЧ) путем подсчета всех микроорганизмов (растущих на питательных средах) в 1г или 1мл субстрата. Количество СПМ выражают в титрах и индексах.
Санитарная оценка почвы по микробиологическим показателям. При санитарной оценке почвы учитывают результаты химического, микркобиологического и гельминтологического исследований.
-Микробиологическое исследование проводят для санитарной оценки почвы,. Характеристики процессов самоочищения, оценки методов обезвреживания отбросов, при определении пригодности участков для строительства, а также при эпидемиологических и эпизоотологических обследованиях с целью выяснения путей заражения почвы, продолжительности выживания в ней патогенных микробов и т.д. В зависимости от поставленной задачи применяют краткий или полный санитарно-бактериологический анализ почвы.
-Краткий санитарно-микробиологический анализ предусматривает определение общего микробного числа(ОМЧ), титров бактерий группы кишечной палочки (БГКП), энтерококков, перфингенс-титра(наименьшее количество почвы, в котором обнаруживается Clostridium perfringens), термофильных , бактерий, нитрифицирующих бактерий. Полученные результаты указывают на наличие и степень фекального загрязнения. Краткий анализ почвы осуществляется при проведении текущего санитарного надзора за состоянием почвы.
Полный санитарно-микробиологический анализ включает определение всех показателей краткого анализа, а также общей численности сапрофитов. ОМЧ и процентного содержания споровых микроорганизмов, аэробных бактерий, разрушающей клетчатку, бактерий-аммонификаторов.
Исследуют токсичность почв для микроорганизмов. Полный анализ проводят при осуществлении предупредительного санитарного надзора, первичном обследовании при выборе территории для размещении отдельных объектов.
Прямое обнаружение патогенных микробов в почве проводят только при расследовании вспышек инфекционных заболеваний. В качестве косвенных показателей возможного загрязнения почвы патогенными бактериями используют санитарно-показательные микроорганизмы: бактерии группы кишечной палочки, Cl. Perfingens, бактерии рода Proteus, термофильные бактерии. Наличие в почве бактерий группы кишечной палочки свидетельствует о ее фекальном загрязнении. В загрязненных участках почвы коли-титр составляет 1*10^4, тогда как в чистых почвах коли-титр может быть равен 1 и выше. Обнаружение Cl. Perfingens в почве также указывает на ее фекальное загрязнение.
Методы опредения состава и активности микроорганизмов почвы. Почвенная биота – это совокупность живых организмов, населяющих почву. В их число входят: бактерии, грибы, актиномицеты, водоросли, микроскопические животные, а так же лишайники и зеленая растительность, имеющая в почвах свою корневую зону. Обычно, чем плодороднее почва, тем больше в ней содержится живых организмов, и тем разнообразнее они по видовому составу. Биологическую активность почвы определяют следующими способами:
- подсчетом общего количества почвенных микроорганизмов
- определением количества отдельных физиологических групп , например микроорганизмов нитрифицирующих и целлюзоразлагающих бактерий. Появление нитрифицирующих бактерий указывает на развитие процесса самоочищения, так как они завершают цикл разложения азотосодержащих соединений, превращая аммиак в азот. При свежем фекальном загрязнении нитрификаторов не будет, поскольку субстрат для их развития отсутствует. В ходе жизнедеятельности микроорганизмов, разлагающих орг.вещества, образуется аммиак, что приводит к развитию нитрификаторов.
- определение выделения из почвы диоксида углерода – биохимический способ определения биологической активности почвы. Чем интенсивнее выделение углекислого газа из почвы, тем активнее происходит в ней биологические процессы, тем лучше условия для возделывания сельскохозяйственных культур и выше их потенциальная урожайность.
Отбор проб производят с квадратного участка(не менее 5*5) из 5 точек – из каждого угла и центра квадрата («метод конверта»). Образцы забирают в условиях асептики с глубины 20-30 см. объем образцов 1 кг.
Периодичность контроля: не реже 1 раза в год.
130. Микрофлора почвы. Санитарно-эпидемическое значение . определение общего колличества микробов в почве.
Почва является основным местом обитания микробов. Количество микробов в разных почвах варьирует. Так, унавоженная почва содержит – 5 млрд микробов, чернозем – более 4-х, глинозем – 200 млн клеток в 1г почве. Доминирующее место по количеству занимают бактерии. В пахотном слое культурной почвы на 1га может содержаться до 6 тонн микробной массы. Весной и осенью количество микроорганизмов увеличивается. Колличественный и качественный состав биоценоза зависит от влаги, содержания орг.веществ, структуры почвы, клим.условий, способа с/х обработки и т.д.
С санитарной точки зрения особое значение в микрофлоре имеет слоя почвы до глубины 50-70см. в самом поверхностном слое почвы количество микроорганизмов,ограничено из-за действия солнечных лучей, высушивания. Основная масса микробов содержится на глубине 10-20 см, их количество уменьшается на глубине 4-5м, почва практически стерильна. Важнейшей группой почвенного микробиоценоза являются сапрофиты, которые играют важную роль в самоочищении почвы, участвуют в круговороте азота, углерода, серы, железа и т.д. Патогенные микроорганизмы попадают в почву с испражнениями, мочой, мокротой, слюной, с трупами и т.д. Значит, часть их, не образующая споры, рано или поздно отмирает. Однако, есть такие, для которых почва – это естеств. форма
обитания (возбудители ботулизма, глубоких микозов, микотоксикозов, фитопатогенные бактерии и грибы). Роль почвы в передаче инфекции не так велика, т.к. в почве микроорганизмы встречаются с неблагоприятными для них факторами: недостаток пит.субстратов, антаганизм почвенных сапрофитов, высыхание, действие солнечного света и т.д. В основном длительно сохраняются спорообразующие аэробные(возб. сиб.язвы) и анаэробные(возб. Столбняка, газ. Гангрены) бактерии. Сроки их выживания – 25 лет, но и неспорообраз. Могут сохранятся до нескольких месяцев.
Для характеристики в почве общего микробного загрязнения используют определение численности микроорганизмов, преимущественно бактерий, растущих на мясо-пептонном агаре при 37°С. При этом производят посев почвенных разведений 1,5% мясо-пептонный агар. Из каждой пробы почвы должно быть использовано для посева не менее двух различных разведений в зависимосте от степени педполагаемого загрязнения исследуемой почвы. Перед посевом каждое разведение тщательно перемешивают стерильной пипеткой , после чего берут 1мл суспензии и переносят на дно стерильной чашки. Из каждого разведения посев производят минимум на 2 параллельные чашки. После в каждую чашку вливают предварительно расплавленный и остуженный до 45°С пит.агар в количестве 15-20мл. чашки петри с раплавленным агаром хорошо перемешивают с имеющейся там почвенной суспензией, осторожно наклоняя чашки во все стороны. Затем чашки помещают на строго горизонтальную поверхность до затвердевания среды. На чашке должна быть сделана надпись с указанием номера и названия пробы и разведения. После застывания агара чашки с посевом помещают в термостат в перевернутом виде (крышкой вниз) при 37°С на 24 часа.
После инкубации подсчитывают выросшие колонии и проводят пересчет на 1г абсолютно сухой почвы.
131. понятие о санитарно – показательных микроорганизмов.
Санитарно-показательные микроорганизмы являются постоянными обитателями поверхностей и полостей человеческого или животного организма. Обнаружение и в объектах внешней среды свидетельствует о загрязнение выделениями человека или животного. Чем обильнее такое загрязнение, тем больше возможность попадания в объект патогенных микробов. Санитарно-показательными микроорганизмами могут быть только те, которое постоянно и больших количествах содержатся в выделения человека или животного, они должны сохранять жизнеспособность во внешней среде в течении сроков, близких к срокам выживания патогенных микробов, выделяемых теми же путями , но не размножаться интенсивно во внешней среде. Они должны также легко обнаруживаться современными и довольно простыми методами исследования. Основными санитарно-показательными микроорганизмами в отношении кишечных инфекций, указывающими на фекальное загрязнение внешней среды (вода, почва), считают бактерии группы кишечных палочек (БГКП). В качестве дополнительных показателей при оценке некоторых объектов определяют наличие фекальных стрептококков(энтерококков) и клостридий
К БГКП относятся не только эшерехии, но и представители родов цитробактер, энтеробактер, клебсиеллы. Для них характерны следующие признаки:короткие, грамотрицательные , неспорообразующие палочки, на среде Эндо они растут в виде темно-красных колоний с металлическим блеском или без него либо в виде розовых колоний с темным центром; сбраживают лактозу и глюкозу при 37°С в теч.24ч с образ. Кислоты и газа.
Все БГКП попадают во внешнюю среду только из кишечника человека и животных. Наибольшее санитарно-показательное значение в этой группе имеет E.coli, присутствие которой, например, в питьевой воде, рассматривается как признак свежего хоз.-бытового загрязнения.
Писутствие энтерококков считают дополнительным показателем фекального загрязнения воды и др. объектов. Однако их выделение требует сред более сложных при приготовлении и растут они медленнее. Энтерекокки явл. Нормальными обитателями кишечника, но выделяются во внешнюю сребу в меньших кол-х, чем кишечные палочки.
К санитарно-показательным клостридиям относят группу грам+, спорообраз. анаэробных палочек, редуцирующих сульфит на сульфит-неомицинполимиксиновой среде (СПН) при инкубации в условиях 45°С в теч.12-24ч. Эта группа в основном представлена Cl.perfringens. определение санитарно-показательных клостридий рекомендуют проводить в почве и воде, используемой на предприятиях пищевой промышленности, а также при выборе новых источников водоснабжения.
санитарно-показательными микробами загрязнения воздуха закртых помещений являются стафилококки, гемолитические стрептококки.чем больше количество стрептококков обнаруживают в воздушной среде, тем вероятнее возможность заражения чел-ка воздушно-капельными инфекциями. Нарастание обсемененности воздуха Staph.aureus и частое его обнаружение свидетельствует о санитарно-эпидемиологическом неблагополучии. В лечебных учреждениях вторичным источником обсеменения воздуха Staph.aureus могут быть загрязненные постельные принадлежности, белье.
132. способы повышения микробной чистоты нестерильных лекарственных средств.
Пути повышения микробной чистоты нестерильных лек.средств. В зависимости от источников и путей попадания микроорганизмов в лекарственные средства возможны различные подходы к обеспечению требуемого уровня микробной чистоты нестерильных ЛС. Если микробное обсеменение вызвано попаданием вместе с сырьем, то для достижения требуемого уровня микробной чистоты достаточно очистить от микроорганизмов сырье. Если обсеменение микробами происходит в процессе изготовления, то проводят деконтаминацию готовой лекарственной формы. Предварительной деконтаминации можно достичь прессованием сыпучих материалов (при отсутствии споровых микроорганизмов, низкой влажности исходного порошка и высоком давления). На практике применяют 4 способа деконтаминации сырья и готовых ЛС. Термический способ. Широко распространенный метод промышленной деконтаминации. Не пригоден для обработки термолабильных лекарственных форм, для которых применяют прогревание до 60-70°С горячим воздухом, инфракрасное и высокочастотное излучение. Химический способ. Более пригоден для стерилизации посуды, трубопроводов и прочих изделий из полимерных материалов. Стерелизирующий агент – окись этилена или смесь окиси этилена и бромистого метила (в соотношении 1:25). Для непосредственной деконтаминации ЛС этот способ применяют ограничено. УФ-облучение. Существенным ограничением для более широкого использования метода признана его неэффективность при обработке светонепроницаемых веществ. Наиболее часто его используют для обработки упаковочного материала и технологической воды. Ионизирующее излучение обладает высокой проникающей способностью. При облучении не образуются канцерогенные, мутагенные, токсичные вещества, сохраняются физико-химические и биологические свойства обрабатываемых лекарств. Метод используют для обработки антибиотиков, витаминов, ферментов , гормонов и алколоидов.
133. бактериологическое исследование стерильных лек.средств.
Инъекционные растворы, глазные капли, лек.средства для новорожденных, др. лек.препараты, стерилизуемые в процессе их изготовления, засевают неразведенными в тиогликолевую среду для определения микробной обсемененности и среду Сабуро. Посевы на тиогликолевой среде выдерживают 14 суток при 24°С. Учет результатов посевов проводят по отсутствию видимых изменений в посевах.
Определение микробной обсемененности готовых лекарств. Жидкие лек. формы разводят стерильным физ.раствором 1:10 (или 1:100) и засевают в объеме 0,5мл на МПА в чашке Петри. 1г порошка или таблеток помещают в пробирку с 10мл физ.раствора и после растворения производят посев на МПА. Мягкие лек.формы (мази, пасты) в кол-ве 1г взвешивают в асептических условиях, переносят в пробирки с 10мл стерильного 1,4% раствора натрия гидрокарбоната для диспергирования, которое производят вращательным движением пробирки между ладонями в течении 2-4 мин, 0,5 мл полученного раствора засевают на МПА в чашках Петри. Далее чашки помещают в термостат на 48 часов затем подсчитывают число колоний и определяют количество бактерий в 1 мл или 1г образца
134. санитарно-микробиологическое исследование инвентаря, оборудования, рук и санитарной одежды работников аптек
Санитарная одежда – мед.халат и шапочка, предназначенные для защиты медикаментов, материалов и других загрязнений, выделяемые пресоналом.
Аптечную посуду, подготовленную для розлива инъекционных растворов и глазных капель, отбирают в момент приготовления их в количестве трех штук одинаковой емкости.
Флаконы доставляют в лабораторию в укупоренном виде, используя при этом пробки и прокладки, для отпуска лек.средств.
Исследование аптечной посуды, пробок, прокладок, воронок, цилиндров:
Подготовка к исследованию: три одноименных флакона, доставленные в лабораторию, последовательно ополаскивают в 10 куб.см стерильной водопроводной воды.
Воду из флакона во флакон переливают над пламенем горелки, тщательно споласкивая каждый флакон. В банки и широкогорлые колбы с доставленными пробками и прокладками наливают 10 куб.см стерильной водопроводной воды и тщательно споласкивают.
135.методы контроля микробной загрязненности растительного лек.сырья
Лек. Растительное сырье может инфицироваться патогенными микробами на всех этапах заготовки (сбор, первичная обработка, сушка, измельчение, упаковка) и хранения. При хранения сырья важно соблюдение санитарного режима в аптеках. Неблагоприятное действие оказывают влажность, пыль, насекомые и др.факторы, повышающие микробное обсеменение и приводящие к порче лек.сырья. Внешними проявления микробной порчи раст.сырья являются изменение цвета и консистенции, загнивание, плесневение всего растения и или его частей. При этом резко снижается содержание или полностью исчезают фармакологические активные вещества , использование такого недоброкачественного сырья становится бесполезным или вредным. Легко портятся плоды, ягоды и корневища, богатые углеводистыми соединениями, более устойчивыми являются сухие листья, корни, кора. Состав микроорганизмов зависит от вида лек.сырья, его структуры и фармакологических свойств. Преобладают грибы, актиномицеты и спорообразующие виды бактерий.
Определение микробной обсемененности раст-го лек.сырья:
В асептических условиях(в стерильной чашке Петри, обожженными ножницами и пинцетом)из листа или верхнего слоя корневища вырезают кусочек площадью 1см2, который помещают в пробирку с 10мл стерильного физ.раствора и взбалтывают в течении 5мин. Из полученного смыва готовят 4 десятикратных разведения (1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000), для посева в связи с с большой обсемененности раст.сырья используют два последних (1:1000, 1:10000)разведения. В стерильную чашку Петри вносят 1 мл смыва, после чего в нее наливают 15мл расплавленного и остженного до 45°С МПА, перемешивают и после застывания агара посевы инкубируют при 37°С 24-48 часов. Производят подсчет выросших колоний на поверхности и в глубине агара. Полученное число колоний следует умножить на степень разведения.
136. Санитарно-микробиологическое исследование сухих веществ, используемых для приготовления лек.форм.
Исследования проводят в случаях неоднократных неудовлетворительных бактериологических анализов, превышения норм предельно допустимого содержания непатогенных микроорганизмов при удовлетворительных результатах анализов дистиллированной воды используемой для их приготовления, при удовлетворительных данных бактериологического контроля посуды, флаконов, пробок, прокладок. Результаты, полученные при исследовании сухих лекарственных веществ, служат одним из оснований для выбора партии при приготовлении инъекционных растворов. Сухие лекарственные вещества разводятся стерильной дистиллированной водой с целью создания соответствующих концентраций инъекционным растворам и глазным каплям, изготовляемым в аптеках. Отбор сухих лекарственных веществ проводят стерильными ложками в стерильную посуду лаборатории в количестве 30 - 50 г. В случае, если вещество таблетированное, то отбирают фламбированным пинцетом в стерильную посуду лаборатории в количестве 30 - 50 г.
Аптечную посуду, подготовленную для розлива инъекционных растворов и глазных капель, отбирают в момент приготовления их в количестве трех штук одинаковой емкости.
Флаконы доставляют в лабораторию в укупоренном виде, используя при этом пробки и прокладки, для отпуска лекарственных средств.
137. Понятие о пирогенности и методы ее определения.Пирогены – это вещества липополисахаридной природы, образующиеся при гибели микробной клетки. Представляют собой эндотоксины, при введении в организм вызывают лихорадку. Для определения пирогенности используют 3 метода. Прямой метод – биологический. Испытание проводят на кроликах. Группе животных, состоящей из 3 особей, пригодных для опыта, вводят испытуемый препарат в ушную вену. Затем измеряют ректальную температуру 3 раза с промежутками в 1 час. Испытуемый раствор считают непирогенным, если сумма повышений температуры у 3-х кроликов менее 1,4 °С. Если сумма находится в пределах 1,5-2,2 °С, испытание повторяют. Если сумма превышает 2,2 °С, то препарат считается пирогенным. Пирогенны продуцируются в основном грамотрицательными бактериями (ГОБ). У грамположительных бактерий пирогенная активность в 104-105 ниже, чем у ГОБ. Поэтому используют косвенный метод определения пирогенности путем определения общего количества микроорганизмов, в том числе ГОБ, до стерилизации 1 мл образца, взятого непосредственно перед стерилизацией, засевают на МПА. Инкубируют 5 суток при температуре 30-35 °С. Подсчитывают колонии – общее количество бактерий.Микроскопируюти подсчитывают колонии ГОБ.Допустимые нормы для 5,10,25,40% растворов глюкозы, 0,9% раствора NaCl – неинъекционного назначения: ОКБ – 50, ГОБ – 10; для инъекций: ОКБ – 15-20, ГОБ – 5. Превышение указанных показателей свидетельствует о пирогенности препарата после стерилизации.Наиболее современным методом определения пирогенности является ЛАЛ-тест. В основе этого метода лежит способность лизата амебоцитов (клеток крови) морских животных мечехвостов специфически реагировать с эндотоксинами грамотрицательных бактерий – липополисахаридами. Поскольку первые исследования были проведены на мечехвостах вида Limulus polyphemus, препарат, полученный из их крови, был назван «лизат амебоцитов лимулюс» (Li,ulus amebocyte lysate) – ЛАЛ-реактив. В результате реакции эндотоксина и лизата происходит помутнение прозрачной реакционной смеси или образования твердого геля, что и служит индикатором присутствия эндотоксина. Преимуществами ЛАЛ-теста являются высокая чувствительность, возможность анализировать в короткий срок (1-2ч) большое количество образцов, возможность определения пирогенности лекарст, которые нельзя испытывать на кроликах – короткоживущих изотопов, препаратов седативного действия и др.
138. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха в аптеках.
Пробы воздуха отбирают в следующих помещениях: в асептическом блоке, стерилизационной; ассистентской, фасовочной, комнате дефектора и материальной; в моечной; в зале обслуживания.
Отбор проб воздуха производят при соблюдении следующих условий: чистое подготовленное к работе помещение; - закрытые форточки и двери; определение в помещении % относительной влажности воздуха; уровень высоты отбора проб воздуха соответствует высоте рабочего стола; не ранее чем за 30 мин. после влажной уборки помещения. Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью приборов для бактериологического анализа воздуха: модель 818 (прибор Кротова), ПОВ, ПАБ.
Для определения общего содержания бактерий в 1 куб. м отбор производят на 2% питательный агар, разлитый в чашки по 12 - 15 мл. Для определения золотистого стафилококка используют желточно - солевой агар, для определения плесневых и дрожжевых грибов - среду Сабуро.
Методика исследования воздуха.
Доставленные чашки с посевами на питательном агаре и желточно - солевом агаре инкубируют в термостате при 37 град. C в течение 24 часов, посевы на желточно - солевом агаре дополнительно выдерживают еще 24 часа при комнатной температуре.
Посевы на среде Сабуро инкубируют при температуре 22 - 28 град. C 4 суток. Для определения общей бактериальной обсемененности через 48 часов посевы просматривают, подсчитывают количество выросших колоний и производят пересчет на 1 куб. м.
Для определения количественного содержания золотистого стафилококка просматривают посевы на желточно - солевом агаре после 48-ми часов инкубации, колонии, подозрительные на стафилококк, подсчитывают и проводят идентификацию . После идентификации производят пересчет полученных результатов на 1 куб. м воздуха.
139.Бактериологическое исследование стерильных лекарственных средств.К ним относятся растворы для инъекций, глазные капли, препараты для детей до 1 года. Асептические лекарственные формы готовят в асептических условиях без стерилизации. Асептика - предупреждение попадания микробов в лекарственный препарат. Асептические и стерильные лекарственные формы го­товят в асептических условиях: 1. Требования к помещению. Помещение называется асептический блок. Уборка в нем производится 1раз в смену с использованием дезинфицирующих растворов (хлорамин Б - 1%, перекись водорода - 3%). Для стерилизации воздуха и поверхностей применяют бактерицидные лампы. Отбор проб для бактериологического исследования (силами центров ГСЭН) различных объектов в аптеках проводится не менее 2 раз в квартал. Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью аппарата Кротова Микробное число воздуха в асептическом блоке не должно превышать 500 - 750 до и 1000 МК/м3 после работы, а золотистого стафилококка, плесневых и дрожжевых грибов не должно быть в 250 л воздуха ни до, ни после работы. 2.Требования к аптечной посуде, дистиллированной воде. Они обрабатываются в автоклаве (120 ° - 1атм. - 45 мин. или 132 °- 2 атм. - 20 мин). 3. Требование к персоналу. Персонал работает в стерильной одежде ( халат, шапочка, бахилы, марлевая повязка), обрабатывает руки дезраствором. 4 ( 0,5% р-р хлорамина Б или этанол - 80%). В стерильных лекарственных формах содержание микроорганизмов не допускается, в асептических - допускается не более 10-15 в 1г (мл). Общее микробное число (ОМЧ) – количество микроорганизмов, содержащихся в 1 г (мл) препарата, определяют по числу выросших колоний. Определение микробной обсемененности растительного лекарственного сырья В асептических условиях (в стерильной чашке Петри, обоженными ножницами и пинцетом) из листа или верхнего слоя корневища вырезают кусочек площадью 1 см2, который помещают в пробирку с 10 мл стерильного физиологического раствора и взбалтывают в течение 5 мин. Из полученного смыва готовят четыре десятикратных разведения (1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000), для посева в связи с большой обсемененностью растительного сырья используют два последних (1: 1000 и 1: 10000) разведения. В стерильную чашку Петри вносят 1 мл смыва, после чего в нее наливают 15 мл расплавленного и остуженного до 450С МПА, перемешивают и после застывания агара посевы инкубируют при 370С 24 - 48 ч. Производят подсчет выросших колоний на поверхности и в глубине агара. Полученное число колоний следует умножить на степень разведения. Бактериологическое исследование стерильных лекарственных средств Инъекционные растворы, глазные капли, лекарственные средства для новорожденных, другие лекарственные препараты, стерилизуемые в процессе их изготовления, засевают неразведенными в тиогликолевую среду для определения микробной обсемененности и среду Сабуро для выявления дрожжевых и плесневых грибов.
140.В аптеках согласно инструкции, утвержденной приказом Министерства здравоохранения, не менее двух раз в квартал осуществляется бактериологический контроль, объектами которого служат:
·Водаочищеннаядляприготовленияинъекционныхрастворовиглазныхкапель–инъекционныерастворыдостерилизации; глазныекапли, приготовленныевасептическихусловияхнастерильныхосновах (т.е. изготовляемыевсамихаптеках).
вода дистиллированная;
· инъекционные растворы до и после стерилизации;
· глазные мази после стерилизации;
· глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильной основе;
· сухие лекарственные вещества, используемые для приготовления инъекционных растворов;
· нестерильные лекарственные формы;
· аптечная посуда, пробки, прокладки, прочие материалы;
· инвентарь, оборудование, руки, санитарная одежда персонала;
· воздух аптечных помещений.
141.Практически во всех группах микроорганизмов имеются возбудители болезней растений .К фитопатогенным микроорганизмам относят грибы,бактерии,вирусы,актиномицеты.Первое место среди фитопатогенных микробов принадлежит грибам, это связано с более кислой средой тканей растений, которая благоприятствует развитию больше грибов, чем бактерий. Тем не менее, известно довольно много бактериальных болезней растений (бактериозами).Источники заражения фитопатогенными микроорганизмами различны. Одним из важнейших источников заражения являются семена,остатки больных растений,некоторыенасекомыеПереносить фитопатогенные микроорганизмы может также вода.Бактерии вызывают свыше 200 болезней растений. Большой ущерб причиняют бактериозы овощным, плодовым, техническим культурам. Длина бактериальной клетки составляет 0,5 - 4,1 мкм, диаметр от 0,3-0,8 мкм. Преобладающая форма грамотрицательных фитопатогенных бактерий палочковидная (исключение Streptomyces, которые имеют нитчатое строение). Большинство фитопатогенных бактерий подвижны за счет жгутиков, неподвижных форм немного. Бактерии могут иметь один или несколько жгутиков. У большинства подвижных фитопатогенных бактерий жгутики полярные, реже - перитрихиальное их расположение. Бактериальная клетка окружена толстой многослойной оболочкой - клеточной стенкой. Поверхность некоторых фитопатогенных бактерий покрыта слизистым слоем - капсулой.Почти все фитопатогенные бактерии грамотрицательные; лишь виды родов Clavibacter и Streptomyces дают положительную реакцию. По характеру питания фитопатогенные бактерии - гетеротрофы, способные расти на питательных средах. На твердых питательных средах бактерии образуют колонии, окраска, форма, поверхность которых типична для данного штамма.Семейства,вызывающие заболевания растений(Pseudomonadaceae,Xanthomonadaceae,Rhizobiaceae,Entorobacteriaceae,Mycobacteriaceae,Bacilliaceae)
Актиномицетов относят к грамположительным бактериям. Вегетативное тело актиномицетов представлено очень тонкими (в 5—7 раз тоньше, чем грибные) ветвящимися гифами (мицелий). Размножаются актиномицеты участками мицелия или спорами. На питательных средах актиномицеты образуют сначала кожистые колонии (субстратный мицелий), которые затем покрываются воздушным мицелием. Сама колония врастает в агар субстратным мицелием. Питание актиномицетов не специализировано. Они используют различные животные и растительные остатки. Среди патогенных актиномицетов наибольший интерес представляют виды рода Streptomyces, вызывающие паршу у растений.
142.Пробы очищенной воды, используемойдляприготовленияинъекционныхрастворовиглазныхкапель, отбираютвстерильныефлаконывколичестве 15 - 20 куб. смнепосредственноиземкостей, вкоторыхосуществляетсястерилизация. Инъекционныерастворы (достерилизации) отбираютвовремяихприготовления, нонепозднееполуторачасов, идоставляютвлабораториювтехжефлаконах, вкоторыхонибудутподвергнутыстерилизации. Инъекционныерастворы, глазныекаплипослестерилизациииприготовленныеасептическимспособомдоставляютваптечнойупаковке.Исследованиедистиллированнойводыдляприготовленияинъекционныхрастворовиглазныхкапель.Определениеналичиябактерийгруппыкишечныхпалочекв 1,0 куб. см. Лекарственныесредствазасеваютвколичестве 1 г (куб. см) на 9 куб. смразведеннойглюкозо - пептоннойсреды, средыКесслериКода. Посевывыращиваютпритемпературе 37 град. C втечение 18 - 24 часовсдальнейшимвысевомсектораминасредуЭндо, последнююинкубируютпритемпературе 37С 18 - 24 часаипроводятпросмотрпосевов. Изподозрительныхколонийделаютмазки, красятпоГрамуимикроскопируют. Приналичииграмотрицательныхпалочекоставшуюсячастьколонийпересеваютнаглюкозо - пептоннойсредуспоплавком, инкубируютпри 37 град. C втечение 18 - 24 часов. Наличиекислотыигазанаглюкозо - пептоннойсредеобусловливаетсодержаниебактерийгруппыкишечныхпалочек.
143.При проведении исследования определяют
1.Общее число микроорганизмов, образующих колонии на питательномагаре.
2.Содержание общих и термотолерантныхколиформных бактерий(ОКБ и ТКБ)
3.Содержание спор сульфитредуцирующихклостридий.
4.Содержание колифагов.
Пробу в объёме 500 мл отбирают в стерильную ёмкость,снабжённую пробкой с колпачком, после предварительной стерилизации крана обжиганием и последующего спучка воды не менее 10 минут при полностью открытом кране.При отборе пробы напор воды уменьшают.
1.Определение ОМЧ.Вносят по 1 мл воды в 2 стерильны чашки Петри,затем в каждую чашку вливают 8-12 мл питательного агара,смешивают содержимое чашек на горизонтальной поверхности.После застывания агара,чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют 24ч при 37.Подсчитывают все выросшие на чашке колонии.Количество колоний суммируют и делят на 2.Результат-КОЕ в 1 мл пробы воды.Если подсчёт на чашках невозможен, то в протоколе отмечают «сплошной рост».Норматив в 1 мл питьевой воды-не более 50 КОЕ.
2.Определение общих и термотолерантныхколиформных бактерий(ОКБ и ТКБ)
1)Методом мембранной фильтрации(основной метод).Метод основан на фильтрации установленного объёма воды через мембранныефильтры,выращивание посевов на питательной среде с лактозой и идентификацией крлоний.Изучают 3 пробы по 100 мл.Фильтры помещают на чашки со средой Эндо и ставят в термостат дном вверх и инкубируют 24 часа при37.Если на фильтре есть рост изолированных типичных лактозоположительных колоний(красных)с отпечатком на обратной стороне фильтра,подсчитывают число колоний каждого типа отдельно и подтверждают их принадлежность к ОКБ иТКБ.Для этого ставят оксидазный тест и определяют отношение к окраске по граму.После этого проводят вычисления по формуле.
2)Титрационнымметодом.Основан на накоплении бактерий после посева установленного объёма на жидкую средус пересевом на плотную средуслактозойПри качественном методе исследования засевают 3 по 100 мл,при количественном-3 по 100 мл,3 по 10 мл и 3 по 1 мл.Посевы инкубируют 48ч при 37..Приобнаружение помутнения в жидкой среде и обраования газа высеваем на среду Эндо,если они на ней ферментатируют лактозу до кислоты при 44 градусах и газа-есть ТКБ.Норматив-нет окб и ткб, в 100 мл воды.
3.Определение спор.Пробу воды 20 мл прогревают на водяной бане в пробирках 15 минут при 75 для уничтожения вегетативных форм.Из каждой пробы делают посев или фильтруют 20 мл.
-методом фильтрования в пробирках:перед посевом железо-сульфитный агаррасплавляют.Послефильтрации,фильтр помещают в пробирку с горячим агаром.Пробирку быстро охлаждают в холодной воде.Посевы культивируют 16-18 часовпри 44.
-методом фильтрования в чашках Петри:чашки Петри заливают тонким слоем ЖСА.Послефильтрации,фильтрна застывшую питательную среду и заливают ЖСА до верхнего края чашки.
-прямым посевом: в стерильные пробирки вносятпо 5 или 10 млисследуеиойпробы,заливают горячим ЖСА,пробирку быстро охлаждают.В количественном подсчитываем отдельные чёрнвеколонии,выражают в КОЕ в 20мл.Норматив-споры должны отсутствовать.
4)Определениеколифагов
-титрационныйметод:определение предварительным накоплением в среде обогащения на культуре и выявлениизон лизиса на питательном агаре.Приналичии лизиса-присутствие колифагов.

Приложенные файлы

  • docx 559540
    Размер файла: 6 MB Загрузок: 0

Добавить комментарий