ВКР Аскорбиновая кислота (Коновалов)


Чтобы посмотреть этот PDF файл с форматированием и разметкой, скачайте его и откройте на своем компьютере.
ПЯТИГОРСКИЙ МЕДИКО
-
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ

Филиал государственного бюджетного образовательного учреждения
высшего профессионального образования

Волгоградский государственный медицинский университет

Минздрава Российской Федерации





Коновалов Александ
р
Андреевич


Студента
V

курса №

20
группы





Н
АЗВАНИЕ ТЕМЫ


МЕТОДЫ АНАЛИЗА
КИСЛОТЫ АСКОРБИНОВОЙ
В РАСТВОРЕ
ДЛЯ ИНЪЕКЦИЙ
И ИХ ВАЛИДАЦИЯ


выпускная квалификационная работа

по специальности 0
60
1
08 Фармация


















Пятигор
ск 201
4






2


Выпускная квалиф
икационная работавыполнена на кафедре
:


фармацевтической и токсикологической химии


Научный руководитель
:

Саморядова Анна Борисовна

Доцент кафедры фармацевтической и токсикологической химии,

кандидат фармацевтических наук.




Р
ецензент
:

Команцева Евгения
Владимировна

Профессор кафедры фармацевтической и токсикологической химии,

доктор фармацевтических наук.







Оц
енка_________________


Дата защиты___ _____20__ г.


Протоко
л № _________


Председатель ГАК _________
__________













3


План работы

Введение

Глава 1. Кислота аскорбиновая, свойства, анализ, применение

(обзор
литературы)
.

1. Общая характеристика

кислоты аскорбиновой.

2.
Получение кислоты аскорбиновой.

3.
Свойства кислоты аскорбиновой.

4.
Способы идентификации
кислоты
аскорбиновой
.


4.1. Химичес
кими методами.

4.2. Физико
-
химическими методам.

4.2.1.

Анализ ИК
-
спектров
кислоты аскорбиновой.

4.2.2.
Идентификация кислоты аскорбиновой

методом БИК
-
спектроскопии

4.2.3. Анализ УФ
-
спектров кислоты аскорбиновой

5.

Количественное определение

5.1.

Титриметрические методы

5.2.

Ф
изико
-
химические методы.

6.

Фармакологическое действие, применение в медицине и хранение
лекарственных препаратов глюкозы.

6.1.

Биологическая роль

6.2.

Авитаминоз и гипервитаминоз

6.3.

Суточная норма потребления

6.4.

Фармакодинамика

6.5.

Фармакокинетика

6.6.

Лекарственные формы

Выводы

по

обзору литературы
.




4


Глава 2
.
Методы анализа
кислоты аскорбиновой

в растворе для инъекций
и
их валидация (
экспериментальная
часть)
.

1.

Валидационная оценка методик качественного и коли
чественного
ан
а
лиза
кислоты аскорбиновой в растворе для инъекций

по
показателю Специфичность

1.1.
Установление специфичности в тестах Испытание на подлинность

1.2.

Установление специфичности в тестах Количественное определение

2.

В
алидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой
йодат
ометрическим методом

2.1.

Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой
в
р
астворе

йодатометрическим методом по показателю Линейность.

2.2.

Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой в
растворе йодатометрическим методом

по показателю
Правильность.

2.3.

Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой

в
растворе
йодатометрическим методом

по показателю Прецизионность

3.В
алидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой
йодиметрическим методом

3.1.

Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой в
растворе
иодиметрическим

методом по показателю Линейность.

3.2.

Валидационная оценка методики анализа

кислоты аскорбиновой в
растворе йод
и
метрическим методом по показателю 
Правильность
.

3.3.

Валидационная оценка методики анализа

кислоты аскорбиновой в
растворе йод
и
метрическим методом по показателю 
Прецизионность
.

Общие выводы

Литература




5


Введение
.

Возрастающие требования к безопасности, эффективности и
качеству лекарственных
средств обусловливают необходимость
разрабатывать новые и совершенствовать существующие методы их анализа.

Витамины являются незаменимыми веществами, необходимыми для
роста, развития и жизнедеятельности человека. Большинство витаминов в
организме не синтез
ируется, источником их обычно является в
нешняя среда.
Традиционно разли
чают водорастворимые и жирорастворимые витамины.

Витаминные препараты
широко
используются

для стимуляции и
регуляции физиологических процессов, профилактики и лечения ряда
заболеваний п
ри гипо
-

и авитаминозах, повышения общей устойчивости
о
рганизма к экзогенным и эндоген
ным неблагоприятным факторам.

На сегодняшний день рынок переполнен витаминными препаратами,
они имеют различные составные элементы и выпускаются в разных
лекарственных фо
рмах. На фармацевтическом рынке существует большое
количество дженериков или много

источниковых препаратов, содержащих
витамины.

Качество препаратов
-
дженериков обеспечивается комплексом
аналитических методов, позволяющих подтвердить их подлинность,
определ
ить чистоту

и количе
ственное содержание действующего вещества.
Используемые для этого методы и методики нуждаются в постоянном
совершенст
вовании. Необходимо также учиты
вать
сохранявшуюся

проблему
фальсификации лекарственных средств. Учитывая вышеизложенное
,
актуальной является проблеме сравнительного изучения методов

анализа
,
используемых для анализа л
екарственных средств водораство
римых
витаминов
, в первую очередь кислоты аскорбиновой
.

Цель и задачи исследования.

Целью исследования являлось
сравнительное и
зучение

и валидация

современных методов анализа
раствора
кислоты аскорбиновой
.

Для достижения поставленной цели решали следующие задачи:

-

провести анализ состояния методов стандартизации и контроля качества
лекарственных средств

кислоты аскорбиновой
, вклю
чая международные
программы и зарубежные фармакопеи;

-

выбрать

методики
установления

подлинности и количественного
определения

кислоты аскорбиновой в растворе методов
;

6


-

провести валидационную оценку методик качественного и количественного
анализа кислоты
аскорбиновой в растворе
для инъекций
по показателю
Специфичность.

-

провести валидационную оценк
у

методик качественного и количественного
анализа
кислоты аскорбиновой в растворе

для инъекций
по показателю
Линейность.

-

провести валидационную оценк
у

ме
тодик качественного и
количественного анализа
кислоты аскорбиновой в растворе

для инъекций
по
показателю Правильность.

-

провести валидационную оценк
у

методик качественного и количественного
анализа
кислоты аскорбиновой в растворе

для инъекций
по показат
елю
Прецизионность.

-

провести вали
дационную оценку по показателям
: специфичность,
линейность, прецизионность и правильность.













7


ГЛАВА 1. КИСЛОТА АСКОРБИНОВАЯ, СВОЙСТВА, АНАЛИЗ,
ПРИМЕНЕНИЕ

(
обзор

литературы
)
.

1.
Общая характеристика

кислоты

аскорбиновой
.




Аскорби
новая
кислота

органическое соединение
, родственное
глюкозе
,
является одним из основных веществ в человеческом рационе, которое
необходимо для нормального функционирования соединительной и костной
ткани. Выполняет биологические функции вос
становителя и
кофермента

некоторых
метаболиче
ских процессов
, является
антиоксидантом
.
Биологически активен только один из изомеров


L
-
аскорбиновая кислота,
который называют витам
ином
C
. В природе аскорбиновая кислота
содержится во многих
фруктах

и
овощах

[
21
]
.

2.
Получение ки
слоты аскорбиновой
.

Синтетически получают из глюкозы. Синтезируется растениями из
различных гексоз (глюкозы, галактозы) и большинством животных (из
галактозы), за исключением приматов и некоторых других животных
(например, морских свинок), которые получают

её с пищей. Схема синтеза
кислоты аскорбиновой:


8



Источники витамина С

Наиболее богаты аскорбиновой кислотой плоды
барбадосской вишни

(1000
-
3300 мг/100 г), свежего
шиповника

(650 мг/100 г),
болгарского
красного перца

(250 мг/100 г),
чёрной смородины

и
облепихи

(200 мг/100 г),
яблоки
(содержат 165 мг/100 г),
перец зелёный сладкий

и
петрушка

(150
мг/100 г),
брюссельская капуста

(120 мг/100 г),
укроп

и
черемша

(колба) (100
мг/100 г),
киви

(90 мг/100 г),
земляника садовая

(60 мг/100 г),
цитрусовые

(38
-
60 мг/100 г)
[12]
, недозрелые плоды
грецкого ореха
,
хвоя

сосны

и
пихты

[
31
]
.

3
. Свойства

кислоты аскорбиновой
.

По
физическим с
войствам

аскорбиновая кислота представляет собой
белый кристаллический порошок

без запаха,

кислого вкуса. Легко раств
орим
в воде, растворим в спирте.
t
пл.

190
-
193
°С (с разложением).

Из
-
за наличия двух
асимметрических атомов

существуют четыре
диастереомера

аскорбиновой кислоты. Две условно именуемые
L
-

и
D
-

формы
хиральны

относительно

атома углерода в
фурановом

кольце, а
изо
-

форма
является
D
-
изомером по атому углерода в боковой этиловой цепи.

Удельное вращение от +22° до +24° (2%
-
ный водный раствор).

Раство
р кислоты аскорбиновой в буферном растворе (
pH

7) имеет
максимум поглощения при 265 нм

[1]
.

Химические свойства

[
19, 28
]
:

9


1.

Окислительно
-

восстановительные свойства.

Аскорбиновая кислота

в
мягких услови
ях легко окисляется в дегидроаскорбиновую (
лактон

2,3
-
дикетогулоновой
кислоты
), могущую столь же легко вновь
восстанавливаться:


2.

Кислотнные

свойства.

Аскорбиновая кислота является у
-
л
актоном,
содержащим два спирто
вых гидроксила в 5 и 6 положениях и два е
нольных
гидроксила во 2 и 3 по
ложениях. Енольные гидроксилы обладают
кислотными свойствами, дают

кислую реакцию
на лакмус, взаимодействуют
и с

Na
ОН и с
NaHCO
3
. Ки
слотные свойства более выражены у гидроксила в
3
-
ем положении:

Следует иметь в виду, что аскорбиновая кислота является лактоном и

при действии сильных щелочей лактонное кольцо гидролизуется, а затем

образуется фурфурол

[28]:

10



3.

Кислота
аскорбиновая имеет характерный спектр поглощения в УФ
-
области и ИК
области

[3].




Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бро
-

мидом, в области от 4000 до 400 см
-
1

по по
ложению полос поглощения
должен

соответствовать рисунку спектра аск
орбин
овой кислоты

(рис.
1).


Рис.
1

ИК
-
спектр поглощения кислоты аскорбиновой.



Ультрафиолетовый спектр поглощения 0,00
1 % раствора субстанции в
0,1 М
растворе хлористоводородной кислоты в област
и от 230 до 300
нм должен иметь
максимум при 243 нм

(рис.
2
).




11



Рис.
2

УФ
-
с
пектр поглощения кислоты аскорбиновой.

4
.

Способы идентификации аскорбиновой кислоты

4.1. Химическими методами.

4.1.1.
КИСЛОТНЫЕ СВОЙСТВА

[
1,18,19, 28,
29
]
:

Кислотные свойства аскорбиновой кислоты используют для испытания
подлинности. После доба
вления карбоната натрия в водном растворе
происходит образование ионизированной формы кислоты аскорбиновой. К
полученной натриевой соли прибавляют
железа (
II
)

сульфат. Появляется
темно
-
фиолетовое окрашивание, обусловленное образованием
железа
аскорбината,
исчезающего после добавления разведенной серной кислоты:

12



1.1.2.

ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫЕ

СВОЙСТВА

[
1,18,19, 28,
29
]
:

1.

При взаимодействии кислоты аскорбиновой с раствором нитрата
серебра его катион восстанавливается до металлического серебра
(реакция образования серебря
ного зеркала):


2.

Восстановительными свойствами кислоты аскорбиновой обусловлено
превращение окрашенного в синий цвет 2,6
-
дихлорфенолидиндофено
ла в бесцветное лейкосостояние:


3.

Аскорбиновая кислота легко окисляется раствором йода согласно
уравнению:

13



4.

При
взаимодействии кислоты аскорбиновой с раствором
калия
перманганата
наблюдают обесцвечивание раствора калия перманганата
вследствие восстановле
ния марганца до Mn 2+



4.2.

Физико
-
химическими методами

4.2.1.

Анализ ИК
-
спектров водорастворимых витаминов

На рис.
3

в качес
тве примера представлен ИК
-
спектр кислоты
аскорбиновой. В изучаемых спектрах полосы около 2955, 2924, 2855 см

1

соответствуют валентным колебаниям ν
С
-
Н
, 1462, 1378 и 722 см

1



деформационным колебаниям δ
С
-
Н
вазели
-
нового масла. Полосы с частотами
около 236
1, 2346, 2334 и 666 см

1
соответствует колебаниям
присутствующего в атмосфере углекислого газа.

На основании анализа спектров субстанции кислоты аскорбиновой
были выделены следующие характеристических полосы поглощения:
ν
СО

в
γ
-
бутиролактоне (
1755 см

1
), ν
СС

(1675
см

1
),ν
as(С
-
О
-
С)

(1322 см

1
) и ν
s(С
-
О
-
С)

(1026
см

1
).


14



Рис.
3
. ИК
-
спектр субстанции кислоты аскорбиновой в вазелиновом масле.






Рис.
4
. ИК
-
спектр таблеток Аскорбиновая кислота с глюкозой
(Фармстандарт
-
Уфа
-
ВИТА, Россия) после

проведения экстр
акции спиртом 96%.


В работе

[]

был составлен атлас ИК
-
спектров субстанций и препаратов
водорастворимых витаминов с целью их последующего использования в
качестве стандартных. Таким образом, разработаны методики подтверждения
подлинности кислоты аскорбинов
ой в таблетках методом ИК
-
спектроскопии,
которые могут быть использованы для выявления фальсифицированны
х
препаратов, содержащих указан
ное вещество.



15


4.2.2.
Идентификация и дискриминация кислоты аскорбиновой

методом БИК
-
спектроскопии

На рис.
5

представлены
БИК
-
спектры субстанций кислоты
аскорбиновой разных производителей с фальсификатом. Видно, что гранулят
97% отличается от порошкообразных субстанций только по интенсивности
спектров. Методика сравнения БИК
-
спектров может использоваться для
установления подл
инности препаратов только с концентрацией кислоты
аскорбиновой в препарате свыше 25
-
30%. В этом случае в БИК
-
спектре
можно увидеть полосы действующего вещества


ис.
6
)
.




Рис.
5
. БИК
-
спектры субстанций кислоты аскорбиновой 13 серий 8
производителей в сра
внении с фальсифицированным образцом.


16



Рис.
6
. БИК
-
спектры субстанции и таблеток с концентрацией кислоты
аскорбиновой от 25,16% до 66,67%.


4.2.3. Анализ УФ
-
спектров кислоты аскорбиновой

Наличие сложных сопряженных систем в структурах водорастворимых
вита
-
минов дает возможность широкого применения УФ
-
спектрофотометрии
для их фарма
копейного анализа. IP и UP регламентируют при установлении
подлинности ср
авне
ние УФ
-
спектров испытуемой субстанции со спектрами
стандартных образцов. ГФ, CP, EP (BP) и JP при уст
ановлении подлинности
регламентируют сравнение УФ
-
спектров испытуемой субстанции со
стандартными спектрами

(рис.
7
)
.


Рис.
7
. УФ
-
спектр кислоты аскорбиновой (15 мкг/мл) в растворе кислоты
серной 0,005 М.




17


5.

Количественное определение кислоты аскорбиновой.

5
.1.
Титриметрические

методы

Титриметрические

количественного определения кислоты
аскорбиновой также базируются на ее химических
свойствах
:
восстановительных и кислотных.

1)

ГФ X
II

рекомендует
метод
йо
датометрии
.

В этом случае
титрантом служит раствор калия й
одата. Титрование ведут в присутствии
иодида калия и хлороводородной кислоты (индикатор


крахмал) до
стойкого синего окрашивании.


Избыточная капля титрованного раствора калия йодата реагирует с

калия йодидом, выделяя йод, который указывает на конец титр
ования:



2)

Метод йодометрии.
Кислота аскорбиновая окисляется титрованным
раст
вором йода в ней
тральной, слабокислой или слабоще
лочной средах до
кислоты дегид
роаскорбиновой.


3)

Метод йодохлорометрии
.

Т
итруют раствором йодмонохлорида до
появления стойкого слаб
о
-
синего окрашивания (индикатор крахмал).
Происходит окисление аскорбиновой кислоты пореакции:

18




4)

Цериметрическое определение. Избыточная капля сульфата церия
окисляет индикатор до бледно
-
голубого окрашивания


Раствор

фенантролина

представляет собой комп
лексное соединение
закисн
о
го железа с о
-
фенантролином интенсивно
-
красного цвета. Сульфат
церия окисляет железо до трехвалентного. В результате чего образуется
комплексное соединение голубого цвета:


5)

Титрование раствором 2,6
-
дихлорфенолиндофенолята натрия.

В плодах
шиповника содержание аскорбиновой кислоты определяют титро
-

ванием 0,001 н. раствором 2,6
-
дихлорфе
нолиндофенолята натрия в кислой
среде до появления не исчезающей в течение 0,5

1 мин розовой окраски.

6)

Кислотные свойства кислоты аскорбиновой выраже
ны в достаточной

степени, что позволяет количественно определять лекарственное вещество

алкалиметрически. Кислота аскорбиновая титруется стандартным 0,1 М

раствором натрия гидроксила, как одноосновная кислота по енольному

гидроксилу в 3
-
ем положении:

19



5.2.

Фи
зико
-
химические методы

Для количественной оценки кислоты аскорбиновой в многокомпонентных
образцах со сложной матрицей, следует применять только высокоспецифичные или
сепарационные методы анализа. Метод КЭ является дополнением и в то же время,
альтернативо
й ВЭЖХ, характеризуется высокой эффективностью, малым расходом
недорогих реагентов и простотой эксплуатации, капилляры долговечны и легко
регенерируются. Несомненно, как и любой инструментальный метод, метод КЭ
предполагает материальные затраты на приобре
тение оборудования, однако такое
оборудование является универсальным. Предложенная методика КЭ может быть
использована для контроля качества лекарственного растительного сырья и
лекарственных препаратов, содержащих кислоту аскорбиновую (плоды и сироп
шипов
ника, витаминный сбор №2, листья бархатцев, растворов кислоты
аскорбиновой для инъекций и препарата Аскорутин).

Для количественного определения кислоты аскорбиновой в инъекционных
растворах можно используют более дешевый и доступный
спектрофотометрическ
ий метод с ФМК.

В большинстве современных лабораторий используют следующие методы
количественного определения кислоты аскорбиновой:



Оптические методы

1.

Спектрофотометрический метод на основании свободной кислоты
фосфорномолибденовой.

2.

Высокоспецифичный спектр
офотометрический ферментативный метод
на основе аскорбатоксидазы



Хроматографические методы

1.

Метод ВЭЖХ

20


2.

Капиллярный зональный электрофорез

3.

Мицеллярная электрофонетическая хроматография.

6.

Фармакологическое действие, применение в медицине и хранение
лекарственн
ых препаратов глюкозы.

6.7.

Биологическая роль

Образование коллагена,
серотонина

из
триптофана
, образование
катехоламинов
, синтез
кортикостероидов
. Аскорбиновая кислота также
участвует в превращении
холестерина

в
желчные кислоты
.

Витамин С необходим для
детоксикации

в
гепатоцитах

при участии
цитохрома P450
. Витамин С сам нейтрализует
супероксидный радикал

до
перекиси водорода
.

Восстанавливает
у
бихинон

и
витамин E
. Стимулирует синтез
интерферона
,
следовательно, участвует в
иммуномодулировании
. Переводит
трёхвалентное железо
в двухвалентное, тем самым способствует его
всасыванию.

Тормозит
гликозилирование
гемоглобина
, тормозит превращение глюкозы в
сорбит
.

6.8.

Авитаминоз и гипервитаминоз

Принято считать, что среди
симптомов
нехватки

в

организме витамина
С находятся слабость
иммунной системы
, кровоточивость дёсен, бледность и
сухость кожи, замедленн
ое восстановление тканей после физических
повреждений (раны, синяки), потускнение и выпадение волос, ломкость
ногтей, вялость, быстрая утомляемость, ослабление мышечного тонуса,
ревматоидные боли в крестце и конечностях (особенно нижних, боли в
ступнях), р
асшатывание и выпадение зубов; хрупкость кровеносных сосудов
приводит к кровоточивости дёсен, кровоизлияниям в виде тёмно
-
красных
пятен на коже.

6.9.

Суточная норма потребления

Люди должны получать аскорбиновую кислоту с пищей.
Физиологическая потребность для
взрослых


90 мг/сутки (беременным
21


женщинам рекомендуется употреблять на 10 мг больше, кормящим


на 30
мг). Физиологическая потребность для детей


от 30 до 90 мг/ сутки в
зависимости от возраста. Верхний допустимый уровень потребления в
России


2000 мг/
сутки
. Для курящих людей и тех, кто страдает от
пассивного курения, н
еобходимо увеличить суточную норму потребления
витамина C на 35 мг/сутки.

6.10.

Фармакодинамика

Витаминное средство, оказывает метаболическое действие, не
образуется в организме человека, а поступает только с пищей. Участвует в
регулировании окислительно
-
восстан
овительных процессов, углеводного
обмена, свёртываемости крови, регенерации тканей; повышает устойчивость
организма к
инфекциям
, уменьшает сосудистую проницаем
ость, снижает
потребность в витаминах B
1
, B
2
,
а
, Е, фолиевой кислоте, пантотеновой
кислоте.

Участвует в метаболизме
фенилаланина
,
тирозина
, фолиевой кислоты,
норэпинефрина
,
гистамина
, железа, усвоении
углеводов
, синтезе
липидов
,
белков
,
карнит
ина
, иммунных реакциях, гидроксилировании
серотонина
,
усиливает абсорбцию негемового железа.

Обладает антиагрегантными и выраженными антиоксидантными св
ойствами.

Регулирует транспорт H
+

во многих биохимических реакциях,
улучшает использование глюкозы в цикле трикарбоновых кислот, участвует
в образовании тетрагидрофолиевой кислоты и регенерации тканей, синтезе
стероидных гормонов, коллагена, проколлагена.

Поддерживает коллоидное состояние межклеточного вещества и нормальную
проницаемость капилляров (угнетает гиалуронидазу).

Активирует протеолитические ферменты, участвует в обмене
ароматических аминокислот, пигментов и холестерина, способствует
накоплению в
печени гликогена. За счёт активации дыхательных ферментов
в печени усиливает её дезинтоксикационную и белковообразовательную
функции, повышает синтез протромбина.

22


Улучшает желчеотделение, восстанавливает внешнесекреторную
функцию поджелудочной железы и инк
реторную


щитовидной.

Регулирует иммунологические реакции (активирует синтез антител,
С3
-
компонента комплемента, интерферона), способствует фагоцитозу,
повышает сопротивляемость организма инфекциям.

Тормозит высвобождение и ускоряет деградацию
гистамина
, угнетает
образование Pg и
других медиаторов воспаления,

и аллергических реакций.

В низких дозах (150

250 мг/сут
. внутрь
) улучшает комплексообразующую
функцию д
ефероксамина при хронической интоксикации препаратами Fe,
что ведёт к усилению экскреции последнего.

6.11.

Фармакокинетика

Абсорбируется в
ЖКТ

(преимущественно в тонкой кишке). С
увеличением дозы

до 200 мг всасывается до 140 мг (70 %); при дальнейшем
повышении дозы всасывание уменьшается (50

20 %). Связь с белками
плазмы


25 %. Заболевания ЖКТ (
язвенная болезнь желудка

и
12
-
перстной
кишки
, запоры или диарея, глистная инвазия, лямблиоз), употребление
свежих фруктовых и овощных соков, щелочного питья уменьшают
всасывание аскорбата в кишечнике.

Концентрация аскорбиновой кислоты в плазме в норме составляет
приблизительно 10

20 мкг/мл, запасы в организме


около 1,5 г при
приёме ежедневных рекомендуемых доз и 2,5 г при приёме 200 мг/сут.
TCax после приема внутрь


4 ч.

Легко проникает в лейкоциты,

тромбоциты, а затем


во все ткани;
наибольшая концентрация достигается в железистых органах, лейкоцитах,
печени и хрусталике глаза; депонируется в задней доле гипофиза, коре
надпочечников, глазном эпителии, межуточных клетках семенных желёз,
яичниках, пе
чени, селезёнке, поджелудочной железе, лёгких, почках, стенке
кишечника, сердце, мышцах, щитовидной железе; проникает через
плаценту.Концентрация аскорбиновой кислоты в лейкоцитах и тромбоцитах
выше, чем в эритроцитах и в плазме. При дефицитных состояниях
23


концентрация в лейкоцитах снижается позднее и более медленно и
рассматривается как лучший критерий оценки дефицита, чем концентрация в
плазме.

Метаболизируется преимущественно в печени в дезоксиаскорбиновую
и далее в щавелевоуксусную и дикетогулоновую кисл
оты.Выводится
почками, через кишечник, с потом, грудным молоком в виде
неизменённогоаскорбата и метаболитов.

6.12.

Лекарственные формы

Л
иофилизат 50 мг для приготовления раствора для внутривенного и
внутримышечного введения;

раствор 50 мг/мл, 100 мг/мл для внутривенного и внутримыш
ечного
введения;

раствор 150 мг/мл для внутривенного введения (Витамин С
-
инъектопас);

драже 50 мг;

порошок 1 г, 2,5 г для приготовления раствора для приёма внутрь;

таблетки 25 мг, 50 мг, 75 мг, 100 мг, 500 мг, 2,5 г;

таблетки жевательные 200 мг (Асвитол
), 500 мг (Витамин С 500)

таблетки шипучие 250 мг, 1000 мг;

таблетки шипучие (в ассорт.) 500 мг (Асковит, Целаскон Витамин
С), 1000 мг (Аддитива Витамин С, Асковит).



Выводы по обзору литературы

1.

Изучение литературных данных свидетельствует о бо
льшом
разнообразии методов анализа кислоты аскорбиновой.

2.

Наиболее часто используемыми, для количественного определения
кислоты аскорбиновой остаются различные титриметрические,
спектрофотометрические, фотометрические

и хроматографические

методы.

24


Глава 2.
Методы анализа
кислоты аскорбиновой

в растворе для
инъекций
и их валидация
(
экспериментальная
часть)
.

Любая аналитическая методика должна быть утверждена в
установленном порядке, что подтверждает ее метрологическая аттестация.
Для этой цели в фармацевтической практике испол
ь
зуют метод валидации, то
есть экспериментальн
ое доказательство того, что мет
о
дика пригодна для

выполнения поставленных задач.

Валидации подлежат методики количественного определения, в том числе
методики определения примесей. Методики проверки подлинности
подвергаются валидации при необходимости подт
вердить их специфичность.

При валидации проводится оценка аналитической методики по
перечисленным ниже характеристикам, выбираемым с учетом рекомендаций
табл. :



специфичности (
s
pecificity);



пределу обнаружения или чувствительности (detection
l
imit);



п
ределу количественного определения (
q
uantitation
l
imit);



аналитической области (
r
ange);



линейности (
l
inearity);



правильности (
trueness
);



прецизионности (
precision
);


устойчивости (
r
obustness).


1.

Валидационная оценка методик качественного и коли
чественного
ан
а
лиза
кислоты аскорбиновой в растворе для инъекций

по
показателю Специфичность

Под специфичностью методики следует понимать способность
достоверно определять анализируемое соединение в присутствии других
компонентов обра
з
ца


лекарственных
веществ, вспомогательных веществ и
посторонних примесей (включая потенциально возможные).

Приготовили согласно прописи три модельных смеси (табл. 1)

25


Таблица 1. Приготовление модельных растворов кислоты аскорбиновой

Модельная смесь

1

2

3

Навеска кислоты
а
скорбиновой (г)



5,0

5,0


Трилона Б (г)

0,025


0,025

Натрия гидрокарбоната(г)

2,385


2,385

Натрия сульфита
безводного(г)

0,200


0,200

Воды для инъекций

До 100 мл

До 100 мл

До 100 мл


1.1.
Установление специфичности в тестах Испытание на
подлинность

Для установления специфичности в идентификационных тестах,
основанных на качественных реакциях, следует убедиться как в отсутствии
п
о
ложительного эффекта реакции на сопутствующие вещества, так и в
возможности ингибиров
а
ния данной реакции компонентами обра
зца.

Провели установление специфичности следующих реакций:



К 1 мл
каждой модельной смеси

прибавля
ли

0,5 мл раствора серебра
нитрата (для 5 % раствора);

С модельными смесями 1 и 2 выпадал темно
-
серый осадок (кислота
аскорбиновая), с модельной смесью 3 о
садок не образовывался.



0,2 мл
каждой модельной смеси

разбав
или

10 мл воды и прибав
или

по
каплям раствор натрия 2, 6
-
дихлор
-
фенолиндофенолята;

С модельными смесями 1 и 2
синяя окраска последнего исчеза
ла

(кислота
аскорбиновая)
,

с

модельными смесями
окраск
а сохранялась.

Вывод:

Реакции идентификации соответствуют валидационной оценке по
показателю Специфичность

26


2.2.

Установление специфичности в тестах Количественное
определение

Методики, используемые для количественного определения также
должны подвергаться

валидационной оценке по данному критерию. При
этом для всех типов методик существуют свои особе
н
ности.

Титриметрические методы.

Главным является то, что растворители и
сопу
т
ствующие компоненты не должны вступать в реакцию с титрантом,
кроме того необходим
о убедиться в специфичности индикатора. При анализе
конкретных объектов следует приготовить модельную смесь и провести её
титрование. П
о
скольку, в ряде случаев, затрачивается часть титранта на
взаимодействие с растворит
е
лем, проводится контрольный опыт. На

основании полученных данных принимается решение о специфи
ч
ности
методики.

Провели установление специфичности
иодатометрической методики:

к

1 мл
каждой модельной смеси

прибавили

5 мл воды, 0,15 мл 1% раствора
формальдегида, 2 мл 2% раствора кислоты хлоров
одородной, 0,5 мл 1%
раствора калия йодида, 2 мл крахмала и тир
овали

0,0167 моль/л раствором
йодата калия до появления светло
-
синего окрашивания, не исчезающего в
течение 30 сек.

При этом установлено, что на титрование модельной смеси 1 и 2
затрачены рав
ные количества титранта, модельная смесь 3 в данных
условиях не титруется.

Провели установление специфичности
иодатометрической методики:

к

1

К 1,0 мл
каждой модельной смеси

прибавляют 5 мл воды и титруют
0,05 М раствором йода до слабо
-
желтого окрашивания
, не исчезающего в
течение 30 сек.

При этом установлено, что на титрование модельной смеси 1 и 2
затрачены равные количества титранта, модельная смесь 3 в данных
условиях не титруется.


27


3.

В
алидационная оценка методики анализа кислоты
аскорбиновой
йодат
ометрическим методом

МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

К 1 мл препарата прибавляют 5 мл воды, 0,15 мл 1% раствора
формальдегида, 2 мл 2% раствора кислоты хлороводородной, 0,5 мл 1%
раствора калия йодида, 2 мл крахмала и тируют 0,0167 моль/л раствором
йодата калия до появления светло
-
синего окрашивания, не исчезающего в
течение 30 сек.

1 мл 0,0167 М раствора калия йодата соответствует 0,008824 г

кислоты
аскорбиновой.

Расчет теоретического объема титранта проводят по формуле:












(1)
;

Где
V



теоретический объем титранта


а


навеска


K



поправочный коэффициент титранта


в


содержание кислоты аскорбиновой в лекарственной форме


P



1
мл раствора

Расчет содержания кислоты аскорбиновой в 1 мл раствора проводили по
формуле:












(
2
)
;

Где
V



практический объем титранта


а


навеска


K



поправочный коэффициент титранта


b



содержание кислоты аскорбиновой в лекарственной форме


P



1
мл
лекарственной

формы




28


3.1.

Валидационная оценка методики анализа кислоты
аскорбиновой
в р
астворе

йодатометрическим методом по
показателю Линейность.

Линейность методики


это наличие прямой пропорциональной
зависимости аналитического сигнала от концентрации или количества
определяемого вещества в анализируемой пробе.

Линейность выражается ур
авнением
у 
ax

+
b
. Это уравнение
называют линейной регрессией. Параметр
b

градуировочной функции
характеризует отрезок, отсекаемый на оси ординат и соответствующий
значению холостого опыта, а коэффициент
a

характеризует наклон
градуировочной кривой и явл
яется отражением чувствительности методики.

Расчет коэффициентов
градуировочного графика проводили

по формулам и
данным таблицы
1
:


(3)



(4)

Построение градуировочного графика

Точную навеску кислоты аскорбиновой

(5 г) помеща
ли

в мерную колбу
вместимостью 100 мл, растворя
ли в воде, доводил

водой до метки и
перемешива
ли

(раствор А).

На титрование отмери
ли

последовательно 0,50 мл; 1,0 мл; 1,5 мл; 2,0
мл; 2,5 мл раствора А (0,075 г; 0,010 г; 0,125 г; 0,150 г; 0,175 г
.) и провод
или

определение по методике описанной для количественного оп
ределения
кислоты аскорбиновой.

Данные зан
е
с
ли

в таблицу

2
.




29


Таблица
2
. Результаты титриметрического определения кислоты
аскорбиновой йодатометрическим методом

Объем 5% раствора А (мл
)

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

Содержание кислоты
аскорбиновой г/ в навеске

0,025

0,05

0,075

0,1

0,125

Объем 0,167 М йодата калия (мл)

2,5

5,1

8,9

11,0

13,1


Построили

градуировочный график зависимости концентраций от
объема титранта, рассчит
али

уравнение град
уировочного графика и
коэффициент корреляции.


Рисунок 1

-


Градуировочный график зависимости
объема титранта

от концентрации
кислоты аскорбиновой.

Основной характеристикой линейности является коэффициент
корреляции


мера взаимосвязи измеренных явлений.
Коэффициент
корреляции (обозначается r) рассчитывается по специальной формуле:


(5)


y = 113,61x
-

5,7118

0
2
4
6
8
10
12
14
0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,1
0,12
0,14
0,16
0,18
0,2
V,
мл

а,г

30


При математической обработке рассчитали величину коэффициента
корреляции
r
.

Коэффициент корреляции

составил:

r
=

0,99
2039
.


Полученные результаты показали, что существует линейная
зависимость между навеской
к
ислоты
аскорбиновой
и объемом титранта


0,
05

М раствором

йода
.

Как известно, д
ля аналитических целей можно использовать только ту
методику, для которой зависимость функции от а
ргумента коррелируется с
коэффициентом
r
, который должен быть ≥0,99.


2.2.

Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой
в растворе йодатометрическим методом

по показателю
Правильность.

Правильностью

аналитической методики называется степень
близости
эксп
е
риментальных результатов к истинному значению во всей области
измерений. Главным фактором, определяющим правильность, является
значение систематической погре
ш
ности.

Согласно рекомендациям
ICH

необходимо проанализир
о
вать не менее 9
образцов на

3 уровнях концентраций. Правильность методики
устанавливается в указанном диапазоне ее применения. Для оценки
полученных резул
ь
татов наиболее простым и наглядным критерием служит
открываемость (
R
),
которая вычисляется по форм
у
ле:


При
проведении анализа будут получены 9 значений открываемости.

Для более детальной оценки следует статистически обработать
полученные значения
R
, рассчитав стандартное

(
SD
)
,
относительное
стандартное отклонение

(
R
SD
)
и коэффициент Стьюдента по формуле:







где


-

истинное значение определяемой величины;


-

среднее значение определяемой величины;

31



m


объем выборки;


S
D



стандартное отклонение

Для тестирования методики на правильнос
ть готов
или

три модельные
смеси из разных навесок с точным содержанием каждого из компонентов,
включая и вспомогательные вещества

(таблица
3
)
.

Таблица
3
. Приготовление модельных растворов кислоты аскорбиновой

Модельная смесь

1

2

3

Навеска кислоты аскорби
новой (г)

4,0

5,0

6,0

Трилона Б (г)

0,02

0,025

0,03

Натрия гидрокарбоната

(г)

1,908

2,385

2,862

Натрия сульфита безводного

(г)

0,16

0,200

0,24

Воды для инъекций

До 100 мл

До 100 мл

До 100 мл


Раствор А
1

(модельная смесь 1)
Точные навески кислоты ас
корбиновой (4,0


г), трилона Б (0,02г), натрия гидрокарбоната (1,908г) и натрия сульфита
(0,16 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде
при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.

Раствор А
2

(модельная смесь 2)
Точны
е навески кислоты аскорбиновой (5,0
г), трилона Б (0,025 г), натрия гидрокарбоната (2,385 г) и натрия сульфита
(0,200 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде
при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.

Раствор А
3

(
модельная смесь 3)
Точные навески кислоты аскорбиновой (6,0
г), трилона Б (0,03 г), натрия гидрокарбоната (2,862г) и натрия сульфита
(0,24г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде
при нагревании на водяной бане и доводят водой д
о метки.

Проводят 3 параллельных титрования на трех уровн
ях концентраций (9
определений)

по
следующей
метод
ике количественного определения:

К 1 мл
каждой из модельных смесей (А
1,
А
2,
А
3
)

прибавляют 5 мл воды,
0,15 мл 1% раствора формальдегида, 2 мл 2% рас
твора кислоты
хлороводородной, 0,5 мл 1% раствора калия йодида, 2 мл крахмала и тируют
32


0,0167 моль/л раствором йодата калия до появления светло
-
синего
окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.

1 мл 0,0167 М раствора калия йодата соответствует 0,0088
24 г

кислоты
аскорбиновой.

Расчет содержания кислоты аскорбиновой (г
/мл
) проводят по формуле:












где:
V


объем титранта, мл;


К


поправочный коэффициент;


Т


титр
калия
йодата по определяемому веществу, г/мл;


а


навеска модельн
ой см
еси, взятая на анализ, мл.

Результаты зан
если

в таблицу №
4

и рассчит
али

открываемость,
стандартное отклонение
,
относи
тельное стандартное отклонение

и
коэффициент Стьюдента.


Таблица
4



Результаты определения правильности м
е
тодом

йодатометрии


п/п

Ур
о
ве
нь

Взято
м
о
дельно
й смеси,

(г или

мл)

Взято
лекарственного
в
е
щества, г

Объем
ти
т
ранта,
мл

Найдено
лека
р
ств
енного
веществ
а, г

Откры
ваемос
ть

Метрологи
-
ческие
характерис
-
тики

1

1

1,0 мл

0,04

4,9

0,0406

101,4


̅
=
100,4

SD
=
1,913

RSD
=
1,27

t
=0.94



2

1

1,0 мл

0,04

5,8

0,0474

102,3

3

1

1,0 мл

0,04

5,0

0,0
4
12

103,5

4

2

1,0 мл

0,05

5,
7

0,0498

99,6

5

2

1,0 мл

0,05

5,9

0,0488

97,7

6

2

1,0 мл

0,05

6,1

0,0502

100,4

7

3

1,0 мл

0,06

7,4

0,0607

101,6

8

3

1,0 мл

0,06

7,2

0,0590

98,4

9

3

1,0 мл

0,06

7,2

0,0595

99,1


33


Т.о.

должно находиться в пределах от 98 до 102,

следовательно,
данная методика

соответствует валидационной характеристике
правильность.

Поскольку t 0,
94

(95%,
f
) =2,31
,

что позволяет считать результаты
выборки результатов свободными от систематической о
шибки.


3.2.

Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой

в растворе
йодатометрическим методом

по показателю
Прецизионность

Приготовили

модельный раствор кислоты аскорбиновой №2.

Определение №1
.

Пров
ели

3 параллельных титрования, отмеривая ка
ждый раз по 0,5 мл ЛП.

Определение №2
.

Пров
ели

3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 1,0 мл ЛП.

Определение №3
.

Пров
ели

3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 1,5 мл ЛП.

Расчет содержания
кислоты аскорбиновой

(г) пров
ели

по формул
е
приведенной при определении правильности.

Результаты зан
если

в таблицу №
5

и рассчитали

стандартное отклонение (
SD
)
и относительное стандартное отклонение (
RSD
).










34


Таблица
5
. Результаты определения прецизионности кислоты
аскорбиновой методом йодатометр
ии.

Навеска
для
анализа


Объем

титра
н
та,
мл

Найдено,

г
/мл



Метрологические
характеристики

0,025

3,1

0,0509

0,0001

0,0000001


̅
=
0.051

SD
=
0.01

RSD
=
1.68


0,025

3,2

0,051

0

0

0,025

3,0

0,049

0,002

0,00004

0,05

6,0

0,0486

0,0024

0,000057

0,05

6,3

0,051

0

0

0,05

6,0

0,048

0,003

0,00009

0,075

9,1

0,049

0,002

0,00004

0,075

9.3

0,0504

0,0006

0,0000003

0,075

9.7

0,0511

0,0001

0,0000001


В результате проведенных исследований установлено, что
RSD

соо
тветствует по показателю прецизионность.


















35


3.В
алидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой
йодиметрическим методом

МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

К 1,0 мл препарата прибавляют 5 мл воды и титруют 0,05 М раствором
йода до слабо
-
желтог
о окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.

1

мл 0,05 М раствора йода соответствует 0,008824 г кислоты
аскорбиновой.

3.1.

Валидационная оценка методики анализа кислоты
аскорбиновой в растворе
иодиметрическим

методом по
показателю Линейность.

Построение градуировочного

графика

Точную навеску кислоты аскорбиновой (5 г) помещают в мерную
к
олбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки и
перемешивают (раствор А).

На титрование отмеривают последовательно 0,50 мл; 1,0 мл; 1,5 мл; 2,0
мл; 2,5 мл раствора А (0,075 г; 0,010 г; 0,125 г; 0,150 г; 0,175 г.) и проводят
определени
е по методике описанной для количественного определения
кислоты аскорбиновой.


Данные зан
е
с
ли

в таблицу

6
.

Таблица
6
. Результаты титриметрического определения кислоты
аскорбиновой йод
и
метрическим методом

Объем 5% раствора А (мл)

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

С
одержание кислоты
аскорбиновой г/ в навеске

0,025

0,05

0,075

0,1

0,125

Объем 0,05 М йода (мл)

2,5

5,1

8,9

11,0

13,1


Построили

градуировочный график зависимости концентраций от
объема титранта, рассчит
али

уравнение градуировочного графика и
коэффициент

корреляции.


36



Рисунок
2
-


Градуировочный график зависимости
объема титранта

от концентрации
кислоты аскорбиновой.

При математической обработке рассчитали величину коэффициента
корреляции
r
.

Коэффициент корреляции

составил:

r
=

0,99
66


Полученные результаты показали, что существует линейная
зависимость между навеской
к
ислоты
аскорбиновой
и объемом титранта


0,
05

М раствором

йода
.


3.2.

Валидационная оценка методики анализа

кислоты аскорбиновой
в растворе йод
и
метрическим методом по показателю Правильность.

Приготов
или

три модельных раствора кислоты аскорбиновой

(
табл.
7
)
.

Таблица
7
. Приготовление модельных растворов кислоты аскорбиновой

Модельная смесь

1

2

3

Навеска кислоты
аск
орбиновой (г)

4,0

5,0

6,0

Трилона Б (г)

0,02

0,025

0,03

Натрия
гидрокарбоната

(г)

1,908

2,385

2,862

Натрия сульфита
безводного

(г)

0,16

0,200

0,24

Воды для инъекций

До 100 мл

До 100 мл

До 100 мл

y = 113,61x
-

5,7118

0
2
4
6
8
10
12
14
0
0,05
0,1
0,15
0,2
V, vk

а,г

37


Раствор А
1

(модельная смесь 1)
Точные навески кислоты
аскорбиновой (4,0


г), трилона Б (0,02г), натрия гидрокарбоната (1,908г) и натрия сульфита
(0,16 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде
при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.

Раствор А
2

(модельная смесь 2)
Точ
ные навески кислоты аскорбиновой (5,0
г), трилона Б (0,025 г), натрия гидрокарбоната (2,385 г) и натрия сульфита
(0,200 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде
при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.

Раствор А
3

(модельная смесь 3)
Точные навески кислоты аскорбиновой (6,0
г), трилона Б (0,03 г), натрия гидрокарбоната (2,862г) и натрия сульфита
(0,24 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде
при нагревании на водяной бане и доводят водо
й до метки.

Провод
или

3 параллельных титрования на трех уровнях
концентраций
(9 определений).

К 1,0 мл
каждой из модельных смесей (А
1,
А
2,
А
3
)


прибавляют 5 мл
воды и титруют 0,05 М раствором йода до слабо
-
желтог
о окрашивания, не
исчезающего в течение 30 сек.

1 мл 0,05 М раствора йода соответствует 0,008824 г кислоты аскорбиновой.

1 мл 0,0167 М раствора калия йодата соответствует 0,008824 г

кислоты
аскорбиновой.

Расчет содержания к
ислоты аскорбиновой (г
/мл
) проводят по формуле:












где:
V


объем титранта, мл;


К


поправочный коэффициент;


Т


титр
йода

по определяемому веществу, г/мл;


а


навеска модельн
ой смеси, взятая на анализ, мл.


Р
-

1 мл

38


Результаты зан
если

в таблицу №
8

и рассчит
али

открываемость,
стандартное отклонение
,

относи
тельное стандартное отклонение

и
коэффициент Стьюдента.

Таблица
8



Результаты определения правильности м
е
тодом

йодиметрии


п/п

Ур
о
ве
нь

Взято
м
о
дельно
й смеси,

(г или мл)

Взято
лекарственного
в
е
щества, г

Объем
ти
т
ран
та,
мл

Найдено
лека
р
ств
енного
веществ
а, г

Откры
ваемос
ть

Метрологические
характеристики

1

1

1,0 мл

0,04

4,86

0,0395

98,75


̅
=
100,
2
4

SD
=
1,9
4

RSD
=
1,2
0

t
=
0.
6



2

1

1,0 мл

0,04

4,50

0,0398

99,7

3

1

1,0 мл

0
,04

4,53

0,0408

100,25

4

2

1,0 мл

0,05

5,70

0,0503

100,6

5

2

1,0 мл

0,05

5,65

0,0500

102,1

6

2

1,0 мл

0,05

5,65

0,0500

103,9

7

3

1,0 мл

0,06

6
,80

0,0602

100,33

8

3

1,0 мл

0,06

6,70

0,0592

97,07

9

3

1,0 мл

0,06

6,75

0,0597

99,5


Т.о.

должно находиться в пределах от 98 до 1
02,

следовательно,
данная методика

соответствует валидационной характеристике
правильность.

Поскольку t 0,
6

(95%,
f
) =2,31
,

что позволяет считать результаты
выборки результатов свободными от систематической ошибки.





39


3.3.

Валидационная оценка методики анализа

кислоты аскорбиновой
в растворе йод
и
метрическим методом по показателю 
Прецизионность
.

Приготов
или

модельн
ый раствор кислоты аскорбиновой №2.

Определение №1
.

Проводят 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 0,5 мл ЛП.

Определение №2
.

Проводят 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 1,0 мл ЛП.

Определение №3
.

Пров
ели

3 параллельных титро
вания, отмеривая каждый раз по 1,5 мл ЛП.

Расс
читали

содержани
е

кислоты аскорбиновой


/мл
)
,

стандартное
отклонение (
SD
) и относительное стандартное отклонение

(
RSD
).

Таблица
5
. Результаты определения прецизионности кислоты
аскорбиновой методом йод
и
метр
ии.

Навеска
для
анализа


Объем

титра
н
та,
мл

Найдено,

г
/мл



Метрологические
характеристики

0,025

3,1

0,0499

0,0001

0,0000001


̅
=
0.0
496

SD
=
0.0
007

RSD
=
1,41


0,025

3,2

0,0501

0

0

0,025

3,0

0,0493

0,002

0,00004

0,05

6,0

0,0486

0,0024

0,000057

0,05

6,3

0,0491

0

0

0,05

6,0

0,0508

0,003

0,00009

0,075

9,1

0,0496

0,002

0,00004

0,075

9.3

0,0501

0,0006

0,0000003

0,075

9.7

0,0491

0,0001

0,0000001


В результате проведенных исследований установлено, что
RSD

соо
тветствует по показателю прецизионность.



40


Общие выводы.

1.

Прове
дена
валидационная оценка методик качественного и
количественного анализа кислоты аскорбиновой
5% в растворе для
инъекций.

2.

Реакции идентификации соответствуют по показателю специфичность.

3.

Полученные
результаты

показали что методика йодатометрического
метода
:

соответствует по показателям специфичность, линейность,
прецизионность, правильность.

4.

Полученные
результаты

показали что методика йод
иметрического
метода
:

соответствует по показателям специфичность, линейность,
прецизионность, правильность.




















41


Литература

1.

Беликов, В.Г. Фармацевтическая химия. /В.Г Беликов. В 2 ч.: Ч. 1. Общая
фармацевтическая химия; Ч. 2. Специальная фармацевтическая химия.
Учеб для вузов.


Пятигорск. 2003.


720 с.

2.

Влияние химических веществ, содержащихся в биологичес
ких пробах и
лекарственных препаратах, на результаты количественного определения
аскорбиновой кислоты / Е.В. Зыкова
, Г.П. Дудченко, В.Г. Зайцев,
О.В.Островский
// Вестник ВолГМУ.


2009.
-

№4.
-

С.103
-
106.

3.

Государственная фармакопея Российской Федерации
/ изд
-
во Научный
центр экспертизы средств медицинского применения, 2008.


704 с.

4.

Государственная фармакопея СССР


10

изд.


М.: Медицина, 1968.


1078 с.

5.

Государственная фармакопея СССР. Вып 1. Общие методы анализа / МЗ
СССР.


11
-
е изд. доп.


М.: Медиц
ина, 1987.
-
336 с.

6.

Государственная фармакопея СССР. Вып 2. Общие методы анализа.
Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР.


11
-
е изд. доп. М.:
Медицина, 1989.
-

400 с.

7.

Зыкова, Е.В. Анализ аскорбиновой кислоты в лекарственных препаратах
растительного про
исхождения с использованием мицеллярной
электрокинетической хроматографии / Е.В. Зыкова, Г.П. Дудченко, О.В.
Островский О.В. // Актуальные проблемы современной науки.
Материалы 8 международной научно
-
практической конференции. Вып.
44.


Польша, 2012.


С.6
3
-
66.

8.

Зыкова, Е.В. Влияние органических веществ на результаты
количественного определения аскорбиновой кислоты в пробе / Е.В.
Зыкова, А.В. Мекеня, Л.В. Самсонова // Актуальные проблемы
экспериментальной и клинической медицины. Материалы 64
-
й открытой
нау
чной конференции.


Волгоград, 2006.
-

С. 68
-
69.

9.

Зыкова, Е.В. Влияние органических кислот и фенольных соединений на
результаты количественного определения аскорбиновой кислоты / Е.В.
42


Зыкова, Л.В. Самсонова // Материалы 10 региональной конференции
молодых

исследователей Волгоградской области.


Волгоград, 2005.
-

С.26
-
27.

10.

Зыкова, Е.В. Влияние стабилизирующих веществ на результаты
количественного определения аскорбиновой кислоты / Е.В. Зыкова //
Материалы 13 региональной конференции молодых исследователей
В
олгоградской области.


Волгоград, 2008.
-

С.36
-
38

11.

Зыкова, Е.В.

Использование метода капиллярного электрофореза для
количественного анализа аскорбиновой кислоты в витаминных сборах /
Е.В.
Зыкова, О.В.
Островский // Перспективные разработки науки и
техники.

Материалы 7 международной научно
-
практической
конференции. Вып. 48.


Польша, 2011.


С. 44
-
46.

12.

Зыкова, Е.В. Оценка влияния сопутствующих веществ пробы на
результаты количественного определения аскорбиновой кислоты
различными методами) Е.В.Зыкова // Персп
ективные направления
физико
-
химической биологии и биотехнологии. Материалы 19 зимней
молодежной научной школы.


Москва, 2007.


С. 52
-
52
.

13.

Зыкова, Е.В. Оценка возможности применения спектрофотометрического
метода на основе свободной фосфорномолибденовой
кислоты для
количественного определения аскорбиновой кислоты в инъекционных
формах / Е.В. Зыкова,
Г.П. Дудченко, В.Г. Зайцев, О.В. Островский //
Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической
продукции. Вып. 64: сб. науч. тр.


Пятигорск, 2009
.


С. 280
-
281.

14.

Кулешова, М.И. Анализ лекарственных форм, изготовленных в аптеках /
М.И. Кулешова, Л.Н. Гусева, О.К. Сивицкая. Пособие. Изд. 2
-
е, перераб.
и доп..


М.: Медицина, 1989.


288 с.

15.

Лабораторные работы по фармацевтической химии: Учебное пособи
е
/В.Г. Беликов [и др.].


2
-
е изд. перераб. и доп.


Пятигорск, 2003.


342 с.

16.

Лекарственные растения и лекарственное растительное сырье,
содержащие витамины, полисахариды, жирные масла /
Учебно
-
43


методическое пособие для самостоятельной работы студентов
ф
армацевтического факультета // Издательско
-
полиграфический центр
Воронежского государственного университета.


2008.
-

88 с.

17.

Машковский, М.Д. Лекарственные средства: в 2 т./М.Д. Машковский.
-

18
-
е изд., перераб. и доп.
-

М.: Новая волна, 2010.


1234 с.

18.

Ме
лентьева Г.А., Антонова Л.А. Фармацевтическая химия.


М.:
Медицина, 1985.


480 с.

19.

Методы анализа лекарств /Н.П. Максютина [и др.].


Киев: Здоровья,
1984.


224 с.

20.

Метрологическая аттестация (валидация) методик анализа лекарственных
средств


Пятигорск:
Пятигорский филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ МЗ РФ,
2013.


108 с.

21.

Определение аскорбиновой кислоты в лекарственных препаратах
методами капиллярного зонного электрофореза и мицелллярной
электрокинетической хроматографии / Е.В. Зыкова, Н.Г. Сандецкая, В.Е
Веровски
й., О.В. Островский // Химико
-
фармацевтический журнал.


2010.
-

Т.44, №8.


С. 39
-
41.

22.

Оптимизация спектрофотометрического метода для количественного
определения аскорбиновой кислоты в лекарственных формах / Е.В.
Зыкова,
В.Е Веровский., Г.П. Дудченко,

О.В.О
стровский
// Химико
-
фармацевтический журнал.
-

2009.
-

Т43, № 6.
-

С. 63
-
65.

23.

ОФС 42
-
0113
-
09. Валидация аналитических методик.

24.

Оценка правильности количественного определения кислоты
аскорбиновой в плодах шиповника тремя колориметрическими методами
/ Е.В. З
ыкова, Г.П. Дудченко, В.Г. Зайцев, Е.В. Денежко, О.В. Островский
// Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической
продукции: сб. науч. тр.


Пятигорск, 2008.


Вып. 63.


С. 254
-
255.

25.

Погодина, Л.И. Анализ многокомпонентных лекарственных форм.
/Л.И.
Погодина.


Минск, Выш. шк., 1985.


240 с.

44


26.

Растительные лекарственные средства / Максютнна Н. П.. Ко
-

инссарснко Н. Ф., Прокопенко А. П. и др.; Под ред. Н. П. Мак
-

сютиной.


К.: Здоров'я. 1985.


280 с.

27.

Руководство для предприятий фармацевтической пр
омышленности /
методические рекомендации. М.:


Издательство Спорт и Культура
-

2000, 2007. 192 с.

28.

Ся Юй

Физико
-
химические методы в анализе водорастворимых
витаминов (сравнительная оценка) / авт.

дисс. канд. фармац. наук. М.


2010.


24 с.

29.

Фармацевтическая химия. Учеб.пособие / Под. Ред. А.П. Арзамасцева.


М.:
ГЭОТАР
-
МЕД, 2004.


640 с.

30.

Фармацевтическая химия: Учебник для слуд. сред. проф. у
чеб. заведе
-

ний / Н. Н. Глушенко, Т. В. Плетенева, В. А. Попков; Под ред. Т. В.
Плете
-

невой.


М.: Издательский центр Академия, 2004.


384 с.

31.

http://grls.rosminzdrav.ru/default.aspx

32.

http://ru.wikipedia.org/





Приложенные файлы

  • pdf 1206366
    Размер файла: 1 MB Загрузок: 1

Добавить комментарий